四川省科技攻关计划(2006-YZGG-15)
- 作品数：5 被引量：22H指数：3
- 相关作者：李学伟刘海峰张煦李明洲阎振鑫更多>>
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- 猪前脂肪细胞诱导分化过程中PPARγ、DECR1和ECHS1基因表达模式被引量：4
- 2010年
- 采用胶原酶消化法分离猪皮下前脂肪细胞,以含50 nmol/L胰岛素、100 nmol/L地塞米松、0.25 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、100 nmol/L罗格列酮的分化培养液对前脂肪细胞进行诱导分化,借助实时定量RT-PCR方法检测了PPARγ、DECR1和ECHS1 3基因的表达模式,结果发现:PPARγ、DECR1和ECHS1 3基因均于诱导分化后48 h达到表达高峰,此时的表达量分别是诱导前的93.0,5.4和7.8倍;PPARγ同DECR1和ECHS1两基因表达量变化趋势间的相关系数分别为0.92和0.97,DECR1同ECHS1的相关系数为0.94,均达到极显著相关(P<0.01)。实验结果表明:前脂肪细胞在分化过程中细胞内脂肪酸生物合成和脂肪酸β-氧化同时发生,以维持细胞的稳态。
- 刘海峰阎振鑫董涵李学伟
- 关键词：前脂肪细胞定量PCR
- 猪脂肪前体细胞的原代培养及诱导分化被引量：9
- 2009年
- 以2日龄仔猪皮下脂肪组织为材料，采用胶原酶消化法分离培养出细胞成分均一、增殖旺盛的原代脂肪前体细胞。对所获细胞采用含50nmol／L胰岛素＋100nmol／L地塞米松＋0．25mmol／L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤＋100nmol／L罗格列酮的分化培养液进行诱导分化培养，少量细胞第2d开始出现脂滴，大多细胞第3d出现脂滴，分化率达95％以上，第4～7d小脂滴逐步融合为大脂滴。在脂滴出现及汇聚快慢上本实验所采用诱导方法明显快于其他诱导方式。
- 刘海峰王翔李学伟张利娟张煦
- 关键词：细胞培养诱导分化罗格列酮
- 猪CISD1基因电子克隆与验证被引量：1
- 2010年
- 对通过抑制差减杂交技术所筛选的猪前脂肪细胞诱导分化后差异表达的CISD1基因的EST序列为探针进行电子克隆,用克隆序列设计引物,通过RT-PCR、克隆测序、同源比对证实所获序列为猪CISD1基因的mRNA序列,并将序列提交到Genebank,登录号为GQ913654。所获猪CISD1基因的mRNA序列全长为631 bp,CDS包含321 bp,由其编码的CISD1蛋白包含106个氨基酸残基,理论等电点为9.20,属脂溶性不稳定蛋白。猪CISD1蛋白的1~23位氨基酸可能是信号肽,53~91位氨基酸形成CDGSH锌手指域,为该蛋白的重要功能域,猪CISD1蛋白的三级结构与人CISD1蛋白相似度为89.333%。
- 刘海峰董涵阎振鑫毛予龙缪霜李学伟
- 关键词：电子克隆
- 罗格列酮对猪脂肪前体细胞分化过程中聚脂相关基因表达模式的影响被引量：7
- 2009年
- 为了解罗格列酮对猪脂肪前体细胞诱导分化过程的影响,利用胶原酶消化法分离猪皮下脂肪前体细胞,采用含50nmol/L胰岛素、100nmol/L地塞米松及0.25mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤的分化培养液Ⅰ(对照组)和在分化培养液Ⅰ中添加100nmol/L罗格列酮的分化培养液Ⅱ(实验组)两种诱导分化方法对脂肪前体细胞进行诱导分化,借助实时定量RT-PCR方法检测了细胞分化过程中聚脂相关基因的表达。结果显示:罗格列酮对PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN和GPAT基因的表达有显著的上调作用,而对PPARα有一定的下调作用。试验组中PPARα、PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN和GPAT等基因分别于48h、48h、48h、108h、60h和24h达到表达高峰,此时的表达量分别是诱导前的1.7、48、3.3、487.5、5.8和3.6倍,GPAT同PPARα和FASN基因表达量间均达到显著相关(P<0.05);而对照组中PPARα、PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN和GPAT等基因分别于84h、96h、48h、96h、36h和36h达到表达高峰,此时的表达量分别是诱导前的2.1、11、1.6、216.5、3.5和2.8倍,GPAT同PPARα和FASN基因表达量间均达到极显著相关(P<0.01)。本实验结果表明:罗格列酮不仅可以极大的促进PPARγ和C/EBPα基因的表达,还能让其协同达到表达高峰;PPARγ和C/EBPα可能是调控猪脂肪前体细胞分化的关键转录因子;在脂肪形成过程中,甘油脂类的生物合成可能发生较早,同时PPARα可能主要参与甘油脂类生物合成的调控。
- 刘海峰张煦李明洲李学伟
- 关键词：罗格列酮基因表达
- 血清对猪前脂肪细胞分化过程中聚脂相关基因表达的影响被引量：1
- 2009年
- 为了探讨血清对猪前脂肪细胞诱导分化的影响,筛选更优的诱导方法。采用胶原酶消化法分离猪皮下前脂肪细胞,用含50 nmol.L-1胰岛素、100 nmol.L-1地塞米松、0.25 mmol.L-13-异丁基-1-甲基黄嘌呤、100nmol.L-1罗格列酮及添加(对照组)或不添加(试验组)10%FBS的分化培养液1和2对前脂肪细胞进行诱导分化,借助实时定量RT-PCR方法检测了细胞分化过程中聚脂相关基因PPARα、C/EBPα、FASN、ACOX1、GPAT和ENPP2的表达模式。结果显示:血清对PPARγ和FABP4两基因的表达有极显著的上调作用(P<0.01),而对其他6个基因的表达有极显著的下调作用(P<0.01)。试验组中FASN、GPAT和ACOX1 3个基因诱导分化各时间点的综合表达量均极显著高于对照组(P<0.01),3基因表达量变化趋势间均达到极显著相关(P<0.01)。试验组中PPARα、PPARγ、C/EBPα和ACOX1 4个基因的基因表达量变化趋势间均达到显著或极显著正相关。研究表明:前脂肪细胞分化过程中,细胞内脂肪酸的生物合成和β氧化均在发生,细胞内脂肪含量积聚的快慢取决于2个途径力量的对比;PPARα、PPARγ、C/EBPα和ACOX1 4个基因间存在极强的协同表达现象;在细胞内脂肪积聚快慢上,含血清的分化培养液1要优于不含血清的分化培养液2。
- 刘海峰李学伟王滔张煦帅素容李明洲
- 关键词：血清前脂肪细胞基因表达实时定量PCR
