国家自然科学基金(30872388)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：张伟杰李永海李明陈栋向莹更多>>
- 相关机构：华中科技大学郑州人民医院安徽医科大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 输注胰岛抗原特异性Treg细胞延长同系NOD小鼠移植胰岛的存活时间被引量：1
- 2013年
- 目的探讨输注胰岛抗原特异性调节性T淋巴细胞（Treg细胞）对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠同系胰岛移植物存活时间的影响。方法n以未成熟树突状细胞（imDc）联合谷氨酸脱羧酶一65在体外诱导童贞T淋巴细胞分化成胰岛抗原特异性Treg细胞。以已发生糖尿病的NOD小鼠为受者，将分离得到的尚未进展为糖尿病的NOD小鼠的胰岛（500胰岛当量）移植至受者的肾包膜下，对照组不行移植，只观察血糖变化；单纯胰岛移植组只进行胰岛移植，不输注胰岛抗原特异性Treg细胞；实验组于术前1d静脉输注1×10^6个胰岛抗原特异性Treg细胞，然后进行胰岛移植。术后检测受者的血糖，以判断移植胰岛的存活时间，观察胰岛移植物的病理学变化。结果对照组血糖持续高于11．1m01／L；单纯胰岛移植组小鼠的血糖于术后1～2d降至正常，到7～17d时开始陆续升高，并维持在术前水平，移植物存活时间为（12．2±2．6）d；实验组小鼠的血糖于术后1～2d降至正常，至第27天开始有小鼠血糖升高超过11．1mmol／L第43天时，所有小鼠的血糖均超过11．1mmol／L，移植物的存活时间为（35．2±4．3）d，明显长于单纯胰岛移植组（P〈0．01）。单纯胰岛移植组的移植胰岛有明显的淋巴细胞浸润，并伴有胰岛细胞严重破坏，胰岛素染色未见完整的胰岛存在，仅有极少量残存的分泌胰岛素的胰岛细胞；实验组第15天时移植胰岛形态完整，仅有少量淋巴细胞浸润，分泌胰岛素的胰岛大量存在。结论体外诱导产生的胰岛抗原特异性Treg细胞可以延缓自身免疫系统对移植胰岛的破坏，明显延长NOD小鼠移植胰岛的存活时间。
- 李永海张淦水丽君房爱芳郭峰向莹张伟杰
- 关键词：胰岛移植
- 小鼠胰岛的分离与纯化被引量：4
- 2011年
- 目的 探讨稳定、高效的小鼠胰岛细胞的分离纯化方法.方法 采用胆总管内灌注不同浓度胶原酶（分别为0.5、1.0、1.5 g/L）消化胰腺的方法分离BALB/C小鼠胰岛,Ficoll-400不连续密度梯度离心法纯化胰岛.双硫腙（DTZ）对胰岛进行特异性染色计算胰岛产量及纯度,葡萄糖刺激释放试验体外测胰岛功能.结果 不同浓度的胶原酶在不同时间内消化胰腺后收获的胰岛数量有较大的差异,其中采用0.5 g/L胶原酶V、38 ℃水浴消化20 min组收获量最大为（230±20）个胰岛细胞团,纯度约为90%.DTZ染色后胰岛呈腥红色,形态完整.葡萄糖刺激释放实验示高糖刺激后胰岛素释放量为低糖刺激后的2.3倍.结论 胶原酶浓度、消化时间和温度是影响小鼠胰岛分离结果的重要因素,当胶原酶浓度为0.5 g/L,消化时间20 min时可获得数量较多,纯度较好的胰岛细胞.
- 李明陈栋李永海张伟杰
- 关键词：胰岛纯化
- 胰岛细胞与供者抗原特异性调节性T细胞共移植
- 2011年
- 胰岛移植是治疗1型糖尿病（ Type 1 diabetes, T1DM）的一种很有前途的方法。近年来按照 Edmond 方案进行的移植，已大大提高了1年不依赖胰岛素率，但远期疗效仍然很低[1]。即使在目前全球效果最好的加拿大？Edmonton？Alberta？大学，其5年不依赖胰岛素率也只有8.5﹪[2]。远期疗效欠佳的重要原因之一便是成功的胰岛移植除了要克服同种排斥反应外，还必须控制糖尿病个体的自身免疫损伤[3]，这与心脏、肝脏和肾脏等其它脏器移植是绝然不同的。
- 张伟杰李明王海灏
- 关键词：调节性T细胞共移植抗原特异性胰岛细胞供者自身免疫损伤
- NOD小鼠未成熟树突状细胞体外诱导淋巴细胞生成并扩增调节性T细胞的研究被引量：2
- 2011年
- 目的探索非肥胖糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)诱导并扩增调节性T细胞(regulatory Tcells,Treg)的优化方案。方法分离、培养NOD小鼠骨髓来源的imDC和淋巴细胞,并进行混合淋巴细胞培养,分别加入白介素(IL)-2、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、抗CD3抗体和抗CD28抗体刺激淋巴细胞增殖、分化。实验分为4组:对照组(淋巴细胞+IL-2)、实验1组(淋巴细胞+imDC+TGF-β1+IL-2)、实验2组(淋巴细胞+imDC+抗CD3抗体+抗CD28抗体+IL-2)、实验3组(淋巴细胞+imDC+抗CD3抗体+抗CD28抗体+TGF-β1+IL-2)。用流式细胞仪检测各组培养3d后淋巴细胞的扩增情况及混合培养6d淋巴细胞中CD4、CD25及Foxp3的表达。结果 imDC和淋巴细胞混合培养3d后,对照组、实验1组、实验2组和实验3组增殖指数分别为(1.04±0.03)%、(1.26±0.02)%、(1.36±0.01)%和(1.55±0.02)%。实验3组的增殖指数较实验1组和实验2组明显升高(均为P<0.01)。混合培养6d后,对照组、实验1组、实验2组和实验3组的CD4+CD25+T淋巴细胞亚群所占比例分别为(2.41±0.02)%、(17.98±1.02)%、(30.67±2.68)%、(42.84±1.41)%,而CD4+CD25+T淋巴细胞中Foxp3+细胞的比例4组分别为(65.55±1.41)%、(86±1.72)%、(70.29±1.39)%、(92.3±1.99)%,实验3组的淋巴细胞CD4+CD25+、Foxp3+的表达水平较实验1组和实验2组明显升高(均为P<0.01)。结论在imDC和淋巴细胞混合培养时加入TGF-β1、抗CD3抗体、抗CD28抗体可明显刺激imDC诱导扩增Treg,是体外诱导扩增Treg的理想方案之一。
- 李永海张淦李明陈栋向莹郭晖张伟杰
- 关键词：未成熟树突状细胞非肥胖糖尿病抗CD3抗体调节性T细胞
