国家教育部博士点基金(20120111110009)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
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- 拟南芥AtMYB50和AtMYB61蛋白的原核表达研究被引量：4
- 2014年
- 文章提取拟南芥植株总RNA,通过RT-PCR扩增出AtMYB50与AtMYB61基因cDNA片段,连接到pEASY-Blunt载体上,转化到Trans1-T1感受态细胞内,筛选阳性单克隆进行菌落PCR鉴定并测序验证;利用限制性内切酶双酶切重组载体获得含有黏性末端的目的基因片段,并对原核表达载体pET-32a+和pGEX-4T-1进行完全双酶切,连接目的基因片段后获得重组原核表达载体,将重组原核表达载体转化至大肠杆菌原核表达菌株BL21(DE3);IPTG诱导表达获得目的蛋白,并对蛋白表达条件(诱导时间、诱导温度及IPTG浓度等)进行优化,鉴定表达蛋白水溶性。
- 杜李继顾菊陈光朗孙成磊阳立波曹树青
- 关键词：拟南芥转录因子原核表达
- 拟南芥AtXCD1蛋白的原核表达研究被引量：1
- 2014年
- [目的]研究拟南芥AtXCD1蛋白的原核表达。[方法]构建XCD1原核表达载体,根据NCBI基因序列设计引物,并以PCR扩增得到大量目的片段XCD1,将XCD1连接到原核表达载体pET-32a+,并对重组质粒进行测序鉴定,将重组质粒转化至大肠杆菌原核表达菌株BL21(DE3),对蛋白表达条件:诱导时间、诱导温度和IPTG浓度等进行优化。IPTG诱导表达获得目的蛋白,对蛋白表达条件:诱导时间、诱导温度和IPTG浓度等进行优化。[结果]XCD1序列全长为1 242 bp,与PCR产物大小一致。蛋白XCD1-pET-32a+较适表达条件为在30℃0.1 mmol/L的IPTG诱导1.5 h。[结论]该结果为进一步蛋白纯化及酶活测定试验奠定了基础。
- 陈光朗董万春韩娇樊婷婷杨立波曹树青
- 关键词：原核表达
- 拟南芥bZIP23基因过量表达载体的构建及过表达植株的筛选被引量：1
- 2014年
- [目的]以拟南芥为材料克隆bZIP23基因,构建bZIP23基因的过量表达载体和筛选过表达植株,为验证其功能奠定基础。[方法]提取拟南芥总RNA和RT-PCR克隆bZIP23基因,用限制性内切酶切割和T4 DNA连接酶连接,使bZIP23基因连接到35S强启动子的pART27载体上;将连接产物转化到Trans1-T1感受态细胞中,筛选阳性单克隆进行菌落PCR鉴定并测序验证,获得重组质粒。将该重组质粒电激转化至根瘤农杆菌GV3101菌株,浸花法转化拟南芥野生型植株。[结果]通过单菌落PCR鉴定和DNA测序结果显示,bZIP23基因与35S过量表达载体已连接,获得了重组载体;抗性筛选与遗传鉴定获得相应的转基因过量表达阳性植株。[结论]构建的过量表达载体及筛选得到的过量表达植株为验证bZIP23基因功能奠定了基础。
- 顾菊韩娇董万春阳立波曹树青
- 关键词：转基因植株
- 利用TAIL-PCR技术克隆拟南芥抗旱相关的csm2基因
- 2014年
- 文章在400mmol/L甘露醇的筛选条件下,获得一个T-DNA插入的拟南芥抗旱突变体,命名为csm2-1。采用TAIL-PCR技术获得了T-DNA插入位点的侧翼序列,序列分析证实T-DNA插入基因为At1g07530,该基因编码植物体内的一类GRAS家族的转录调控因子。该研究为进一步阐明GRAS家族基因参与干旱胁迫的分子机制提供新的思路,同时也为植物抗逆分子育种提供候选基因。
- 程丹陈光朗孙成磊阳立波曹树青
- 关键词：抗旱基因克隆拟南芥
- AtbZIP19和AtbZIP23蛋白的原核表达
- 2015年
- bZIP类转录因子参与调控多种生物学过程,包括植物生长、花的发育、种子的成熟、衰老、光信号传导、损伤修复、病菌防御以及对各种环境胁迫的响应等。文章构建AtbZIP19和AtbZIP23基因的原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了蛋白表达;提取拟南芥植株总RNA,通过RT-PCR克隆AtbZIP19与AtbZIP23基因cDNA全长;将pET-32a+载体和聚合酶链反应(PCR)产物进行双酶切,通过DNA连接反应将2个基因定向克隆到pET-32a+质粒中;经菌液PCR和测序鉴定获得阳性克隆后,将重组质粒转化至大肠杆菌原核表达菌株BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达得到目的蛋白。
- 孙成磊董万春韩娇管灵霞阳立波曹树青
- 关键词：拟南芥原核表达
- 拟南芥抗旱相关基因的表达载体构建及转基因植株鉴定被引量：1
- 2015年
- 文章以拟南芥Col-0植株的基因组DNA和cDNA为模板扩增出LWT2基因全长和CDS片段,用pEASY-Blunt Zero Cloning Kit试剂盒连接至中间载体,转化到Trans1-T1感受态细胞内,通过单克隆挑选、菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定及质粒测序验证获得DNA阳性克隆。利用限制性内切酶双酶切获得含有黏性末端的目的片段和载体片段,进行DNA连接反应可得最终的互补和过表达构建。提取质粒DNA测序确认后将2个构建分别转化至农杆菌菌株GV3101,菌落PCR鉴定后通过浸花转化法转化拟南芥lwt2-1突变体植株,最后通过转基因筛选与遗传鉴定获得相应构建的转基因阳性植株。
- 顾进宝阳立波曹树青
- 关键词：拟南芥转基因过表达
- 拟南芥抗旱突变体csm1-1的鉴定及其基因克隆被引量：2
- 2013年
- 干旱是植物生长和发育的限制因素之一,因此抗旱基因克隆和功能研究具有重要的理论意义和应用价值。文章利用甘露醇模拟干旱胁迫,以发芽为筛选指标,从拟南芥突变体库中筛选鉴定了抗旱突变体csm1-1。生理生化分析表明,csm1-1抗旱性与其电导率、可溶性糖质量比和脯氨酸积累有关。利用TAILPCR技术和RT-PCR分析发现,CSM1基因(RCI3)编码一个过氧化物酶。研究结果为进一步研究该基因调控植物抗旱的机理提供了基础。
- 柏晓娅顾菊陈光朗孙成磊阳立波曹树青
- 关键词：抗旱拟南芥
