国家自然科学基金(30971364) 作品数:3 被引量:8 H指数:2 相关作者: 张玲 廖晓辉 刘杞 张臣丽 郭辉 更多>> 相关机构: 重庆医科大学附属第二医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 重庆市医学科研计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
肝再生增强因子在缺血再灌注肾损伤中的表达及其对p38信号通路的影响 被引量:3 2011年 目的:观察缺氧及缺氧复氧状态下大鼠肾小管上皮细胞中肝再生增强因子(Augmenter of liver regeneration,ALR)的表达变化,以及对细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kincses,MAPK)信号通路的影响,探讨ALR对肾脏保护的作用机理。方法:将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分组,在三气培养箱中缺氧不同的时间(2、4、8、12、18、24 h),复氧(12、24 h),Western blot法检测细胞ALR的蛋白表达,RT-PCR法检测细胞ALR mRNA的表达。缺氧不同的时间(0、15、30、60 min),并在缺氧15 min的细胞中设立对照组r,ALR干预组(20、100μg的rALR)及抑制剂干预组,Western blot检测细胞p38MAPK蛋白的表达。结果:(1)正常培养NRK52E细胞中有ALR mRNA表达,缺氧4 h后,ALR mRNA表达较正常对照显著增加(n=7,P<0.01)。(2)缺氧培养细胞12 h,细胞中ALR蛋白表达量显著高于正常对照组,于18 h达高峰(n=7,P<0.01)。(3)缺氧4 h,复氧12、24 h,ALR mRNA及蛋白表达较正常对照组明显增加。(4)缺氧15 min时p38MAPK蛋白表达最强,低剂量rALR(20μg)能够显著抑制p38MAPK通路的激活,而高剂量rALR(100μg)的抑制作用减弱。结论:缺氧及缺氧复氧均能诱导大鼠肾小管上皮细胞表达ALR增加,其中缺氧复氧能较早激活ALR表达,低浓度的外源性rALR减弱p38MAPK通路的表达,提示ALR对缺氧再灌注损伤大鼠肾小管上皮细胞有保护作用。 周娟 张玲 刘杞 廖晓辉 张臣丽关键词:肝再生增强因子 肾小管 上皮细胞 重组人肝再生增强因子单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:2 2010年 目的制备抗重组人肝再生增强因子(recombinant human augmenter of liver regeneration,rhALR)单克隆抗体,鉴定其特性,为建立一种稳定、特异及简便的临床检测方法奠定基础。方法以纯化的rhALR免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合建立能稳定分泌抗rhALR单抗的杂交瘤细胞株,间接ELISA方法和Western blot方法鉴定McAb特异性并对杂交瘤细胞的染色体进行分析。采用快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类,间接ELISA方法检测McAb的效价及亲和常数。结果筛选出一株可分泌特异性McAb的杂交瘤细胞2A6;其抗体亚类重链为IgG2b,轻链为К链,腹水效价为10-6;亲和常数为3.19×107。间接ELISA法和Western bolt检测证明这株杂交瘤细胞所分泌的McAb特异性良好。结论成功制备出高效价的抗rhALR单克隆抗体,为建立一种稳定、可靠的ALR检测方法,以便深入研究ALR在肾脏疾病中的作用奠定基础。 张臣丽 张玲 廖晓辉 刘杞关键词:肝再生增强因子 单克隆抗体 生物学特性 肝再生增强因子对缺血再灌注损伤肾脏局部炎性反应的影响 被引量:3 2012年 目的 探讨重组人肝再生增强因子( rhALR)对缺血再灌注(IR)肾损伤大鼠模型肾脏局部炎性细胞浸润及炎性因子表达的影响.方法 将SD大鼠按随机数字表法分成假手术组、IR组、rhALR低剂量(100 μg/kg)组及rhALR高剂量(200 μg/kg)组.采用双侧肾蒂夹闭60 min后再灌注建立IR肾损伤动物模型.常规生化法检测血肌酐、尿素氮的水平,HE染色观察肾脏组织学改变,比色法检测肾组织髓过氧化物酶( MPO)的活性,Western印迹法检测肾组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的蛋白表达.结果 rhALR组的血肌酐和尿素氮显著低于IR组(均P< 0.05),肾组织病理损害减轻,rhALR高剂量组较rhALR低剂量组肾功能及肾脏病理改善更明显.IR组大鼠肾组织的MPO活性、TNF-α、ICAM-1、MCP-1的蛋白表达在术后12 h较假手术组显著上升,术后24h有所下降,但仍维持在较高水平(均P<0.05);rhALR组肾组织MPO活性、肾组织TNF-α、ICAM-1、MCP-1的蛋白表达较IR组显著下降(均P<0.05),且rhALR高剂量组4者较rhALR低剂量组下降更显著(均P<0.05).结论 rhALR对IR肾损伤具有保护作用,其作用机制可能与其减少肾脏局部的炎性细胞浸润、抑制炎性因子MCP-1、ICAM-1、TNF-α的表达有关. 廖晓辉 孙航 刘杞 郭辉 张玲关键词:再灌注损伤 肾功能不全 肝再生增强因子