国家科技支撑计划(2011BAI13B02-04)
- 作品数：19 被引量：141H指数：7
- 相关作者：王元忠张晓东李彩霞李涛金航更多>>
- 相关机构：云南省农业科学院玉溪师范学院云南农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金重点项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 滇龙胆GrGPPS基因的克隆及其序列分析与原核表达被引量：11
- 2014年
- 目的从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆单萜化合物合成的关键酶牻牛儿基焦磷酸合成酶基因GrGPPS,进行序列特征分析和原核表达。方法根据三年生滇龙胆转录组GrGPPS基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增得到GrGPPS cDNA序列,并进行TA克隆、测序及序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrGPPS,转入Escherichia coli Rosetta(DE3)中,在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下进行表达。结果 GrGPPS cDNA全长1 107 bp,编码369个氨基酸;序列分析表明,GrGPPS基因是异戊烯基合成酶家族的成员;氨基酸序列系统发育分析表明,GrGPPS与金鱼草AmGPPS亲缘关系最近;构建pGEX-4T-1-GrGPPS重组质粒,获得稳定的pGEX-4T-1-GrGPPS原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论克隆了GrGPPS基因,建立pGEX-4T-1-GrGPPS稳定的原核表达体系,为进一步纯化和鉴定GPPS蛋白并研究其结构和功能奠定基础。
- 王彩云李富生李涛李彩霞张晓东王元忠
- 关键词：基因克隆原核表达
- 云南滇龙胆居群表型多样性及其与环境关系研究被引量：25
- 2011年
- 为揭示滇龙胆天然居群表型变异程度和变异规律,以云南省5个区域天然分布的20个野生居群400个单株20个表型性状指标为调查研究对象,并用变异系数、Shannon-Weiner多样性指数和巢式方差分析对滇龙胆居群间和居群内的表型变异进行分析,用相关性分析对滇龙胆表型性状与地理气象因子间的变异格局进行分析,用类平均聚类法对20个滇龙胆居群进行分类.结果表明:5个区域的滇龙胆以楚雄地区变异最大,变异系数为39.8%,变异最小的是昆明地区,为31.4%;不同居群的20个表型性状变异程度差异明显,变异系数在14.4%～91.8%之间,平均为40.4%,20个居群的平均变异为26.8%～37.0%;滇龙胆地理居群的表型分化较高,20个性状居群间的分化系数平均为73.14%,变化范围为36.03%～91.94%,居群间变异高于居群内;滇龙胆20个表型性状的总的多样性指数平均为2.547,5个不同分布区域多样性指数存在差异,最大为楚雄(1.271 4),最小为玉溪(1.266 7);表型性状变异受经度和降雨量影响较大,与纬度、海拔和温度相关性不显著;通过UPGMA聚类,滇龙胆被分成3个组,性状的表型特征并没有依地理距离而聚类.研究发现滇龙胆表型变异式样丰富,对其资源的保护和利用具有重要意义.
- 杨维泽金航杨美权赵振玲张智慧王元忠张金渝
- 关键词：居群表型性状环境因子
- 滇龙胆1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因GrDXR的克隆、序列分析与原核表达被引量：4
- 2014年
- 目的从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆萜类合成关键酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因GrDXR,进行序列分析和原核表达。方法根据滇龙胆转录组中GrDXR基因序列,设计引物,通过RT-PCR扩增得到GrDXR开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrDXR,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达。结果 GrDXR ORF全长1 425 bp,编码474个氨基酸。序列分析表明,GrDXR基因是DXR家族成员;蛋白质序列系统发育分析表明,GrDXR与萝芙木RvDXR、橡胶树HbDXR和长春花CrDXR亲缘关系较近。构建pGEX-4T-1-GrDXR重组质粒,获得稳定的原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论克隆了GrDXR基因,建立其稳定的原核表达体系,为进一步纯化GrDXR蛋白,研究其结构和功能奠定基础。
- 张晓东赵静李彩霞李涛王元忠
- 关键词：基因克隆原核表达
- 龙胆苦苷生物合成途径研究进展被引量：12
- 2014年
- 龙胆苦苷属裂环烯醚萜类化合物,是传统中药龙胆的主要有效成分,具有抗炎、保肝、利胆、健胃、抗肿瘤等药理活性,其生物合成途径可分为异戊烯基焦磷酸合成、裂环番木鳖酸生物合成和龙胆苦苷生物合成3个阶段,受脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶、脱氧木酮糖磷酸盐还原异构酶、细胞色素P450等多种酶的调控。本文综述了近年龙胆苦苷生物合成及其调控机制的研究现状,旨在为龙胆苦苷生物合成及其调控机制的进一步研究提供参考。
- 王彩云张晓东沈涛李涛李富生王元忠
- 关键词：龙胆苦苷生物合成MVAMEP转录因子
- 药用植物复合种植研究进展被引量：20
- 2013年
- 复合种植在中国有着悠久的历史,在世界其他国家也被广泛应用。药用植物的复合种植是对传统中药材种植模式的优化,一定程度上缓解了中药材与作物争地的矛盾,对中药资源的可持续发展具有重要意义。本文综述了药用植物复合种植的概念、发展历史、理论基础以及主要模式,分析了复合种植对药用植物生长、产量、药效成分、病虫害防治的影响,对药用植物复合种植产生的生态效益和经济效益进行评价,探讨了药用植物复合种植研究有待解决的问题和发展前景,为药用植物栽培者合理种植提供依据。
- 李远菊张霁王元忠张金渝金航
- 关键词：药用植物生态学
- 不同胁迫条件对滇龙胆种子萌发的影响被引量：6
- 2013年
- 【目的】探讨环境胁迫对不同贮藏条件滇龙胆种子萌发的影响,为滇龙胆人工栽培和规范化种植提供指导。【方法】以不同年份、不同贮藏方式滇龙胆种子为材料,探讨不同pH、水分胁迫和茶叶水提液对种子发芽率、萌发时间和胚芽长度的影响。【结果】干藏1年种子在所有处理下均未发芽。在pH为7.0时,冷藏1年和当年种子发芽率最高(71.0%和58.5%),胚芽长度最长(5.46和4.90 mm)。在5%PEG处理下,冷藏1年和当年种子发芽率最高(73.0%和60.0%);PEG对种子胚芽长度的抑制作用最明显;10%～15%PEG对当年种子的萌发时间影响显著;在相同水分胁迫条件下,冷藏1年种子的发芽率均高于当年种子,而平均萌发时间均显著低于当年种子。在茶叶水提取物处理中,冷藏1年和当年种子的发芽率和胚芽长度均随茶叶水提取物质量体积分数的上升而下降,种子发芽率、萌发时间和胚芽长度均以对照最高;茶叶水提取物对当年种子的化感作用更明显。【结论】弱酸、适度水分胁迫环境有利于滇龙胆种子萌发,低质量体积分数的茶叶水提取物对滇龙胆种子化感作用较小,冷藏可以打破滇龙胆种子的休眠。
- 张霁王元忠杨绍兵杨天伟金航
- 关键词：PH水分胁迫化感作用种子萌发
- 滇龙胆GrCYP450-17基因的克隆、序列分析与原核表达被引量：2
- 2014年
- 目的从滇龙胆幼叶中克隆萜类合成相关酶基因GrCYP450-17,进行序列分析和原核表达。方法根据滇龙胆转录组中GrCYP450-17基因序列,设计引物,通过RT-PCR扩增得到GrCYP450-17开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrCYP450-17,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下进行表达。结果 GrCYP450-17 ORF全长1 545 bp,编码514个氨基酸。序列分析表明,GrCYP450-17基因是CYP714家族成员;蛋白质序列系统发育分析表明,GrCYP450-17与番茄SlCYP450亲缘关系最近。构建pGEX-4T-1-GrCYP450-17重组质粒,获得稳定的原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论克隆了GrCYP450-17基因,建立其稳定的原核表达体系,为进一步纯化GrCYP450-17蛋白、研究其结构和功能奠定基础。
- 张晓东李彩霞李泽君李涛王元忠
- 关键词：基因克隆原核表达
- 滇龙胆中萜类物质积累的动态变化被引量：21
- 2011年
- 滇龙胆(Gentiana rigescens)为传统中药材。采用单因素方差分析比较不同生长季节滇龙胆的根部及茎叶部位龙胆苦苷、獐牙菜苦苷及当药苷含量的动态变化。结果表明,在不同生长季节,滇龙胆的根部与茎叶部位3种有效成分的含量具明显差异。龙胆苦苷主要积累于根部;獐牙菜苦苷、当药苷主要积累于茎叶部位。相关性分析表明,龙胆苦苷含量受气候因子的影响,月平均温度与茎叶部位龙胆苦苷含量呈极显著负相关(R=-0.57,P<0.01),月降水量与根部、茎叶部位龙胆苦苷含量呈显著(R=-0.48,P<0.05)或极显著(R=-0.74,P<0.01)负相关;根中当药苷含量与獐牙菜苦苷含量呈极显著正相关(R=0.62,P<0.01),茎叶部位獐牙菜苦苷含量与当药苷含量呈显著正相关(R=0.38,P<0.05)。研究结果表明,滇龙胆中龙胆苦苷含量受降水量和温度的影响;龙胆苦苷、獐牙菜苦苷及当药苷的含量变动具相关性;9-11月较适宜滇龙胆药材的采收。
- 沈涛杨美权赵振玲张智慧王元忠金航张金渝王跃华
- 关键词：龙胆苦苷獐牙菜苦苷萜类
- 滇龙胆甲羟戊酸二磷酸脱羧酶基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2015年
- 为获得滇龙胆GrMDC基因序列,以滇龙胆转录组为基础,采用RT-PCR技术从滇龙胆幼叶克隆GrMDC基因,并进行原核表达和组织特异性表达分析。结果表明:滇龙胆GrMDC基因(登录号KJ917169)全长1 275bp,GrMDC蛋白相对分子量为46.77kD,pI为5.97;该蛋白可能定位于细胞质,无信号肽,为亲水不稳定蛋白,主要由α-螺旋和无规则卷曲构成;GrMDC蛋白与长春花CrMDC蛋白相似性较高(88.12%),且亲缘关系最近;GrMDC基因在大肠杆菌中表达的重组蛋白相对分子质量约为72.77kD(含GST标签26kD),与预期蛋白大小一致;GrMDC基因主要在根中表达。
- 张晓东李彩霞王元忠
- 关键词：基因克隆原核表达组织特异性表达
- WRKY在植物次生代谢物合成中的作用及研究进展被引量：5
- 2013年
- WRKY蛋白是被广泛研究的一类DNA特异结合转录因子,其通过结合植物次生代谢生物合成途径关键酶基因的启动子元件来调节代谢过程。次生代谢物种类繁多,结构多样,在植物中广泛存在,在自然界中起重要作用,具有较高的应用价值。综述了WRKY转录因子的起源、进化、结构,及其对萜类、黄酮类、生物碱等次生代谢物生物合成的调控,为植物次生代谢物的进一步开发利用提供参考,同时也为植物次生代谢途径的研究提供依据。
- 王彩云张晓东沈涛李涛王元忠李富生
- 关键词：WRKY次生代谢生物合成萜类生物碱
