安徽省自然科学基金(03023056)
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
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- 相关机构：安徽医科大学第一附属医院安徽医科大学徐州市第一人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 从Hep-2细胞克隆hFGF-2 cDNA及序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的 从Hep 2细胞(人喉鳞癌细胞)克隆人的FGF 2cDNA,用于下一步构建携带hFGF 2cDNA的非复制型腺病毒载体。方法 设计和合成引物,提取Hep 2细胞的总mR NA,通过RT PCR扩增出目的cDNA,然后将其重组到pGEM TEasy载体中送测序分析。结果 经基因测序分析表明,从Hep 2细胞克隆的hFGF 2基因序列与已报告的序列,除在ATG后的第24位碱基发生无意突变外(由G→A),其他序列则完全一致。结论 从Hep 2细胞的总mRNA中成功克隆出hFGF 2的基因片段。
- 王帮河何金生汪春兰赵宇汪红俊曹东升
- 关键词：成纤维细胞生长因子2DNA
- 腺病毒载体介导VEGF cDNA和bFGF cDNA联合治疗缺血皮瓣的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的探讨以腺病毒载体局部应用血管内皮生长因子(Ad-VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(Ad-bFGF)基因治疗对大鼠缺血皮瓣生存的影响。方法50只SD大鼠随机分成5组,每组10只。在其背部形成8cm×2cm的缺血皮瓣。于皮瓣远端皮下分别注射Ad-VEGF和Ad-bFGF(目的基因组),Ad-VEGF(基因对照组),Ad-bFGF(基因对照组)Ad-GFP(绿色荧光蛋白基因对照组),PBS(磷酸盐缓冲液空白对照组)。48h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7d,测量皮瓣的成活面积及免疫组化,组织学检查等。结果目的基因组皮瓣成活面积比及单位面积微血管密度与其它4个对照组有显著性差异。免疫组化目的基因组毛细血管周围VEGF、bFGF沉积。结论以腺病毒为载体局部应用VEGF和bFGF基因能增加缺血皮瓣的成活面积。
- 王伟曹东升王帮河汪春兰
- 关键词：血管内皮细胞生长因子碱性成纤维细胞生长因子腺病毒皮瓣
- 腺病毒介导血管内皮生长因子基因促进大鼠随意皮瓣的早期断蒂
- 2006年
- 目的:探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣,对皮瓣早期断蒂的影响。方法:实验于2004-08/2005-09在安徽医科大学第一附属医院外科动物实验中心及中心实验室完成。健康SD雄性大鼠30只,随机分成3组:目的组、绿色荧光蛋白对照组、空白对照组,每组10只。所有实验大鼠背部设计2cm×6cm随意皮瓣,蒂位于髂脊水平。皮瓣形成后,术时即刻将磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因溶液(目的组)、磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带绿色荧光蛋白溶液(荧光蛋白对照组)、磷酸盐缓冲液溶液(空白对照组)1mL注射到大鼠皮瓣内,给药后即刻以3-0丝线原位缝合,继续单笼饲养。所有实验大鼠皮瓣4d后断蒂,断蒂后7d观测皮瓣存活面积,取皮瓣远端存活区组织苏木精-伊红染色,光镜下观察组织学变化,免疫组织化学染色检测血管内皮细胞生长因子165表达情况,用CD34免疫组织化学染色计算血管密度。结果:①断蒂后7d,所有实验动物全部存活,皮瓣存活区与坏死区已经明确。②皮瓣存活率、皮瓣血管断面密度目的组和对照组之间差异有显著性犤皮瓣存活率:目的组为(98.8±1.5)%,荧光蛋白对照组为(78.3±2.5)%,空白对照组为(79.2%±2.4)%;皮瓣血管断面密度:目的组为(49.6±6.3)个/高倍视野,荧光蛋白对照组为(37.5±3.0)个/高倍视野,空白对照组为(39.5±3.0)个/高倍视野,P<0.05犦,对照组之间差异没有显著性(P>0.05)。③免疫组织化学染色各组均可见棕黄色颗粒沉积,目的组比对照组染色深。④组织学观察,目的组皮瓣真皮、肉芽及肌肉中可见大量毛细血管,而对照组较少。结论:应用重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣具有促进皮瓣早期断蒂的作用。
- 朱华锋汪春兰曹东升王帮河丁浩赵宇
- 关键词：腺病毒科内皮生长因子基因疗法
- 应用碱性成纤维细胞生长因子基因治疗促进大鼠早期断蒂皮瓣的成活被引量：4
- 2006年
- 目的探讨腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子基因(Ad-bFGF)对大鼠随意皮瓣早期断蒂的影响。方法SD♂大鼠,普通级,随机分成3组:Ad-bFGF目的组、Ad-GFP对照组、PBS对照组,每组10只。于大鼠背部设计2cm×6cm随意皮瓣,蒂位于髂脊水平。术后4d断蒂,断蒂后7d观测皮瓣成活面积,检测bFGF表达情况,计算血管密度。结果目的组皮瓣的成活率、血管密度和染色深度均较两对照组有显著差异(P<0.05)。结论应用Ad-bFGF基因治疗能够促进大鼠随意皮瓣早期断蒂。
- 朱华锋汪春兰赵宇曹东升丁浩王帮河王伟王兴宇姚远
- 关键词：基因疗法外科皮瓣
- 可表达骨形态发生蛋白-4的真核表达载体的构建与鉴定
- 2006年
- 目的构建含有骨形态发生蛋白(hBMP)-4的真核表达载体pcDNA3·1(+)/hBMP-4。方法将质粒pCS2(+)/hBMP-4用EcoRⅠ单酶双切获得目的基因片段,真核载体pcDNA3·1(+)用EcoRⅠ酶切线性化,对上述两种酶切产物分别回收纯化后进行连接,筛选出正确的转化子,并进一步转染COS-7细胞,提取总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和Western-blot检测。结果获得了含有目的基因片段的真核表达载体,酶切及基因测序提示构建正确,RT-PCR检测到目的基因的转录,Western-blot检测到hBMP-4蛋白表达。结论利用非定向克隆技术将目的基因转移至真核表达载体中,为进一步研究目的基因打下基础。
- 王兴宇汪春兰李栋梁赵宇王帮河何金生
- 关键词：骨形态发生蛋白质类基因表达
- 从Hep-2细胞克隆hVEGF165/VEGF121基因及序列分析被引量：1
- 2004年
- 目的 从Hep 2 (喉鳞癌细胞 )克隆hVEGF16 5、hVEGF12 1cDNA并重组到克隆载体中 ,用于下一步构建表达VEGF 16 5、VEGF 12 1的腺病毒载体。方法 设计和合成引物 ,提取Hep 2细胞的总mRNA ,进行逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR) ,扩增出两个目的cDNA ,并将其重组到pGEM TEasy载体中送测序。 结果 从Hep 2细胞的总mRNA中反转录扩增得到 5 88bp和 4 5 6bp的片段 ,经重组送测序证实两基因分别与GenBank中的 [GI:1990 90 6 4 ]及[GI :6 6 310 2 8]提供序列完全一致。结论 从Hep 2细胞我们成功获得VEGF16 5、VEGF12 1的cDNA并构建其克隆载体可供进一步研究。
- 王帮河汪春兰何金生赵宇汪红俊曹东升
- 关键词：喉肿瘤内皮生长因子HEP-2
- 腺病毒载体介导的VEGF_(165)基因治疗大鼠缺血皮瓣的实验研究被引量：4
- 2006年
- 目的 探讨局部应用以腺病毒为载体的血管内皮生长因子（Ad-VEGF165）基因治疗对大鼠缺血皮瓣生存的影响.方法 选用SD大鼠30只,体重350～400 g,随机分成3组,每组10只,在其背部形成8 cm×2 cm的全厚随意型皮瓣.于皮瓣远端皮下分别注射携带血管内皮生长因子基因的腺病毒（Ad-VEGF165目的基因组,简称VEGF165组）,携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒（Ad-GFP基因组对照,简称GFP组）,磷酸盐缓冲液（PBS空白对照组,简称PBS组）,48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7天,测量皮瓣的成活面积,计算成活面积百分比,并采集成活皮瓣组织行免疫组化、组织学检查等.结果 皮瓣成活面积百分比：VEGF165组为（69.4±1.3）%,GFP组为（52.2±1.7）%,PBS组为（52.9±2.9）%,VEGF165组皮瓣成活面积百分比明显高于GFP组和PBS组（P＜0.01）.免疫组化显示VEGF165组毛细血管周围VEGF沉积,组织切片微血管密度明显高于GFP组和PBS组（P＜0.01）.结论 局部皮下注射Ad-VEGF165可诱导局部VEGF蛋白表达,促进新生血管的形成,提高缺血皮瓣的成活面积,是一种简单有效的基因治疗方法.
- 王伟曹东升王帮河丁浩宁金龙
- 关键词：血管内皮细胞生长因子腺病毒皮瓣
