国家自然科学基金(30170696) 作品数:39 被引量:137 H指数:7 相关作者: 张西臣 李建华 尹继刚 赵权 张伟信 更多>> 相关机构: 吉林大学 吉林农业大学 解放军军需大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 吉林省科技厅基础研究项目 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 化学工程 更多>>
应用RAPD技术对鸡柔嫩艾美耳球虫不同地理株的多态性研究 被引量:9 2003年 利用RAPD技术对鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)GZ株、HB株、JL株及HB株与JL株杂交虫株FZ1进行了研究。结果表明:E.tenella不同地理株间及同一地理株亲代与子代间均存在DNA多态性。其中不同地理株间种内变异程度较大(SI=0.6225~0.6977)。而同一地理株子代与亲代间也发生遗传变异,但变异程度不大(SI=0.9813~0.9910)。同时对本室培育的HB株与JL株的杂交虫株FZ1的基因组DNA进行RAPD分析,发现该杂交株与其亲本HB株、JL株的相似值为0.8215,0.7916,大于HB株与JL株间相似值(0.6977),小于传代虫株间的相似值(0.9813~0.9910),且其扩增条带显示出与亲本株间的相似,且又有不同,表明该杂交虫株是1株既具有两亲本株的遗传性状,又发生了变异的虫株。 张伟信 张西臣 李建华 赵权 尹继刚 杨举 田宗成关键词:RAPD技术 柔嫩艾美耳球虫 地理株 鸡柔嫩艾美耳球虫免疫保护性研究 被引量:1 2004年 张伟信 张西臣 喻建军关键词:柔嫩艾美耳球虫 免疫保护率 免疫保护性 细胞免疫 柔嫩艾美球虫杂交株F2 SO_7基因重组鸡痘病毒的构建和筛选 被引量:5 2006年 目的构建柔嫩艾美球虫(E.tenella)杂交株F2SO7基因重组鸡痘病毒。方法将柔嫩艾美球虫杂交株F2SO7基因,插入到以胸苷激酶(TK)基因为侧翼的鸡痘病毒表达载体pUTA2中的复合启动子下游,获得重组表达质粒pUTA-SO7。用脂质体将重组表达质粒转染鸡痘病毒(FPV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),培养、收获病毒后,用含40mg/L5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)的培养液,在TK基因阳性CEF细胞中筛选培养2代,然后用不含BrdU的培养液进行病毒噬斑纯化以筛选rFPV。结果PCR扩增可见650bp左右蛋白条带,间接荧光抗体试验(IFAT)可见重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质,蛋白质印迹分析(WesternBlotting),在相对分子质量(Mr)36000处有1条特异条带,证实了重组病毒在CEF中表达了SO7基因。结论成功筛选出表达E.tenella杂交株F2SO7基因的重组鸡痘病毒。 杨桂连 张西臣 赵权 李建华 尹继刚关键词:柔嫩艾美球虫 鸡痘病毒 不同地理株及其杂交株柔嫩艾美耳球虫免疫保护性研究 被引量:5 2005年 将不同地理株及其杂交株的柔嫩艾美耳球虫的孢子化卵囊饲喂肉鸡,选择12日龄的AA肉鸡进行免疫,首免的剂量为1×104。免疫10d后攻虫,剂量为1×103。攻虫后以排卵数、增重、粪便记分、盲肠病变记分等指标测定其免疫功能,并计算各株的保护率。结果表明:杂交株的柔嫩艾美耳球虫的免疫保护率明显高于亲本株。 赵权 张西臣 张伟信 尹继刚 李建华 杨贵连 徐朋 门静涛关键词:地理株 柔嫩艾美耳球虫 免疫保护性 不同地理株柔嫩艾美耳球虫免疫保护性研究 2010年 为了研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)不同地理株的免疫保护性,试验采用E.tenella广州株、保定株、长春株、山东株、黑龙江株对AA肉鸡分别进行免疫和攻虫,通过OPG计数、粪便计分、盲肠病变计分、增重测定、保护率计算、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞检测评价免疫保护效果。结果表明:广州株对于同株攻虫的免疫保护率显著高于其他虫株(P<0.05);广州株、保定株、山东株、长春株、黑龙江株对于其他株攻虫的平均免疫保护率分别为72.8%、66.5%、63.7%、58.2%、52.7%,广州株极显著高于长春株和黑龙江株(P<0.01);各株均能引起2种T淋巴细胞数量增加。说明E.tenella不同地理株的免疫保护性不同。 魏峰 殷丽红 许越 梁泽本 杨欢欢 张西臣关键词:柔嫩艾美耳球虫 地理株 免疫 五种不同地理株柔嫩艾美耳球虫免疫保护性比较 被引量:5 2006年 用五个不同地理株的柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella),即:广州株、保定株、长春株、北京株、沈阳株,对12日龄雏鸡分别进行免疫攻虫。通过OPG计数,粪便计分,盲肠病变计分,增重测定,计算保护率。结果发现不同地理株球虫的免疫保护率有明显差异,广州株80.2%>保定株73.2%>长春株68.4%>北京株63.8%>沈阳株51.0%。其中广州株比其他虫株有显著保护率(P<0.01)。免疫后的雏鸡抽血进行CD4+、CD8+T细胞检测,结果各株均能引起两种T细胞数量增加,表明CD4+、CD8+T细胞在球虫免疫中起着重要作用。 张伟信 张西臣 李建华关键词:柔嫩艾美耳球虫 免疫保护性 柔嫩艾美耳球虫GZ株子孢子表面抗原基因的克隆及序列分析 被引量:1 2003年 利用RT -PCR方法从柔嫩艾美耳球虫 (Eimeriatenella)的孢子化 10h卵囊中扩增出了λMZ5- 7基因 ,并把该基因片段克隆到pMD18-T载体上 ,对阳性克隆进行PCR鉴定及酶切分析并进行测序。结果表明 ,该序列全长 936bp ,为一完整的开放阅读框 ,与国外报道的柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子表面抗原基因λMz5- 7的同源性为 98% ,氨基酸的同源性为 95.6 %。该基因的克隆有望用于基因工程苗的研究。 秦睿玲 张西臣 李建华 秦建华 田宗成 尹继刚关键词:克隆 长春市肉鸡球虫抗药性调查 被引量:3 2010年 为了研究吉林省长春市6种艾美耳球虫(Eimeria)对5种常用抗球虫药物的抗药性,试验采用AA肉仔鸡,以最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)为判定指标。结果表明:6种艾美耳球虫对莫能菌素无抗药性,对地克珠利有轻度抗药性,对马杜霉素和盐霉素有中度抗药性,对氯羟吡啶有完全抗药性。 魏峰 许越 殷丽红 杨欢欢关键词:艾美耳球虫 抗球虫药 抗药性 肉鸡 柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)HB株SO_7’基因的克隆和序列分析 被引量:4 2004年 对柔嫩艾美耳球虫 (E .tenella)HB株SO7’基因进行了克隆和序列分析。以纯化的E .tenellaHB株孢子化卵囊的总RNA为模板 ,应用RT -PCR扩增出HB株SO7’基因。将HB株SO7’基因插入 pMD18-T载体 ,经PCR及酶切鉴定为阳性的克隆进行测序分析。结果表明 :该序列为一全长 6 5 1个核苷酸的开放阅读框 ,富含CAG和CTG重复序列 ,可编码 2 16个氨基酸。SO7’ -HB与国外株SO7’ -LS18比较 ,核苷酸序列同源性为 99.2 % ,开放性读框中有 5个核苷酸突变 ,其中 3个为有义突变 ,使推测氨基酸V变为A ,A变为V ,S变为G ,二者推测氨基酸序列同源性为 98.6 %。 李建华 张西臣 朱连勤 贾世斋 尹继刚 杨举关键词:柔嫩艾美耳球虫 克隆 氨基酸 Isolation of E.tenella JL Strain Single-oocyst and PCR Identification 2009年 [Objective] In order to get a purified strain to carry out the relative molecular biology research about E.tenella. [Method] The single-oocyst isolation method was improved and the isolated single-oocyst which was put into capsule was fed to chickens. At the same time, the collected oocysts were identified by PCR method. [Result] The oocysts were isolated from feces of 15 chickens among that of 20 chickens and the infection rate was 75%. The PCR results demonstrated that the single-oocyst strain was E.tenella. [Conclusion] The inoculation of single oocyst capsule was simple, besides, this method did not only save time but also declined inoculation difficulty, increased infection rate and provided good materials for biological research of coccidian. 杨桂连 李建华 张西臣 赵权 宫鹏涛 蔡亚南 张国才