陕西省国际科技合作计划(2007-KW-06)
- 作品数：3 被引量：20H指数：3
- 相关作者：吕社民宁启兰韩燕高玉王飞苗更多>>
- 相关机构：西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省国际科技合作计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小反应体积实时定量PCR的可行性评价被引量：4
- 2010年
- 目的从扩增稳定性、扩增效率以及可靠性等多方面评估实时定量PCR（RtPCR）反应小体积的可行性,同时确定适合小体积体系的模板量。方法将实验分为10、15、20μL 3个体积组,每组分别采用0.1、0.2、0.3、0.4μL的大鼠cDNA为模板,进行大鼠-βactin mRNA的RtPCR扩增。通过扩增曲线和熔解曲线考察反应的稳定性,以梯度模板拟合标准曲线获得反应的扩增效率,其线性相关程度反映模板量是否合适。另外,构建大鼠降植烷诱导的关节炎（pristane-induced arthritis,PIA）模型,采用选定的反应体系,分别对模型组和正常组大鼠脾脏TNF-αmRNA进行扩增,通过TNF-α的相对表达趋势反映小体积扩增的可靠性。结果在大鼠-βactin mRNA的RtPCR扩增中,10、15、20μL 3个体积组均能特异稳定地进行扩增,并保证高扩增效率。而且每个体积组中的模板梯度表现出很好的线性相关趋势。同时选用10μL和20μL反应体积、0.2μL模板对关节炎大鼠脾脏进行TNF-αmRNA扩增,结果一致表现出了预期的显著性上调。结论实验证实10μL、15μL等小反应体积应用于RtPCR扩增中是可行的,具有较好的稳定性和可靠性,同时0.10.4μL cDNA模板在3种体系的合适模板范围内。这种较小的PCR反应体积,不仅节省了试剂和实验材料,对一些来之不易的临床标本尤为重要,也利于高通量大规模的RtPCR检测的实现。
- 韩燕朱文华何晓静蒋丛姗宁启兰吕社民孟列素
- 关键词：实时定量PCR稳定性可靠性
- 利用TRIzol 试剂和液氮提取大鼠胰腺高质量总RNA被引量：10
- 2009年
- 目的建立胰腺高质量总RNA快速、经济、稳定的提取方法。方法应用TRIzol试剂和液氮提取大鼠胰腺总RNA,通过总RNA含量和A260/280比值的测定及10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳评估总RNA的质量,并用RT-PCR检测大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶和β-actin的表达。结果利用TRIzol和液氮提取的大鼠胰腺总RNA量可达到3～6μg/mg胰腺组织,A260/280比值在1.75～1.89之间。在10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳时,均可见28S及18S条带,并且在28S、18S条带间可见明显的云雾状阴影。大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶、β-actin RT-PCR产物电泳结果显示均有清晰的条带。结论应用TRIzol试剂和液氮成功地提取了大鼠胰腺高质量的总RNA,后者可用于RT-PCR研究。
- 李冬民任吴超王璇王飞苗高玉韩燕宁启兰宋天保吕社民
- 关键词：大鼠胰腺总RNA提取液氮
- Th22型细胞与炎症性疾病的关系被引量：6
- 2010年
- Th22型细胞是一种最新发现的辅助性T细胞亚群,表型为CCR6+CCR4+CCR10+,关键转录因子是芳香烃受体(AHR),主要分泌IL-22,通过活化信号传导及转录激活因子3(STAT3)而发挥作用。在类风湿性关节炎、银屑病、异位性皮炎以及Crohn’s病等患者中IL-22均表达升高,而在IL-22-/-小鼠,胶原诱导的关节炎(CIA)的发病率及发病严重程度均显著下降;在急性呼吸窘迫综合症和系统性红斑狼疮患者的血清中,IL-22的表达水平下降;IL-22对肝炎时的肝细胞存活起保护作用。总之,Th22在炎症性疾病的发病过程的作用是非常复杂的。
- 侯卫坤周艳吕社民
- 关键词：IL-22炎症性疾病
