广东省医学科学技术研究基金(A2007228)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 溶血素的定点突变及与表面蛋白A的表达
- 2010年
- 目的利用基因定点突变技术扩增Ply突变基因△Ply,基因重组技术构建△Ply与PspA基因的串联融合表达蛋白PspA-△Ply。方法根据肺炎链球菌TIGR4型表面蛋白A和溶血素基因序列设计引物,定点突变法扩增Ply突变基因,PCR法扩增PspA基因。运用基因重组技术构建pET32a-PspA-△Ply表达载体,双酶切与测序验证重组质粒;重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经不同时间、不同温度、不同浓度IPTG诱导表达融合蛋白,Western免疫印迹鉴定表达产物。结果 Ply突变基因测序证实ply基因的△A146R147碱基成功突变,双酶切与测序证实pET32a-PspA-△Ply构建正确,Western免疫印迹见重组质粒转化菌在120×103现特异性条带。结论成功实现Ply基因的定点突变,构建PspA-△Ply融合蛋白表达载体,为研究新型抗肺炎链球菌蛋白疫苗奠定基础。
- 薛新娜陈茶李有强鄂顺梅曾建明林冬玲
- 关键词：肺炎链球菌溶血素融合蛋白
