上海市科学技术委员会基础研究重点项目(03JC14016)
- 作品数：8 被引量：38H指数：4
- 相关作者：李大金杜美蓉朱影王明雁孟毅更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院中国科学院上海生命科学研究院海南医学院附属医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会基础研究重点项目国家教育部“985工程”全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 环孢素A对人早孕期滋养细胞MMP-9与MMP-2表达的调控作用被引量：7
- 2007年
- 本研究的目的是探讨环孢素A对人早孕期滋养细胞侵袭能力及基质金属蛋白酶9与2 (matrix metalloproteinase 9 and 2,简称MMP-9与MMP-2)表达的调节作用,为治疗反复自然流产等妊娠疾患提供新的线索。侵袭试验观察CsA对人早孕期滋养细胞侵袭能力的调节作用;RT-PCR与明胶酶谱分析CsA对滋养细胞MMP-9与MMP-2 mRNA及蛋白水平表达的影响;In-cell West- ern检测CsA作用后滋养细胞ERK1/2磷酸化水平。结果发现,1．0μmol/L CsA明显增强滋养细胞侵袭能力,MEK激酶抑制剂U0126可抑制CsA对滋养细胞的促侵袭作用;1．0μmol/L CsA可诱导MMP- 9与MMP-2基因的转录与蛋白分泌;该诱导效应同样可被U0126所阻滞;1．0μmol/L CsA以时间依赖方式促进ERK1/2的磷酸化。结果表明,CsA可激活ERK1/2,通过MAPK/ERK1/2途径促进滋养细胞MMP-9与MMP-2基因的转录与蛋白分泌,从而增强滋养细胞的侵袭能力,对滋养细胞生物学功能具有良性调节作用。
- 周雯慧杜美蓉董琳朱晓勇贺银燕李大金
- 关键词：环孢素A滋养细胞基质金属蛋白酶
- 环孢素A作用于人滋养层细胞差异表达的功能基因被引量：2
- 2006年
- 目的探讨环孢素A(cyclosporin A,CsA)作用于人滋养层细胞差异表达的功能基因。方法应用抑制性消减杂交筛选1.0μmol.L-1CsA作用于JAR细胞系前后差异表达的功能基因,经RT-PCR及蛋白质印迹进一步验证CsA作用前后原代分离的人早孕期滋养层细胞及JAR细胞株titin表达的变化。结果CsA作用于人JAR细胞系前后出现6个具有差异表达的基因,其中1个为已知基因titin,2个为功能未知的mRNA,3个为位于16号染色体上的EST。RT-PCR显示,CsA作用于人滋养层细胞24 h后出现titinmRNA的表达,72 h达高峰,并呈现明显的剂量依赖性,1.0μmol.L-1CsA作用最明显。蛋白质印迹显示,CsA可诱导titin的表达。结论CsA可能通过诱导滋养层细胞titin的高表达,改变其生物学行为,从而有利于胚胎着床及早期发育。
- 杜美蓉闫凤亭李大金严缘昌李逸平金莉萍王明雁朱影袁敏敏孟毅
- 关键词：环孢素A滋养层细胞抑制性消减杂交反转录-聚合酶链反应蛋白质印迹
- Cyclosporin A通过MEK/ERK1/2信号通路调节滋养细胞titin表达被引量：5
- 2005年
- 探讨MEK/ERK1/2信号通路在Cyclosporin A(CsA)诱导滋养细胞表达titin中的作用。应用RT-PCR、Western blot检测CsA诱导的滋养细胞titin的表达水平,Western blot检测CsA作用于滋养细胞后ERK1/2的活化程度,并观察MEK特异性抑制剂U0126对其mRNA转录的影响。发现CsA以时间和剂量依赖方式诱导titin表达,并刺激滋养细胞ERK1/2的活化,U0126以剂量依赖方式抑制CsA诱导的titin表达。结果表明CsA通过活化MEK/ERK1/2信号通路诱导滋养细胞titin 的表达,改变其生物学行为,从而有利于胚胎着床及早期发育。
- 杜美蓉李大金严缘昌金莉萍王明雁朱影袁敏敏孟毅
- 关键词：ERK1/2滋养细胞信号通路MEKMRNA转录BLOT胚胎着床
- 环孢素A诱导自然流产模型孕鼠脾脏CD4^+CD25^+Foxp3^+的调节性T细胞扩增及外周母胎免疫耐受被引量：15
- 2007年
- 目的:探讨环孢素A(Cyclosporin A,CsA)对小鼠自然流产模型妊娠预后及外周母胎免疫耐受的影响。方法:以正常妊娠模型CBA/J×BALB/c为对照组,自然流产模型CBA/J×DBA/2为研究组,CBA/J孕鼠于妊娠第4天分别腹腔注射5mg/kgCsA。单向混合淋巴细胞反应分析孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力,ELISA分析上清液IL-2分泌水平,流式细胞术分析脾细胞CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞扩增,并观察两种模型各组胚胎吸收率。结果:于妊娠第4天腹腔注射CsA显著降低自然流产模型孕鼠胚胎吸收率以及孕鼠外周免疫细胞对父系抗原的增殖能力与IL-2分泌(P<0.01,P<0.01,P<0.01),促进脾脏CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞亚群扩增(P<0.01)。结论:孕早期腹腔注射CsA可诱导自然流产模型孕鼠外周免疫细胞对父系抗原的特异性免疫耐受,从而使自然流产模型孕鼠的妊娠结局达到正常妊娠水平,提示CsA可能成为治疗妊娠失败的有效药物。
- 杜美蓉董琳周雯慧闫凤亭朱晓勇李大金
- 关键词：环孢素A自然流产模型免疫耐受
- 环孢素A对人蜕膜免疫细胞分泌IL-10与IFN-γ的调控作用被引量：11
- 2006年
- 探讨环孢索A（CsA）对人早孕期母胎界面主要组成细胞IL-10与IFN-γ分泌的调节作用，为反复自然流产等妊娠疾患的治疗提供新线索。收集6～10孕周行人工流产术的正常妊娠妇女绒毛和蜕膜组织；分离、培养蜕膜免疫细胞、滋养细胞与蜕膜基质细胞；ELISA法检测给予环孢素A（0μmol／L，1μmol／L）24、48、72h后蜕膜免疫细胞、滋养细胞及蜕膜基质细胞培养上清中IL-10与IFN-γ分泌水平。结果显示，（1）1μmol／L CsA可以明显促进人早孕期蜕膜免疫细胞分泌IL-10（P〈0．01）．并抑制其产生IFN-γ（P（0．01）；1μmol／L CsA不影响原代培养的人早孕期滋养细胞与蜕膜基质细胞IL-10的分泌（P〉0．05）；不论是否给予CsA处理，原代培养的人早孕期滋养细胞与蜕膜基质细胞均不产生IFN-γ。结果表明，CsA通过促进蜕膜免疫细胞分泌IL-10，并抑制其产生IFN-γ，从而有利于母胎界面形成Th2型免疫优势。
- 周雯慧杜美蓉董琳贺银燕李大金
- 关键词：环孢素A滋养细胞蜕膜基质细胞免疫细胞
- CD1332/AC141——一种滋养层细胞新的细胞内标志被引量：2
- 2004年
- 目的 了解CD133在滋养细胞的表达情况 ,为鉴定滋养细胞株及原代分离的滋养细胞提供新的细胞内标志。 方法 通过胰蛋白酶 /DNaseⅠ分步消化 ,Percoll密度梯度离心分离纯化滋养细胞 ,经抗角蛋白 (CK 7)、波形蛋白 (vimentin)单克隆抗体行免疫细胞化学和流式细胞仪 (FACS)鉴定 ,纯度达 95 %以上。采用三种不同的CD133荧光标记单克隆抗体在70 %的甲醇固定前后对原代分离的滋养细胞和绒毛膜上皮癌细胞株 (JAR)行FACS分析。 结果 70 %甲醇固定前 ,三种CD133单克隆抗体均不能与滋养细胞反应 ;固定后 ,抗CD133 1(AC133 1 APC)、抗CD133 2 (2 93C3 PE)仍不能与滋养细胞反应 ,而抗CD133 2 (AC14 1 PE)与滋养细胞胞内抗原结合。而且AC14 1阳性的细胞也是CK 7阳性的细胞。 结论 CD133 2 /AC14 1可作为滋养细胞纯度鉴定的一种有用标志 ,但应用时应选择合适的抗体。
- 杜美蓉李大金王明雁朱影袁敏敏孟毅
- 环孢素A诱导妊娠失败模型孕鼠外周母-胎免疫耐受被引量：4
- 2006年
- 目的探讨环孢素A(cyclosporin A,CsA)能否诱导妊娠失败模型CBA/J×DBA/2孕鼠外周母-胎免疫耐受。方法分别使用CBA/J×DBA/2及CBA/J×BALB/c作为妊娠失败模型和正常妊娠模型,CBA/J小鼠于妊娠第4天(着床期)腹腔注射不同剂量(0、5、10、15mg/kg)CsA,妊娠第9天和第14天时分别采用单向混合淋巴细胞反应分析孕鼠外周脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力,并用RT-PCR分析细胞IL-2mRNA含量以研究脾脏细胞母-胎免疫耐受状态;妊娠第14天观察两组的胚胎吸收率。结果(1)于妊娠第4天腹腔注射5、10、15mg/kg CsA后,妊娠失败模型胚胎吸收率分别下降至2.86%、5.75%及11.24%,明显低于对照组(P<0.001,P<0.01,P<0.01);而对妊娠成功模型胚胎吸收率无显著性影响(P>0.05)。(2)混合淋巴细胞反应研究显示,于妊娠第4天腹腔注射CsA,可使妊娠第9、14天的妊娠失败模型孕鼠外周脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力显著下降(P均<0.01);RT-PCR分析显示,孕鼠脾细胞受父系抗原刺激后IL-2转录显著下降(P均<0.01)。结论于孕早期腹腔注射CsA可诱导妊娠失败模型孕鼠外周免疫细胞对父系抗原的特异性免疫耐受,从而使自然流产模型孕鼠的妊娠结局达到正常妊娠水平,提示CsA可能成为治疗妊娠失败的有效药物。
- 闫凤亭杜美蓉李大金程海东王明雁朱影孟毅
- 关键词：环孢素A混合淋巴细胞反应IL-2免疫耐受
- 环孢素A对人滋养细胞nm23-H1表达的调控作用被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨环孢素A(CsA)对人滋养细胞系Bewo的23号非转移性基因(nometastatic gene 23)H1型即nm23-H1表达的调控作用,为治疗滋养细胞疾病提供新的依据。方法:将Bewo细胞分为对照组(加溶媒)、环孢素组加入终浓度由10-2μmol/L-10μmol/L环孢素A。分别于48h后用RT-PCR检测nm23-H1基因mR-NA表达水平,于72h后用Incell Western分析nm23-H1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,nm23-H1的表达水平随环孢素A浓度10-2μmol/L-1μmol/L呈现降低趋势,其中1.0μmol/L环孢素Anm23-H1 mRNA和蛋白水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);当浓度升高至10μmol/L时,nm23-H1则呈升高趋势。结论:低浓度环孢素A可通过降调节nm23-H1的表达,继而改善滋养细胞的侵袭力。
- 侯晓帆谢可鸣李明清李大金
- 关键词：环孢菌素NM23-H1滋养细胞
