广东省肇庆市科技创新计划项目(2013E1810)
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
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- 相关机构：肇庆市疾病预防控制中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生理学轻工技术与工程更多>>
- TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因方法的建立被引量：10
- 2014年
- 目的建立克罗诺杆菌的特异、灵敏的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测方法。方法根据GenBank公布的克罗诺杆菌MMS基因高保守序列,设计特异引物和TaqMan-MGB探针,建立和优化反应体系,用25种其他常见致病菌评价反应体系的特异性,用克罗诺杆菌MMS基因重组质粒构建实时荧光定量PCR标准曲线,对重组质粒、纯菌和人工模拟污染样本进行灵敏度试验,并与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR比较,配对t检验分析两种方法对Ct值和荧光强度的差异。结果采用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因仅需40 min,与25种非目标菌无交叉反应,仅对克罗诺杆菌有特异性扩增;所构建方法线性关系良好,相关系数r2=0.999,扩增效率为99.972%,对重组质粒、纯菌、人工模拟污染样品标本的灵敏度分别达10拷贝/反应、3.8和38 cfu/ml;与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR相比,TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR的Ct值更小、△Rn值更高,灵敏度和分辨率差异均有统计学意义(Ct:t=-14.406,P﹤0.01;△Rn:t=14.230,P﹤0.01)。结论本研究建立的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR反应体系能够快速、特异、灵敏地检测克罗诺杆菌MMS基因,可用于婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌的快速筛查和鉴定,具有较大的的应用价值和推广价值。
- 谭翰清蔡建生谭海芳林凤程洁萍
- TaqMan探针实时荧光PCR快速检测奶粉中沙门氏菌的研究被引量：3
- 2015年
- 目的建立快速、灵敏地检测奶粉中沙门氏菌的TaqMan探针实时荧光PCR方法。方法根据沙门氏菌的inv A基因序列设计引物与TaqMan探针,建立并评价实时荧光PCR反应体系的特异性,制备鼠伤寒沙门菌标准株（CMCC 50115）10倍梯度稀释的菌液,检测对纯菌液的灵敏度,制备染菌量分别为1.4×（100~105）CFU/25 g奶粉的样本进行人工染菌量试验,在增菌0、4、8、12、16、20、24、36和48 h时各取1 m L培养液,提取DNA进行TaqMan实时荧光PCR检测,同步进行传统细菌分离,比较2种方法对人工染菌标本的最低检测限。结果建立的沙门氏菌Taq Man探针实时荧光PCR仅需40min即可完成检测,与志贺氏菌、大肠埃希氏菌等非目标细菌无交叉反应,对纯菌检测下限为1.4 CFU/m L,对染菌量为1.4×100CFU/25 g奶粉的检测下限仅需增菌16h即可检测出来,而要达到这个检测限,传统方法则需要36h。结论沙门氏菌TaqMan探针实时荧光PCR快速、特异、灵敏,可用于婴幼儿奶粉中沙门氏菌的快速筛查,提高食品安全风险监测的速度和灵敏度。
- 程洁萍谭翰清朱颖梅
- 关键词：沙门氏菌实时荧光PCRTAQMAN探针
- 婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌DNA快速提取方法的应用被引量：3
- 2014年
- 目的探讨婴幼儿奶粉前增菌液中克罗诺杆菌快速、简便、高效、经济的DNA提取方法。方法制备克罗诺杆菌人工污染奶粉前增菌液,比较高速离心和氯仿振荡低速离心去除蛋白和脂质效果及简便性,应用煮沸法(去离子水、TE、TE-SDS)、异硫氰酸胍和硅胶膜吸附试剂盒法提取DNA,以本实验室建立的TaqMan-MGB实时荧光PCR评价效果。结果氯仿振荡3000 rpm离心前处理效果比高速离心法好,TE-SDS煮沸法仅需3步骤、19 min完成DNA提取,比试剂盒提取法更快速,实时荧光PCR效果与试剂盒法基本一致,并优于去离子水和TE煮沸法。结论氯仿振荡3000 rpm离心后TE-SDS煮沸提取DNA,能满足TaqMan-MGB实时荧光PCR对婴幼儿奶粉前增菌液克罗诺杆菌的检测需求,提高食品安全风险监测的灵敏度和速度。
- 谭翰清谭海芳蔡建生林凤程洁萍
- 关键词：实时荧光PCRTAQMAN-MGB探针
