国家自然科学基金(81272163)
- 作品数：14 被引量：45H指数：4
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- 口服法舒地尔治疗EAE对巨噬细胞、T细胞及TLR/NF-B通路的作用研究被引量：3
- 2016年
- 目的探讨口服盐酸法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)小鼠巨噬细胞及TLR/NF-B通路的作用。方法采用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55肽(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55peptide,MOG35-55)诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,将EAE小鼠随机分为EAE模型组和Fasudil治疗组,免疫后第3天给予Fasudil治疗组小鼠Fasudil灌胃干预,直到免疫后第27天,EAE模型组同样处理给予等量生理盐水。光镜观察脊髓组织CD4+T细胞/CD68巨噬细胞表达的变化,Western blot法测定脊髓诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、Toll样受体2(TLR-2)、TLR-4和磷酸化核因子B(p-NF-B)蛋白的表达,ELISA法测定培养72h脾细胞分泌细胞因子的含量。结果与EAE模型组比较,Fasudil组CD4+T细胞数和CD68巨噬细胞数明显减少(P<0.01),巨噬细胞M1表型iNOS表达减少(P<0.05),M2表型Arg-1表达增加(P<0.01),炎性通路蛋白p-NF-B、TLR-2和TLR-4表达减少(P<0.05),外周细胞炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)和IL-17分泌减少(P<0.05),而IL-10分泌增加(P<0.05)。结论口服Fasudil可抑制CD4+T细胞/CD68巨噬细胞的激活,促进巨噬细胞表型M1向M2转化,抑制脊髓组织中p-NF-B、TLR-2和TLR-4的表达,抑制外周免疫细胞炎性因子分泌,而增加IL-10的分泌。
- 于婧文张辉宋国斌李自青尉杰忠刘春云张海飞刘建春王青肖保国李艳花马存根
- 关键词：巨噬细胞神经通路
- 新型Rho激酶抑制剂FSD-C11化合物抑制EAE的作用研究被引量：7
- 2015年
- 目的探索新型Rho激酶抑制剂FSD-C11化合物治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的有效性及可能的作用机制,为今后可能的临床治疗提供实验依据。方法采用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽诱导雌性C57BL/6小鼠建立EAE模型,于免疫后第3天起FSD-C11组按体质量40mg/(kg·d)腹腔注射FSD-C11化合物,EAE组注射等量生理盐水,实验期间每天定时记录两组小鼠临床症状评分及体质量变化。免疫后第28天取小鼠脊髓进行HE和髓鞘染色,流式细胞术检测脾细胞M1和M2型巨噬细胞表型,Western blot检测脑组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和磷酸化核蛋白因子κB(p-NF-κB)的表达。结果FSD-C11化合物可延迟小鼠的起病时间,降低发病率,减轻临床症状,减少体质量丢失;与EAE组小鼠相比,FSD-C11可减少脊髓炎性细胞浸润和髓鞘脱失(P<0.05);抑制致炎性的M1型巨噬细胞,增加抗炎性和保护性的M2型巨噬细胞;抑制脑组织中iNOS和p-NF-κB蛋白的表达。结论新型Rho激酶抑制剂FSD-C11化合物在治疗EAE中显现出很好的潜力,其作用机制可能与调节巨噬细胞极性、抑制炎性反应有关。
- 于婧文李艳花张辉丁智斌尉杰忠刘春云杨婉芳冯前进黄建军赵永飞肖保国马存根
- 关键词：RHO相关激酶类法舒地尔脑脊髓炎
- 新型Rho激酶抑制剂WAR5治疗EAE的初步研究被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨新型Rho激酶抑制剂WAR5对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗效果及其可能的作用机制。方法:雌性C57BL/6小鼠,随机分为EAE组和WAR5治疗组。EAE模型采用MOG35-55多肽诱导,免疫后第3天起隔天腹腔注射WAR5或生理盐水至第27天,观察并比较临床症状和体重变化。免疫后第28天处死动物,取脊髓进行HE和髓鞘染色,流式细胞术检测脾细胞M1和M2型巨噬细胞表型。提取脑和脊髓组织蛋白,采用Western blotting检测脑和脊髓诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果:WAR5治疗能有效推迟临床发病时间,非常显著减轻EAE临床症状。病理检查发现WAR5治疗减少EAE髓鞘脱失和中枢神经系统炎症浸润。同时,WAR5抑制M1型巨噬细胞CD16/32表达,还可增加M2型巨噬细胞CD206表达,并且能够抑制脑和脊髓中iNOS的表达水平。结论:新型Rho激酶抑制剂对EAE有明显的治疗效果,可能与其诱导炎症性M1型巨噬细胞向抗炎性的M2表型转化、从而抑制中枢神经系统的炎症反应有关。
- 丁智斌张辉杨兴旺张海飞尉杰忠李艳花刘春云杨婉芳李俊莲冯前进赵永飞肖保国马存根
- 关键词：法舒地尔巨噬细胞一氧化氮合酶
- 法舒地尔治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠与其调节T细胞免疫应答有关被引量：1
- 2016年
- 目的探讨法舒地尔对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果及作用机制。方法雌性C57BL/6小鼠,采用MOG_(35-55)多肽诱导建立慢性EAE模型,随机分为早期治疗组、晚期治疗组和EAE对照组。早期和晚期治疗组分别在免疫后第3日和疾病症状出现时,腹腔注射法舒地尔40 mg·kg^(-1)·d^(-1),观察各组小鼠体重变化和临床症状评分。免疫后第29日处死动物,取脊髓行HE染色和髓鞘染色;制备脾脏单个核细胞,应用流式细胞术检测T细胞亚群的变化;采用ELISA法观察细胞因子水平。结果法舒地尔治疗可推迟EAE发病时间(早期治疗,P<0.01),减轻临床症状(早期治疗,P<0.01;晚期治疗,P<0.05),减少炎性细胞浸润和髓鞘脱失(早期治疗,P<0.01;晚期治疗,P<0.05)。早期治疗组IL-17^+CD4^+T细胞比例显著低于EAE对照组(P<0.01),晚期治疗组IL-10^+CD4^+T细胞比例高于EAE对照组(P<0.01),同时早期和晚期治疗组IFN-γ^+CD4^+T细胞比例显著高于EAE对照组(均P<0.01)。此外,法舒地尔还可抑制MOG_(35-55)诱导的IL-17的分泌,促进IL-10的分泌。结论法舒地尔显示了治疗EAE的潜能,其机制可能与抑制Th17细胞分泌、促进Th2细胞表达有关。
- 刘春云郭尚德张年萍刘建春郭文娟于婧文肖保国马存根
- 关键词：法舒地尔实验性自身免疫性脑脊髓炎T细胞免疫调节
- 法舒地尔对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺后突触损伤的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨法舒地尔(Fasudil)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧糖剥夺(OGD)后突触损伤的影响。方法:培养SH-SY5Y细胞,分为空白对照组、OGD组、OGD+法舒地尔组,各3皿。相差光学显微镜下观察细胞突触损伤及修复的细胞形态;Western-Blot检测ROCKⅡ、磷酸化肌球蛋白磷酸酶(p-MYPT1)、突触后致密物-95(PSD-95)、突触素(Synaptophysin)等蛋白的表达情况。结果:形态学显示法舒地尔可有效修复OGD诱导的神经突触损伤。OGD组ROCKⅡ及p-MYPT1的表达明显高于空白对照组(P<0.05),突触素及PSD-95的表达明显低于空白对照组(P<0.01)。OGD+法舒地尔组ROCKⅡ及p-MYPT1表达水平低于OGD组(P<0.05),而与对照组差异无统计学意义(P>0.05);突触素和PSD-95表达水平高于OGD组(P<0.01);PSD-95表达水平高于空白对照组(P<0.05),突触素的表达与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05),结论:法舒地尔可有效修复OGD诱导的神经突触损伤,增加PSD-95、突触素的表达,抑制ROCKⅡ及p-MYPT1的表达。
- 张伟张海飞马杰赵静柴智刘建春宋丽娟姜维佳肖保国马存根
- 关键词：法舒地尔SH-SY5Y细胞氧糖剥夺突触素
- 新型Rho激酶抑制剂FSD-C11对EAE的免疫调节作用被引量：1
- 2016年
- 目的探讨Rho激酶抑制剂Fasudil衍生物FSD-C11治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的免疫调节机制。方法采用MOG35-55多肽建立C57BL/6小鼠EAE模型,随机分为FSD-C11组和Saline组,于免疫后第3天起腹腔注射FSD-C11化合物和Saline。免疫后28 d处死小鼠,FACS法检测脾组织CD4+T细胞亚群,ELISA法检测外周免疫系统中细胞因子的分泌情况,Western blot法测定脊髓ROCKⅡ、i NOS、Arg-1、TLR-2和TLR-4的蛋白表达。结果 FSD-C11干预EAE能够抑制脊髓中ROCKⅡ表达,减少外周CD4+IFN-γ+T细胞,增加CD4+IL-10+和CD4+CD25+T细胞(P<0.05),减少外周免疫系统炎性细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-1β和TNF-α的含量(P<0.05),而增加IL-10的含量(P<0.05),抑制脊髓组织中巨噬细胞标志蛋白i NOS表达、增加Arg-1的表达(P<0.05)。抑制脊髓组织中TLR-2和TLR-4蛋白表达(P<0.05)。结论 FSD-C11可调节外周免疫细胞活化和增殖,抑制外周免疫系统分泌炎性因子,增加保护性的细胞因子,改善炎性微环境,促进M1型巨噬细胞向M2型转化,控制CNS的炎性细胞侵润,从而达到减轻或改善EAE的临床症状。
- 于婧文李艳花张海飞尉杰忠刘春云肖保国马存根
- 关键词：EAE免疫调节
- Fasudil联合骨髓源神经干细胞对EAE小鼠的神经保护作用被引量：4
- 2017年
- 目的:探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔(fasudil)联合骨髓源神经干细胞(bone marrow-derived neural stem cells,BM-NSCs)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的神经保护作用。方法:32只雌性C57BL/6小鼠(8~10周龄),用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫,制备EAE,随机分为对照(dd H_2O)组、fasudil组、BM-NSCs组和fasudil+BM-NSCs组,并分别给予相应处理。免疫后检测小鼠临床症状和相关神经营养因子的表达,Image-Pro Plus 6.0软件进行阳性细胞计数,Graph Pad Prism 5软件统计分析。结果:与dd H_2O组比较,fasudil+BM-NSCs处理组明显延迟小鼠的平均起病时间,降低最高临床评分,并缓解EAE小鼠的临床症状;fasudil组、BM-NSCs组和fasudil+BM-NSCs组中脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、神经生长因子、神经营养因子3和睫状神经营养因子阳性细胞数均有不同程度的增加,其中,fasudil+BM-NSCs组上述神经营养因子的表达明显多于dd H_2O组、fasudil组和BM-NSCs组(P<0.01)。结论:Fasudil联合BM-NSCs通过协同和叠加效应促进神经营养因子表达,改善中枢神经系统微环境,发挥神经保护作用,从而缓解EAE的临床症状。
- 宋国娬席国萍李艳花李加善刘建春柴智肖保国张光先马存根
- 关键词：法舒地尔骨髓源神经干细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎神经营养因子
- Rho激酶抑制剂：治疗神经系统变性疾病的潜在药物被引量：4
- 2015年
- 近10年来,由于神经影像和分子生物学迅速发展,神经系统变性疾病的诊断取得了长足进步。相比之下,其治疗仍然举步维艰。了解神经变性的细胞和分子机制,寻找真实有效的干预靶点、提高疾病预防和治疗效果是临床神经科学迫切需要解决的现实问题。近年来人们发现诸多神经变性病呈现相似的病理和重叠的临床表现,它们之间存在类似的细胞和分子机制,免疫炎性反应形成的微环境是其共同的细胞学通路,而其中Rho激酶(ROCK)的异常激活可能是其共同的分子机制之一。研究表明通过抑制ROCK的活性能够减少免疫细胞的炎性反应、抑制中枢神经系统一氧化氮(NO)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎性因子产生,改善炎性微环境保护神经元,同时抑制ROCK活性还可促进神经突触再生和神经干细胞动员分化。综上,ROCK抑制剂(Rho kinase inhibitor,RKI)有可能成为神经变性疾病的潜在药物。本文就RKI治疗神经系统变性疾病的潜在可能和相应机制进行简要综述。
- 辛延乐李艳花张辉杨兴旺杨春彦尉杰忠刘春云肖保国马存根
- 关键词：RHO激酶抑制剂神经系统变性疾病免疫炎性反应
- 法舒地尔对EAE小鼠血-脑屏障功能的保护作用及机制研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的血-脑屏障(BBB)保护机制。方法采用MOG_(35-55)肽段诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,于免疫后第3天起Fasudil组腹腔注射Fasudil[40mg/(kg·d)]干预,EAE组注射等量生理盐水,持续至免疫后第20天。于免疫后第7d、14d、21d采集小鼠脑和脊髓标本,行HE染色、脱髓鞘染色和免疫荧光染色;测定脑和脊髓伊文思蓝(EB)的渗透量;采用Western blot法检测脑内细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达情况。结果与EAE组相比,Fasudil组小鼠中枢神经系统(CNS)炎性细胞计数和髓鞘脱失面积均明显减少[分别98.00±33.15 vs.417.70±78.89,t=3.736,P<0.05;(11.38±1.09)%vs.(38.21±7.94)%,t=3.473,P<0.05]。在免疫后14d、21d,Fasudil组脑和脊髓内EB渗透量均低于EAE组(脑:9.04±0.15 vs.9.93±0.25,t=5.776,P<0.05;9.09±0.089 vs.9.83±0.22,t=3.116,P<0.05;脊髓:17.28±0.38 vs.21.33±2.21,t=7.782,P<0.05;16.48±0.71 vs.21.77±0.17,t=7.256,P<0.01)。与EAE组相比,Fasudil组小鼠脑内细胞紧密连接蛋白Occludin表达上调(7d:0.068±0.045 vs.0.127±0.022,t=6.026,P<0.05),14d:0.185±0.011 vs.0.233±0.014,t=2.609,P<0.05,21d:0.248±0.021 vs.0.364±0.121,t=2.834,P<0.01)和ZO-1(7d:2.013±0.073 vs.2.404±0.256,t=1.467,P>0.05;14d:1.783±0.129 vs.2.003±0.184,t=2.409,P<0.05;21d:1.332±0.052 vs.1.674±0.023,t=6.026,P<0.01)。结论 Fasudil可能通过抑制小鼠脑内细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的下调而保护BBB的完整性。
- 谷青芳张辉李艳花刘春云王慧卿肖保国尉杰忠马存根
- 关键词：法舒地尔实验性自身免疫性脑脊髓炎血-脑屏障
- WAR-5、Fasudil治疗EAE的疗效比较及作用机制研究被引量：1
- 2016年
- 目的比较WAR-5与盐酸法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果,并探究其作用机制。方法采用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)免疫雌性C57BL/6小鼠建立慢性EAE模型,并随机分为EAE对照组、WAR-5治疗组和Fasudil治疗组。于免疫后第3天开始,分别腹腔注射WAR-5、Fasudil及生理盐水,比较各组小鼠体质量变化和临床评分。于免疫后第28天处死各组动物,制作脊髓冰冻切片进行CD4+T细胞、CD68+巨噬细胞及核转录因子-κB(p-NF-κB/p65)染色,观察其在脊髓中的表达。提取脑组织的蛋白用Western blot法检测Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)Ⅱ和p-NF-κB/p65蛋白表达,并采用Griess法检测脾细胞培养上清液的一氧化氮(NO)释放水平。结果与EAE对照组(108.70±20.26、399.00±25.94)比较,WAR-5治疗组(13.67±4.041、52.67±13.43)及Fasudil治疗组(15.33±5.033、31.00±13.45)脊髓内CD4+T细胞和CD68+巨噬细胞数目均减少(均P<0.01),WAR-5与Fasudil两治疗组相比,差异无统计学意义。与EAE对照组(1.9500±0.3976、0.5885±0.05982)比较,WAR-5组(0.6137±0.1778、0.0096±0.0015)及Fasudil组(1.1960±0.2225、0.3574±0.1496)脑内ROCKⅡ、p-NF-κB/p65表达均降低,WAR-5治疗组脑内ROCKⅡ、p-NF-κB/p65表达亦均低于Fasudil治疗组(均P<0.05)。WAR-5和Fasudil治疗组上清液NO含量分别为(16.40±0.5247)μmol/L、(17.69±0.2833)μmol/L,均低于EAE对照组〔(20.07±0.6116)μmol/L;均P<0.001〕,且WAR-5治疗组低于Fasudil治疗组(P<0.01)。与Fasudil治疗组比较,800μg及1600μg药物注射后,WAR-5治疗组小鼠的存活状态明显较好;800μg药物注射后,WAR-5治疗组小鼠的脚趾无明显血管扩张反应。结论 WAR-5对EAE的治疗效果与Fasudil相近,且其治疗安全性较好,扩张血管作用较小,其作用机制可能与WAR-5抑制小鼠ROCKⅡ的表达及抑制炎性反应相关。
- 辛延乐李艳花丁智斌尉杰忠刘春云杨春彦吴昊姜维佳肖保国马存根
- 关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎RHO激酶核转录因子-ΚB
