国家自然科学基金(31171248)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- FM4-64和Hoechst染料在活细菌胞膜和拟核标记定位中的条件优化与应用被引量：3
- 2015年
- 【目的】为了观察细菌细胞膜和拟核的形态结构,准确对亚细胞进行定位。【方法】本文利用FM4-64和Hoechst两种染料,分别采用不同浓度和不同时间对大肠杆菌活细胞进行染色和荧光共聚焦显微成像,并对7种细菌的活细胞(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鼠疫耶尔森菌、军团菌、霍乱弧菌和炭疽芽孢杆菌)进行染色观察。【结果】相同观察条件下,不同染料浓度和不同的染色时间影响了细胞膜、拟核的荧光强度;确定了FM4-64染色通用条件(浓度20μg/m L染色1 min)和Hoechst的最佳条件(浓度20μg/m L染色20min)。上述条件下,Hoechst对8种细菌染色效果均较理想,然而FM4-64对细菌染色效果不同,革兰氏阴性菌(大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、鼠疫耶尔森菌、霍乱弧菌、铜绿假单胞菌和军团菌)表现较好的细胞膜轮廓,革兰氏阳性菌(炭疽芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌)效果较差。【结论】FM4-64和Hoechst两种染料共染8种细菌,对细胞膜和拟核的染色观察,可为原核细胞结构染色提供借鉴,并为大分子的亚细胞定位研究奠定基础。
- 王净韩延平杨瑞馥赵兴绪
- 关键词：细胞膜
- 鼠疫耶尔森菌外源获得性pPCP1质粒编码小RNA的筛选、鉴定与功能的初步研究
- 2015年
- 目的鉴定鼠疫耶尔森菌外源获得性p PCP1质粒编码的小RNA,并评价其在生物膜、压力耐受性和毒力方面的功能。方法基于前期鼠疫菌转录组测序结果,分析获得外源性p PCP1质粒编码的高丰度小RNA,提取鼠疫菌总RNA,利用Northern印迹实验验证这些小RNA存在与否。利用λ-Red同源重组技术敲除p PCP1质粒上已证实的小RNA,并对小RNA缺失株在生物膜褶皱形成、高盐耐受性和致病性等方面进行初步的表型筛选。结果与结论 Northern印迹法鉴定了鼠疫菌p PCP1质粒上7个小RNA的存在。在此基础上,获得5个小RNA的缺失突变株,其中sR3446缺失后鼠疫菌生物膜褶皱形成能力减弱;sR3446、sR3457、sR4338和sR4340缺失后鼠疫菌对高盐环境的耐受能力减弱,而sR6143缺失后对高盐环境的耐受能力增强;sR4338和sR4340缺失后鼠疫菌毒力有所减弱。上述结果提示,鼠疫菌外源获得性p PCP1质粒上的小RNA在鼠疫菌应激和致病过程中可能发挥重要作用。
- 王红朵刘子中王子迎杨瑞馥韩延平
- 关键词：鼠疫耶尔森菌小RNA毒力
- Alexa-555 WGA和FM4-64在活细菌定位中的比较应用
- 2017年
- 为了准确定位亚细胞形态,本试验比较应用Alexa-555 WGA和FM4-64两种染料,为研究者合理选择染料提供线索。以大肠杆菌(Escherichia coli)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)为对象,使用Hoechst 33342标记拟核,FM4-64标记细胞膜,Alexa-555 WGA标记细胞壁,Perkin Elmer Ultra VIEW Vo X荧光共聚焦显微镜观察成像。FM4-64染料适合于革兰氏阴性菌细胞膜染色,Alexa-555 WGA染料对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌细胞壁染色效果均较好。Alexa-555 WGA能用于不同类型细菌细胞壁的定位。本研究首次将Alexa-555 WGA染料应用于原核生物,可为细菌的亚细胞定位研究提供借鉴。
- 王净韩延平杨瑞馥
- 关键词：WGA细胞壁
