国家重点实验室开放基金(PPB003)
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- 豌豆肌动蛋白异型体PEAc3的原核表达及其聚合特性分析
- 2010年
- 植物肌动蛋白在植物顶端生长、细胞分裂分化和细胞信号转导等多种生命活动中发挥着重要作用。豌豆中存在多种肌动蛋白异型体。研究豌豆肌动蛋白异型体PEAc3与组氨酸标签(His-tag)及绿色荧光蛋白(GFP)的融合表达,并分析了融合蛋白的聚合特性。采用RT-PCR的方法克隆PEAc3基因,构建原核表达载体pET30 a-His-PEAc3-GFP。用DNAman生物学软件分析表明,PEAc3融合蛋白全长675个氨基酸,分子量74.74 ku,等电点5.81。将pET30 a-His-PEAc3-GFP转入大肠杆菌BL21中,优化的诱导表达条件为:25℃,当菌液OD600达到0.8时加入IPTG(浓度0.1 mmol/L),诱导表达4 h。采用尿素变性复性、镍柱亲和层析的方法从包涵体中纯化获得高纯度融合蛋白。融合蛋白His-PEAc3-GFP能够体外聚合,聚合临界浓度为0.5μmol/L。单体His-PEAc3-GFP对DNaseⅠ有抑制作用,聚合后对肌球蛋白Mg-ATPase活性有一定的激活作用。上述结果表明,原核表达的His-PEAc3-GFP可能具有类似于一般肌动蛋白的聚合特性。
- 张少斌刘曦刘国琴
- 关键词：豌豆肌动蛋白
