国家自然科学基金(30971366)
- 作品数：8 被引量：46H指数：4
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- ANCA诱导中性粒细胞释放正五聚素蛋白3
- 2014年
- 目的:研究正五聚素蛋白3(PTX3)在中性粒细胞的表达及释放情况,为进一步探讨PTX3在抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性小血管炎(AAV)中的作用及机制奠定基础。方法:采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心分离健康志愿者和AAV患者外周静脉血中性粒细胞,通过健康人血清、AAV患者血清、TNF-α和溶酶体膜蛋白2(LAMP-2)抗体分别刺激健康人外周血中性粒细胞,ELISA检测培养上清PTX3水平,免疫荧光观察中性粒细胞胞外捕网(NETs)的形成,激光共聚焦显微镜检测可溶性识别受体PTX3的表达。结果:LAMP-2抗体及AAV患者血清均能促进中性粒细胞PTX3的释放。与正常中性粒细胞对照组相比,LAMP-2抗体刺激组中性粒细胞上清PTX3水平明显升高(P<0.01);AAV患者血清刺激组中性粒细胞中PTX3表达的荧光强度显著高于用健康人血清刺激的对照组(P<0.01),进一步通过激光共聚焦显微镜进行形态学观察,发现PTX3由中性粒细胞通过NETs形成释放。结论:PTX3可由ANCA诱导的NETs释放至胞外,参与血管炎的病理生理过程。
- 谢京唐莎张莹尹仕伟高雪静施维维王莉邹丽云吴玉章张静波
- 关键词：中性粒细胞抗中性粒细胞胞浆抗体血管炎
- FimH融合蛋白诱导大鼠肾小球局灶坏死性损伤的机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨细菌FimH融合蛋白诱导大鼠肾小球局灶坏死性损伤的可能机制。方法采用纯化的大肠杆菌FimH1-156融合蛋白（150μg）联合Titermax金佐剂（150μl）皮下注射免疫Wistar—Kyoto（WKY）大鼠，对照组采用PBS（150μl）联合Titermax金佐剂（150μl）。监测各时间点（0、3、7、14、21、28、35、50d）大鼠24h尿蛋白量（mg）的变化，于免疫后21d、35d和50d处死大鼠，检测大鼠血清BUN、Scr、尿酸（UA）水平，观察肾、肺组织病理变化，ELISA法检测血清白细胞介素（IL）-17A水平。结果（1）模型组大鼠24h尿蛋白量在免疫后第3天开始升高，第7、35、50天时显著高于对照组[（8．59±1．25）mg比（3．08±1．08）mg、（10．33±1．10）mg比（6．40±0．61）mg、（12．45±1．73）mg比（5．93±0．83）mg，均P〈0．05]。（2）免疫后50d，模型组大鼠血清BUN、Scr、UA水平均显著高于对照组[（6．76±0．20）mmol／L比（5．82±0．13）mmol／L、（58．00±1．53）μmol／L比（25．67±1．45）μmol／L、（61．67±7．27）μmol／L比（31．33±2．73）μmol／L，均P〈0．05]。（3）免疫后35d，肾脏组织显示局灶坏死，肺泡壁增厚、部分断裂及炎性细胞浸润，免疫后50d肾小球新月体形成。（4）免疫WKY大鼠35、50d后，模型组血清IL-17A水平均显著高于对照组[（46．97±5．00）ng／L比（11．27±2．67）ng／L、（41．95±5．51）ng／L比（16.31±1．64）ng／L，均P〈0．05]。（5）线性回归分析显示模型组大鼠血清IL-17A与24h尿蛋白量呈正相关（r=0．557，P=0．021）。结论细菌FimH融合蛋白诱导大鼠肾小球局灶坏死性损伤及肺损伤，IL-17A参与了FimH融合蛋白诱导的大鼠肺、肾损伤过程。
- 尹仕伟张莹唐莎邹丽云高雪静张晋宇吴玉章张静波
- 关键词：血管炎白细胞介素-17
- ANCA相关性血管炎的免疫发病机制新进展被引量：18
- 2013年
- 抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)相关性系统性血管炎(ANCA-associatedsystemic vasculitis,AASV)是典型的自身免疫疾病,其发病机制包括天然免疫和获得性免疫的共同参与。大量临床及实验证据显示ANCA不仅是AASV的血清学标志,也在血管及组织损伤中起核心作用。本文就ANCA作用模式、感染与分子模拟、病原体相关分子模式识别、补体系统及三级淋巴组织参与免疫发病机制的最新进展作一综述。
- 唐莎张静波
- 关键词：抗中性粒细胞胞浆抗体系统性血管炎免疫发病机制
- 溶酶体膜蛋白-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成的实验研究被引量：9
- 2012年
- 目的研究溶酶体膜蛋白-2抗体(LAMP-2-antibody)诱导中性粒细胞胞外捕网形成(NETosis)的作用,为进一步探讨这种新型细胞死亡模式在系统性小血管炎中的作用及机制奠定基础。方法采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,抗LAMP-2抗体刺激中性粒细胞,以及通过NADPH氧化酶抑制剂二甲苯基碘(DPI)阻断活性氧簇的产生,电镜、免疫荧光观测胞外捕网的形成,激光共聚焦检测自身抗原LAMP-2、PR3、MPO的表达。结果 LAMP-2抗体促进中性粒细胞胞外捕网NETs形成,自身抗原MPO、PR3及LAMP-2包含在NETs内,抑制NADPH氧化酶的活性可以阻断NETs形成。结论 LAMP-2抗体可能通过诱导中性粒细胞异常死亡,释放内源性危险信号,激活自身免疫反应等来维持血管炎的恶性持续状态。
- 唐莎张莹施维维尹世伟李芙蓉王莉邹丽云倪兵谢京高雪静吴玉章张静波
- 关键词：中性粒细胞NADPH氧化酶系统性小血管炎
- 正五聚蛋白3在炎症及自身免疫中的作用被引量：14
- 2013年
- 正五聚蛋白3（pentraxin 3,PTX3）属正五聚蛋白家族成员,又称肿瘤坏死因子刺激基因14（tumornecrosis factor-stimulated gene 14,TSG14）,是一种典型的急性期蛋白。PTX3作为唯一的可溶性模式识别受体,可以结合多种可溶性受体配体,参与免疫防御、炎症、细胞凋亡、血管重塑。
- 谢京张静波
- 关键词：急性期蛋白天然免疫炎症自身免疫
- FimH_(1-156)融合基因的构建及其原核蛋白表达与纯化
- 2014年
- 目的构建含有与溶酶体膜蛋白2(LAMP-2)P41-49完全同源序列的尿路致病性大肠杆菌(UPEC)Ⅰ型菌毛FimH1-156为目的基因的原核载体,表达并纯化FimH1-156融合蛋白。方法采用PCR克隆pPKL241质粒获取FimH1-156基因,插入原核表达载体pET28a(+);将重组表达质粒转染感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达FimH1-156融合蛋白,超声裂解细菌,NiNTA层析法进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析、蛋白免疫印迹法(Western blot)对其进行鉴定。结果成功构建表达载体,经对融合蛋白表达条件的优化,在IPTG浓度为1mmol/L,诱导4h目的蛋白表达量最高,主要以包涵体形式存在;Western blot证实该FimH1-156融合蛋白可与抗6×His单克隆抗体发生结合反应。结论成功克隆FimH1-156融合蛋白表达基因并构建至原核表达载体,获得了包涵体纯化的FimH1-156融合蛋白,为下一步建立实验动物模型奠定了基础。
- 尹仕伟邹丽云张莹张晋宇唐莎施维维吴玉章袁发焕张静波
- 关键词：FIMH1融合蛋白纯化
- 法舒地尔对血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞自噬的影响被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人足细胞（AB 8/13）自噬的影响. 方法：体外培养人足细胞株,采用不同浓度的AngⅡ（10-8～10-6 mol/L）刺激人足细胞24h和固定浓度AngⅡ（10-7moVL）刺激不同时间（0h、6h、12h、24h、36h）,以及特异性自噬阻断剂3-MA（5 mmol/L）和不同浓度（10-8～1O-6mol/L）法舒地尔进行干预.免疫荧光法和Westem印迹法检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）、Beclin-1]的表达变化. 结果：AngⅡ可刺激足细胞LC3B、Beclin-1蛋白表达上调,且呈剂量、时间依赖性（P＜0.05）,在浓度10-7mol/L AngⅡ和时间24h时达高峰.3-甲基腺嘌呤（3-MA）能明显降低AngⅡ引起的LC3B蛋白表达（P＜0.01）.法舒地尔本身对足细胞自噬没有影响,但可以明显下调AngⅡ诱导的足细胞LC3B和Beclin-1蛋白表达（P＜0.05）,10-7mol/L时效果最明显. 结论：AngⅡ可诱导人足细胞自噬增强,3-MA和法舒地尔均可抑制此过程的发生,提示Rho激酶途径可能参与了AngⅡ诱导的足细胞自噬过程.
- 高雪静唐莎尹仕伟张莹谢京施维维王莉邹丽云牟芝蓉张静波
- 关键词：自噬RHO激酶足细胞ANGIOTENSIN
- 抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎的治疗现状及进展被引量：7
- 2012年
- 随着大量针对抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关性血管炎(ANCA-associated systemic vasculitis,AASV)临床试验的开展,一些新的循证医学结果逐渐达成共识:(1)糖皮质激素和环磷酰胺仍是AASV诱导期最主要的治疗手段,静脉注射环磷酰胺较口服更好;(2)对早期轻症AASV,甲氨蝶呤可以替代环磷酰胺,重症患者可行血浆置换;(3)利妥昔单抗(美罗华)已被证明在诱导AASV缓解方面与环磷酰胺有同样效果,对复发病例更优,有望成为标准治疗药物;(4)维持期治疗可用硫唑嘌呤;(5)随着疾病机制的不断深入,"分子治疗"被寄予厚望。本文就近年来基于主要临床试验所取得的免疫治疗进展作一综述。
- 尹仕伟张静波
- 关键词：系统性血管炎抗中性粒细胞胞质抗体免疫抑制剂
