上海市自然科学基金(01ZB14050)
- 作品数：8 被引量：28H指数：4
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- 帕金森病流行病学的研究进展被引量：8
- 2010年
- 刘功禄赵永波
- 关键词：流行病学研究方法帕金森病病例对照研究队列研究发病人数PD
- 不同浓度的Aβ(25～35)对原代培养的大鼠基底前脑胆碱能神经元生长存活及TrkA表达的影响被引量：4
- 2004年
- 郭春妮赵永波王晓梅王乔树马爱梅
- 关键词：原代培养TRKA阿尔茨海默病
- 尼古丁对培养大鼠基底前脑胆碱能神经元生长存活及TrkA表达的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨不同浓度的尼古丁对原代培养的大鼠基底前脑胆碱能神经元的高亲和力神经生长因子受体(TrkA)表达的影响 ,结合细胞形态学观察和四甲基偶氮唑盐 (MTT)实验了解TrkA表达变化对细胞生长的影响。方法 运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定 ,用 0 .0 1,0 .1,1,10和 10 0 μmol/L五个终浓度的尼古丁对原代培养细胞进行干预 ,观察细胞的形态变化 ,MTT实验观察细胞的活力 ,提取细胞总RNA行RT PCR观察神经元TrkAmRNA表达的变化 ,免疫细胞学化观察TrkA表达的变化 ;用 10 μmol/L终浓度的尼古丁以不同的时间 (分别为 8,2 4 ,4 8h)进行干预 ,观察不同时间干预下上述指标的变化。结果 在 0 .0 1～ 10 μmol/L浓度范围内的尼古丁呈剂量依赖性地增加神经元TrkA的表达 ,10 0 μmol/L浓度的尼古丁则引起TrkA表达的下降 ,前浓度范围的尼古丁可以剂量依赖性地增加原代培养的神经元细胞突起数量、平均突起长度和最长突起长度 ,增加MTT法测得的OD值 ,10 0 μmol/L终浓度尼古丁则产生相反的作用。 结论 在一定浓度范围内 ,尼古丁可以增加原代培养的胆碱能神经元TrkA表达 ,对神经元可能具有营养作用。
- 郭春妮赵永波
- 关键词：尼古丁基底前脑胆碱能神经元TRKA
- α-突触核蛋白的表达与氧化应激水平的相互影响被引量：5
- 2011年
- 目的探讨氧化应激与在稳定转染α-突触核蛋白(-αsynuclein)的大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)中α-突触核蛋白表达的相互影响。方法测定未转染、转染空质粒、已稳定转染野生型(WT)及突变型(A53T)α-突触核蛋白的PC12细胞的活性氧(ROS)水平,并以实时定量PCR法和免疫印迹(Western blot)法检测分析经0、50、100和250 nmol/L H2O2处理的WT型和A53T型PC12细胞α-突触核蛋白表达。结果 (1)α-突触核蛋白转染PC12细胞后,细胞内ROS水平增加,按未转染的PC12细胞、转染空质粒的PC12细胞、WT型PC12细胞、A53T型PC12细胞顺序ROS水平依次增加(P<0.05)。(2)经不同浓度H2O2处理后,WT型和A53T型PC12细胞α-突触核蛋白mRNA表达水平均无明显改变,WT型及A53T型PC12细胞不同浓度组组间差异均无统计学意义(均P>0.05);在Western blot检测中,50、100和250 nmol/L H2O2组WT型PC12细胞α-突触核蛋白表达较0 nmol/L H2O2组减少,且不同浓度组组间差异均有统计学意义(P<0.05);50、100和250nmol/L H2O2组A53T型PC12细胞α-突触核蛋白表达较0 nmol/L H2O2组增加,且不同浓度组两两比较差异亦均有统计学意义(P<0.05)。结论α-突触核蛋白可引起PC12细胞氧化应激损伤,且不同氧化应激水平对WT型和A53T型PC12细胞中的α-突触核蛋白表达有不同程度的影响。
- 沈原赵永波刘功禄赵圣杰
- 关键词：Α-突触核蛋白活性氧氧化应激PC12细胞
- 人α-突触核蛋白基因慢病毒稳定转染PC12细胞系的建立及其凋亡检测被引量：2
- 2011年
- 目的构建及鉴定人野生型和突变型α-突触核蛋白（SNCA和SNCAmu）基因慢病毒表达载体，并观察在体外大鼠嗜铬细胞瘤细胞中的表达。方法在引物合成后采用PCR技术扩增目的基因，并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒[pGC—FU，含绿色荧光蛋白（GFP）基因]中，构建SNCA基因慢病毒载体表达质粒（pGC—FU—SNCA—GFP）和SNCAmu基因慢病毒载体表达质粒（pGC—FU—SNCAmu—GFP），通过酶切、测序验证后，将pGC—FU—SNCA—GFP、pGC—FU—SNCAmu—GFP质粒和包装质粒pHelper1．0、pHelper2．0共同转染大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PCI2细胞），获得稳定转染。结果通过检测标签蛋白GFP和目的蛋白，进一步验证pGC—FU—SNCA—GFP和pGC—FU—SNCAmu—GFP在靶细胞中的表达。通过噻唑蓝比色法检测稳定转染后细胞凋亡水平，稳定表达SNCA组（OE组）、SNCAmu组（OEm组）、不加慢病毒质粒的空白对照组（CON组）和加pGC—FU—GFP空载体对照组（NC组）共4组细胞，病毒转染后不同时间（1、2、3、4、5d）细胞增殖变缓（F=4．534、196．285、411．829、1282．049、3135．559，均P〈0．05）。碘化丙锭单染法检测细胞周期，CON组、NC组、OE组和OEm组G1期、G2期和M期细胞百分比差异有统计学意义（F=885．79、45．03、207．11，均P〈0．05），其中G1期细胞百分比（％）较高（CON组：59．10±0．35、NC组：68．24±0．60、OE组：71．73±0．11、OEm组：74．66±0．35）。结论人SNCA和SNCAmu基因转染到PC12细胞中，成功建立稳定表达的细胞系，并且对细胞凋亡水平和细胞周期有一定程度的改变。
- 沈原赵永波刘功禄赵圣杰
- 关键词：Α突触核蛋白慢病毒属转染PC12细胞
- Aβ对大鼠记忆和空间定向能力的影响及尼古丁的干预作用被引量：6
- 2006年
- 目的研究Aβ对大鼠记忆、空间定向能力的影响及尼古丁的干预作用。方法将Aβ1-40注入大鼠双侧基底前脑中,建立大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤模型,观察大鼠学习和空间定向能力的变化,与此同时我们通过腹腔注射烟碱受体激动剂尼古丁对此模型进行干预。结果Aβ注射组大鼠在定位航行试验中,平均逃避潜伏期明显延长,在空间探索试验中跨越原平台位置的次数明显减少,将大鼠在第5天寻找平台的方式进行分类记录,有显著差异(P<0.05)。两周组的尼古丁干预大鼠能够部分地改善由Aβ注射引起的学习记忆损伤(P<0.05,P<0.01),四周组的大鼠未显示出有统计学意义的记忆和空间定向能力的减退(P>0.05)。结论短期(2周)Aβ损伤大鼠学习记忆能力明显下降,从行为学上来评价,该模型是成功的;尼古丁在体内能够部分地改善由Aβ注射引起的学习记忆损伤。四周组的大鼠未显示出有统计学意义的记忆和空间定向能力的减退,有可能是因为Aβ随着时间的延长逐渐被代谢。
- 赵永波刘文文郭春妮
- 关键词：Β-淀粉样蛋白老年性痴呆学习记忆尼古丁水迷宫试验
- SNCA基因过表达慢病毒质粒构建及稳定转染293T细胞系被引量：2
- 2011年
- 目的构建SNCA基因过表达慢病毒质粒,转染293T细胞,建立稳定转染细胞系。方法应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,并对阳性克隆进行基因测序鉴定。pGC-FU-SNCA-GFP重组质粒包装293T细胞,转染24小时后,用荧光显微镜观察标签GFP绿色荧光蛋白的表达,并用West blotting法测定目的蛋白的表达。结果成功构建了pGC-FU-SNCA-GFP慢病毒过表达质粒,获得了稳定转染的293T细胞株。结论人SNCA基因过表达慢病毒载体成功,构建和稳定转染293T细胞系的建立,为进一步体外研究α-突触核蛋白的功能奠定了基础。
- 沈原赵永波
- 关键词：Α-突触核蛋白转染BLOTTING
- 丘脑底核高频电刺激治疗帕金森病的机制
- 2007年
- 目的研究丘脑底核(STN)高频电刺激(HFS)对大鼠黑质-纹状体系统的影响。方法给予大鼠一侧 STN-HFS,应用 RT-PCR 和蛋白印迹(Western blot)技术观察其对黑质-纹状体 TH 的影响。结果 RT-PCR 检测发现刺激侧黑质-纹状体 TH mRNA 增高(0.22±0.08vs 0.07±0.01,P<0.01;0.41±0.13 vs 0.17±0.09,P<0.01);Western blot 检测发现刺激侧黑质-纹状体 TH 表达明显增高(0.99±0.14 vs 0.33±0.08,P<0.01;0.87±0.16 vs 0.19±0.04,P<0.01)。结论 STN-HFS可能通过影响黑质-纹状体多巴胺代谢及其限速酶的水平发挥作用。
- 赵永波王乔树孙伯民王晓平
- 关键词：帕金森病电刺激疗法丘脑底核
