国家自然科学基金(81272151)
- 作品数：11 被引量：62H指数：6
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- 低强度脉冲超声波对兔膝骨性关节炎软骨整合素-FAK-MAPKs信号通路蛋白表达的影响被引量：11
- 2016年
- 目的:观察低强度脉冲超声波(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对兔膝骨性关节炎(osteoarthritis,OA)软骨中整合素-FAK-MAPKs力化学细胞信号转导通路相关蛋白表达的影响。方法:18只成年新西兰大白兔随机平均分成3组,分为正常对照组(normal control,NC),OA模型组(OA group,OA),OA模型照射组(O+L)。OA组接受右侧后肢前交叉韧带切断(ACLT)处理术后4周接受LIPUS假辐射,O+L组同样手术处理,术后4周接受LIPUS辐射,NC组仅切开关节囊。LIPUS作用6周后,处死实验动物,取右后肢,采用HE染色行改良Mankin评分比较各组胫骨平台关节表面病理学改变。同时,采用Western blot技术检测Ⅱ型胶原,MMP-13,整合素β1的蛋白表达水平以及FAK、MAPKs家族蛋白(p38、ERK1/2、JNK)磷酸化水平。结果:1组织学观察及Mankin评分:LIPUS干预后,OA软骨表层轻微不平整,染色轻度缺失,可见软骨细胞增殖;Mankin评分,NC组:4.67±0.57;OA组:10.57±2.55;O+L组:7.66±1.74。与NC组相比,OA组、O+L组Mankin评分明显增高,但OA组增高更为明显(P<0.05);与OA组相比,O+L组Mankin评分明显降低(P<0.05)。2Ⅱ型胶原、MMP-13含量:LIPUS干预后,II型胶原含量较NC组升高,MMP-13含量有明显下降。3整合素β1-FAK-MAPKs信号通路相关蛋白表达:LIPUS干预使整合素β1、磷酸化FAK表达增高;同时MAPKs信号通路相关蛋白ERK1/2、p38磷酸化水平明显下降,而JNK磷酸化水平无明显变化。结论:LIPUS可以减轻骨性关节炎软骨ECM损伤程度,与LIPUS产生机械应力使关节软骨中细胞表面应力受体之一整合素β1及其下游分子黏着斑激酶FAK磷酸化表达增高,进一步下游的磷酸化p38,ERK1/2表达下调有关。LIPUS的机械效应可经力化学转导途径作用于OA关节软骨,为治疗骨性关节炎提供一种新的思路。
- 沈士浩程凯林强夏鹏高明霞任莎莎李雪萍
- 关键词：低强度脉冲超声波整合素粘着斑激酶丝裂原活化蛋白激酶
- 低强度脉冲超声经整合素-FAK-p38MAPK通路对膝关节脂肪垫共培养下软骨细胞的影响被引量：1
- 2017年
- 目的观察低强度脉冲超声（LIPUS）通过整合素．黏着斑激酶（FAK）-p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路对膝关节脂肪垫共培养下软骨细胞的影响。方法24例女性膝脂肪垫及膝关节软骨均由骨科手术室提供，年龄25～35岁，均为膝关节急性外伤手术患者，排除其他膝关节病史。切取脂肪垫行苏木精-伊红染色（HE）；制作脂肪垫培养液（FCM）；于表面完好部分提取正常软骨细胞进行体外培养，按随机数字表法分成对照组、模型组（正常软骨细胞＋FCM）、治疗组（正常软骨细胞＋FCM＋LIPUS干预）和抑制剂组（正常软骨细胞＋FCM＋LIPUS＋整合素抑制剂GRGDSP干预）。采用Ⅱ型胶原（COL2）免疫细胞化学染色法比较并鉴定对照组与模型组的软骨细胞。治疗组和抑制剂组接受LIPUS辐射，LIPUS辐射强度为40mW／cm2，每次辐射20min，每日1次，每周6d；其余各组接受LIPUS假辐射。第6天收集各组细胞，应用免疫印迹（Western blot）技术检测软骨细胞中Ⅱ型胶原、蛋白多糖（Acan）、基质金属蛋白酶（MMP）-13、整合素B1、磷酸化FAK（p-FAK）、磷酸化p38（p-p38）的蛋白含量。结果免疫细胞化学染色显示，模型组软骨细胞表达的COL2免疫反应物显著少于对照组。Western blot检测显示，模型组COL2、Acan蛋白含量[（0．16±0．04）、（0．12±0．02）]较对照组[（0．55±0．03）、（0．62±0．03）]降低，MMP-13、整合素B1、p-FAK和p-p38蛋白含量[（0．49±0．04）、（0．34±0．04）、（0．33±0．05）和（0．51±0．04）]较对照组[（0．07±0．02）、（0．13±0．03）、（0．16±0．04）和（0．10±0．03）]增高，且组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。与模型组相比，治疗组COL2、Aean、整合素BI和p-FAK蛋白含量[（0．42±0．07）、（0．50±0．07）、（0．74±0．06）和（0．64±0．07）]增高，而MMP-13、p-p38蛋白含量[（0．3
- 瞿燕萍程凯林强高明霞夏鹏任莎莎张婷婷李雪萍
- 关键词：低强度脉冲超声软骨细胞脂肪垫整合素Β1
- 低强度脉冲超声对兔膝骨性关节炎骨软骨连接血管形成与侵袭的影响被引量：3
- 2016年
- 目的观察低强度脉冲超声（LIPUS）对早期兔膝骨性关节炎骨软骨连接血管形成与侵袭的影响。方法18只新西兰大白兔按随机数字表法分为对照组、模型组和治疗组，每组6只，模型组和治疗组接受前交叉韧带切断法手术，4周后建立早期骨性关节炎疾病模型，而对照组仅接受假手术处理。治疗组接受LIPUS辐射治疗4周，模型组和对照组仅接受LIPUS假辐射。采用番红O-固绿染色比较各组膝关节骨软骨连接血管形成与侵袭情况；采用免疫印迹（Westernblot）技术检测各组的整合素β1、磷酸化黏着斑激酶（p-FAK）、磷酸化p38、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、血管内皮生长因子（VEGF）及软骨调节素（CHM）-1蛋白表达水平。结果模型组和治疗组与对照组比较，骨软骨连接血管形成明显增多，潮线出现漂移、重复，结构紊乱，甚至消失，部分血管突破潮线，侵入非钙化软骨层，而治疗组较模型组病理改变明显减轻。模型组的整合素β1、p-FAK和VEGF表达水平[（0．92±0．07）、（0．83±0．09）和（1．02±0．10）]较对照组[（0．45±0．04）、（0．18±0．03）和（0．35±0．02）]明显增高，且组间差异有统计学意义（P〈0．05）；模型组的p38和JNK磷酸化水平[（0．99±0．11）和（1．86±0．06）]亦较对照组[（0．31±0．04）和（0，38±0．03）]明显增高（P〈0．05）；而模型组的ChM-1表达（0．61±0．04）较对照组（1．91±0．08）下降，且差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗组与模型组比较，治疗组的整合索β1和p-FAK表达[（1．10±0．09）和（1．09±0．08）]亦较模型组明显增高，组间差异有统计学意义（P〈0．05）；但治疗组的VEGF表达（0．58±0．06）较模型组明显降低（P〈0．05），治疗组的p38和JNK磷酸化水平[（0．54±0．09）和（1．29±0．08）]亦较模型组降低，且差异有统计学意义（
- 杨怀春夏鹏瞿燕萍任莎莎林强程凯王晓菊高明霞李雪萍
- 关键词：骨性关节炎血管形成低强度脉冲超声整合素Β1
- 低强度脉冲超声波对早中期兔膝骨性关节炎软骨细胞外基质及MAPKs信号通路的影响被引量：13
- 2013年
- 目的:研究低强度脉冲超声波(LIPUS)对早中期兔膝骨性关节炎(OA)软骨细胞外基质(ECM)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的影响,探讨LIPUS对关节软骨损伤修复和延缓退变的作用机制。方法:36只健康新西兰兔随机分成6组,早期对照组(EC组)、早期OA组(EO组)、早期治疗组(ET组)、中期对照组(MC组)、中期OA组(MO组)和中期治疗组(MT组),6只/组。EO、ET、MO及MT组均接受左后肢前交叉韧带切断术(ACLT),对照组仅接受左侧膝关节囊切开术。ET组和MT组分别于术后第3天和第5周起接受LIPUS治疗。超声频率3MHz,强度40mW/cm2,作用时间20min,1次/d,6d/周,持续6周。EO与MO组的LIPUS方案与治疗组相同,但无超声输出。LIDUS6周后,采用甲苯胺蓝染色进行关节软骨的组织学观察,并进行Mankin评分。采用免疫印迹法检测蛋白多糖、Ⅱ型胶原、磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)及p38(p-p38)的变化。结果:③组织学观察及Mankin评分:EO组关节软骨表面不规则、甲苯胺蓝染色变浅、软骨细胞减少,与EC组相比,Mankin评分显著升高(P<0.01);MO组关节软骨损伤明显,Mankin评分较MC组显著升高(P<0.01)。与EO组相比,ET组病理学改变程度轻,Mankin评分显著降低(P<0.01);但MT组Mankin评分较MO组无显著降低(P>0.05)。③Ⅱ型胶原、蛋白多糖检测:与EC组比较,EO组和ET组均下降,但EO组较ET组明显下降(P<0.05);与MC组相比,MO和MT组均显著降低(P<0.05),MO组与MT组间无显著差异(P>0.05)。③p-ERK1/2、p-p38检测:与EC组相比,EO组表达量显著升高(P<0.05),但与EO组相比,ET组显著降低(P<0.05);与MC组相比,MO组和MT组表达显著升高(P<0.05),MT组与MO组间无明显差异(P>0.05)。结论:LIPUS可以减轻关节软骨ECM的损伤程度,其作用与LIPUS治疗后关节软骨中p38、ERK1/2表达下调有关,这种作用与OA的病变阶段密切相关,即在OA早期进行LIPUS作用更明显。
- 高明霞程凯林强王大新于俊龙林爱翠安恒远陈安亮李雪萍
- 关键词：细胞外基质丝裂原活化蛋白激酶
- 骨性关节炎的免疫炎性发病机制研究进展被引量：8
- 2017年
- 骨性关节炎（Osteoarthritis,OA）是一种以关节软骨的损伤、退变以及软骨下骨的硬化、增生、囊变,继而导致关节间隙狭窄为特征的慢性退行性疾病[1]。近年来越来越多的研究显示免疫学机制参与了OA的发病过程[2],OA已不再被视为简单的＂磨损和撕裂＂,而是由蛋白酶介导的慢性炎症反应[3]。在OA的病理进程中,炎症可促进形成滑膜炎及破坏骨和软骨[4]。本文将就近年来OA发病过程中的免疫机制研究进展作一综述。
- 瞿燕萍李雪萍
- 关键词：骨性关节炎炎症免疫机制
- 膝骨关节炎脂肪垫对关节软骨细胞的影响被引量：2
- 2017年
- 目的:观察人膝骨关节炎(OA)脂肪垫对正常及OA关节软骨细胞的影响。方法:24例人膝脂肪垫和膝关节软骨均由骨科手术室提供,12例为膝关节急性外伤手术患者,12例为膝OA患者行关节置换术后。切取正常及OA膝脂肪垫行苏木精-伊红染色(HE)及瘦素免疫组织化学染色;用OA膝脂肪垫制作脂肪垫培养液(FCM);于急性膝外伤手术标本的表面完整处提取正常软骨细胞,于膝OA关节置换术标本提取OA软骨细胞,分别进行体外培养并鉴定,随机分成正常组、OA组、正常+FCM组及OA+FCM组,其中正常组和OA组均加入完全高糖培养基,正常+FCM组和OA+FCM组均加入FCM,对各组细胞进行形态学观察,于第14天将各组软骨细胞予Ⅱ型胶原(COL2)免疫组化染色及油红O染色,同时应用Western blot技术检测各组软骨细胞中COL2、聚蛋白多糖(Acan)和基质金属蛋白酶(MMP-13)的表达情况。结果:(1)COL2免疫组化染色:OA组软骨细胞内的COL2免疫组化染色平均吸光度比正常组显著降低(P<0.05)。与OA组相比,正常+FCM组软骨细胞内的COL2免疫组化染色平均吸光度无明显差异,而OA+FCM组显著降低(P<0.05)。与正常+FCM组相比,OA+FCM组软骨细胞内的COL2免疫组化染色平均吸光度显著降低(P<0.05)。(2)油红O染色:OA组软骨细胞内的油红O染色平均吸光度与正常组相比差异无统计学意义。与OA组相比,正常+FCM组和OA+FCM组软骨细胞内的油红O染色平均吸光度均有增高(P<0.05),但OA+FCM组增高更为显著(P<0.05)。(3)Western blot结果:OA组COL2、Acan的表达水平低于正常组(P<0.05),而MMP-13的表达高于正常组(P<0.05)。与OA组相比,正常+FCM组COL2、Acan和MMP-13的表达水平无明显差异;相较于正常组及正常+FCM组,OA+FCM组COL2、Acan的表达水平降低(P<0.05),而MMP-13的表达水平增高(P<0.05)。结论:OA膝FCM能使正常及OA软骨细胞形态上发生脂肪样变,并通过代谢途径提高软骨细胞MMP-13的表达,加速软�
- 瞿燕萍高明霞夏鹏张婷婷程凯林强李雪萍
- 关键词：膝骨关节炎软骨细胞髌下脂肪垫
- 低强度脉冲超声对兔膝骨性关节炎软骨细胞整合素-局部粘着斑激酶-促分裂原活化蛋白激酶力化学转导通路相关蛋白表达的影响被引量：7
- 2014年
- 目的观察低强度脉冲超声（LIPUS）对兔膝骨性关节炎（OA）软骨细胞中整合素。局部粘着斑激酶（FAK）-促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）力化学信号转导通路相关蛋白表达的影响。方法共选取18只新西兰大白兔，其中12只进行膝OA造模，其余6只作为正常对照。于制模后第4周处死实验兔，提取软骨细胞进行体外培养并鉴定。将所培养细胞分为正常对照组、OA模型组及OA超声组。待细胞传至第2代时，正常对照组及OA模型组细胞不给予任何处理，OA超声组细胞则给予LIPUS辐射。于LIPUS持续作用1周后收集各组细胞，应用Westernblot技术检测各组细胞中Ⅱ型胶原、蛋白多糖、基质金属蛋白酶（MMPs）．13、整合素B1、FAK、MAPK（如p38、ERKl／2、JNK）蛋白表达以及磷酸化蛋白表达情况。结果①OA模型组及OA超声组Ⅱ型胶原、蛋白多糖含量均较正常对照组明显降低（P〈0．05），并以OA模型组下降幅度较显著，与OA超声组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。②OA模型组及OA超声组MMP一13含量均较正常对照组明显增高（P〈0．05），并以OA模型组增高幅度较显著，与OA超声组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。③OA模型组及OA超声组整合素pl、磷酸化FAK含量均较正常对照组明显增高，且以OA超声组增高幅度较显著，与OA模型组问差异具有统计学意义（P〈0．05）。④OA模型组磷酸化p38、ERKl／2及JNK含量均较正常对照组明显增加（P〈0．05），OA超声组上述指标则较OA模型组显著降低（P〈0．05）。结论LIPUS体外辐射可抑制OA软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖降解及MMP-13表达，同时还能促进整合素Bl表达以及FAK磷酸化，抑制p38、ERKl／2、JNK磷酸化，提示LIPUS辐射可能通过启动整合素一FAK—MAPK力学信号转导通路诱导软骨细胞外基质发生改变。
- 夏鹏李雪萍林强程凯沈士浩任莎莎高明霞
- 关键词：低强度脉冲超声软骨细胞整合素促分裂原活化蛋白激酶
- 低强度脉冲超声经PI3K/Akt通路调控兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的作用机制研究被引量：12
- 2015年
- 目的:探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对兔膝骨性关节炎(OA)软骨细胞凋亡的影响及有关作用机制。方法:共选取30只新西兰大白兔,随机分为正常对照组(A组)、OA模型组(B组)、OA+LIPUS组(C组)、OA+LY294002(PI3K/Akt抑制剂)组(D组)、OA+LY294002+LIPUS组(E组),每组各6只。采用右后膝前交叉韧带切断术(ACLT)造模。于造模后第6周时采用空气栓塞法处死实验兔,切取软骨组织进行组织学观察,并进行Mankin评分;提取软骨细胞进行体外培养并采用免疫组化染色法鉴定;应用western blot检测各组软骨细胞中Ⅱ型胶原(COL2)、MMP-13、Akt、pAkt、P53、Bcl-2蛋白表达情况。结果:B组COL2、pAkt、Bcl-2蛋白含量较A组降低,MMP-13、P53蛋白含量较A组增高(P<0.05)。与B组相比,C组COL2、pAkt、Bcl-2蛋白含量增高,MMP-13、P53蛋白含量下降(P<0.05);D组COL2、Bcl-2、pAkt蛋白含量下降,MMP-13、P53蛋白含量升高(P<0.05),E组COL2、MMP-13、P53、Bcl-2、pAkt蛋白含量无明显变化,但与C组、D组相比差异显著(P<0.05)。各组Akt蛋白表达无明显差异。结论:LIPUS能通过PI3K/Akt通路降低兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡率,促进抗凋亡基因Bcl-2表达,下调促凋亡基因P53水平,促进关节软骨损伤修复。
- 任莎莎李雪萍林强程凯夏鹏杨怀春高明霞
- 关键词：低强度脉冲超声软骨细胞PI3K/AKT通路凋亡
- 应力负荷与关节软骨损伤被引量：10
- 2013年
- 骨性关节炎（osteoarthritis，OA）是一种进行性关节退变疾病，不仅损害关节软骨，亦对关节周围肌肉、肌腱、韧带、滑囊等软组织产生不利影响，最终导致关节软骨结构和功能完整性的破坏。美国最新的一项258，237人的大样本研究报告指出，全美约有14％的成人患有骨性关节炎并因此严重影响其生存质量，且用于治疗相关花费人均高达18，435美元，其支出为同等情况下非骨性关节炎患者两倍之多。据我国调查，60岁以上人群中OA的患病率可达50％，75岁以上的人群中则达80％，致残率可高达53％，已经成为影响中老年人生存质量的主要问题。应力负荷长期以来被认为是骨骼肌肉组织的调节器，很有可能是关节软骨自稳态最重要的单一外界调节因素，非生理性的关节应力负荷，即过大或过小的关节应力负荷都会造成关节软骨损害，并最终导致OA形成”吲。适度的运动训练给予关节内适度的应力负荷，
- 沈士浩李雪萍
- 关键词：关节软骨损伤应力负荷骨性关节炎肌肉组织关节炎患者关节退变
- 股骨偏心距变化对全髋关节置换后关节疼痛及功能的影响被引量：2
- 2015年
- 背景:全髋关节置换后股骨偏心距以及髋距旋转中心的恢复和重建直接影响患者的关节功能。但是,目前临床上关于全髋关节置换后股骨偏心距改变对患者疼痛及关节功能的影响尚缺乏研究。目的:探讨股偏心距改变对全髋关节置换后关节疼痛及其功能恢复的影响。方法:对162例全髋关节置换患者资料进行分析,根据患者置换侧与健侧偏心距差距值分为3组,减小组30例置换侧偏心距和健侧<-5 mm;正常组87例置换侧和健侧偏心距差距在-5-5 mm;增加组45例置换侧偏心距和健侧>5 mm。比较各组股骨柄及骨头假体类型,评估患者置换前后SF-12量表评分、骨关节炎指数评分(WOMAC)及Harris评分,并进行对比分析。结果与结论:减小组、正常组以及增大组更多的以标准偏心距股骨柄假体为主,分别占77%,63%,73%(P>0.05);各组患者置换侧与健侧股骨柄假体平均股骨偏心距差异无显著性意义(P>0.05)。3组患者置换后WOMAC评分和置换前相比均明显提高(P<0.05);置换前3组之间WOMAC评分差异无显著性意义(P>0.05);置换后3组相关疼痛、僵硬等差异无显著性意义(P>0.05),躯体功能差异有显著性意义(P<0.05),正常组躯体功能评分最高。3组患者置换前后SF-12量表评分差异无显著性意义(P>0.05);置换后3组患者体能评分和置换前相比均得到提高(P<0.05);而精神评分除增大组外均得到显著提高(P<0.05)。增大组Harris评分优良率为96%,显著高于减小组(70%)和正常组(87%),差异有显著性意义(P<0.05)。提示偏心距增大更加有利于全髋关节置换后疼痛缓解,促进功能恢复;偏心距减小则会加剧患者疼痛,不利于置换后关节功能恢复。
- 郭鹏飞周敬杰范静李书钢
- 关键词：骨科植入物人工假体股骨偏心距全髋关节置换躯体功能
