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化学合成十三肽及其副产物液质联用分析被引量：2: 2004年; 利用反相高效液相色谱(RP HPLC)与电喷雾质谱(ESI MS和MS MS)联用技术直接分析用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成方法手工偶联合成的一个十三肽(Lys Lys Glu Ser Asp Phe Leu Met Phe Val Tyr Leu Val,Mr1617.8)粗产品,以探索RP HPLC ESI MS和MS MS在固相多肽合成产物分析和副反应机制研究中的应用.RP HPLC结果显示:合成粗产物中含有1个主成分,2个次要成分和多个微量成分;与之联用的电喷雾质谱同步准确地测定出各成分的相对分子质量(m z)并自动对各主要成分的化学结构进行了串联质谱分析.结果证明,粗产物中的主成分即为目标十三肽,另外几个主要副产物为十三肽的残缺肽或氧化肽.对色谱和生物质谱联用技术分析合成多肽的意义和副产物形成的可能机制进行了讨论.; 唐新科王贤纯梁宋平; 关键词：RP-HPLC 化学合成电喷雾质谱合成多肽 ESI-MS 偶联合成

多维色谱-串联质谱联用技术分离和鉴定小鼠肝脏质膜蛋白质被引量：13: 2005年; 采用自动在线纳流多维液相色谱串联质谱联用的方法分离和鉴定蔗糖密度梯度离心法分离和富集的小鼠肝脏质膜蛋白质 .以强阳离子交换柱为第一相 ,反相柱为第二相 ,在两相之间连接一预柱脱盐和浓缩肽段 .用含去污剂的溶剂提取细胞质膜中的蛋白质 ,获得的质膜蛋白质经酶解和适当的酸化后通过离子交换柱吸附 ,分别用 10个不同浓度的乙酸铵盐溶液进行分段洗脱 .洗脱物经预柱脱盐和浓缩后进入毛细管反相柱进行反相分离 ,分离后的肽段直接进入质谱仪离子源进行一级和二级质谱分析 .质谱仪采得的数据经计算机处理后用Mascot软件进行蛋白质数据库搜寻 ,共鉴定出 12 6种蛋白质 ,其中 4 1种为膜蛋白 ,包括与膜相关的蛋白质和具有多个跨膜区的整合膜蛋白 ,为建立质膜蛋白质组学研究的适宜方法和质膜蛋白质数据库提供了有价值的基础性研究资料 .; 曹锐张丽军聂松王贤纯梁宋平; 关键词：串联质谱质膜蛋白质组学

液相色谱-串联质谱分析化学合成多肽及其主要副产物(英文)被引量：20: 2003年; 用与反相高效液相色谱偶联的串联质谱 (RPHPLC MS MS)分析一个固相化学合成的九肽H2 N Tyr Val Asn Val Asn Met Gly Leu Lys CONH2 及其 2个主要的副产物 .根据Fmoc化学 ,在Fmoc PAL PEG·PS树脂上从C端至N端手工操作逐步偶联合成九肽 .偶联完成后 ,用试剂R(90 %TFA ,5 %苯甲硫醚 ,3%二巯基乙烷 ,2 %苯甲醚 )室温 (2 0～ 2 5℃ )处理 2 5h ,进行多肽的去保护和切除树脂 .RP HPLC分析结果表明 ,合成粗品中含有 1个主要成分、2个次要成分及多个微量成分 .用RPHPLC MS MS分别对主要成分和 2个次要成分进行了鉴定 .结果证明 ,主要成分即为目标九肽 ;先于目标肽洗脱的副产物分子量比目标肽的分子量多 16 .MS MS证明 ,该副产物包括 2种九肽衍生物 :1种为其Tyr1氧化生成 ,另 1种为Met6氧化生成 ;后于目标肽洗脱的副产物为九肽的Tyr1残基增加 12所致 ,这种现象尚未见报道 .; 王贤纯陈平梁宋平; 关键词：化学合成多肽副产物固相合成

牛血清白蛋白胰蛋白酶酶解产物的色谱-质谱联用分析及其三种数据库搜寻鉴定方法的比较被引量：12: 2004年; 利用反相高效液相色谱 (RP HPLC)和电喷雾串联质谱 (ESI MS MS)联用技术直接对模式蛋白分子 (牛血清白蛋白 ,BSA)的胰蛋白酶酶解产物进行分离和测定 .获得的一系列BSA酶解片段的一级 (MS)和二级 (MS MS)质谱数据经分析软件处理后 ,分别在不同处理和不同参数条件下 ,用 3种不同的方法通过网上蛋白质数据库进行蛋白质搜寻鉴定 .结果显示 ,3种搜寻法都能正确地鉴定该蛋白质 ,其中以利用MS数据的肽质量指纹谱搜寻法 (PMF法 )较为快捷方便 ,但鉴定结果易受数据处理和数据库搜寻鉴定时参数设置等因素的影响 ;利用未解析MS MS数据 (rawMS MSdata)的搜寻法可在较宽的搜寻参数变化范围内获得明确的鉴定结果 ;而借助从头测序 (denovosequencing)结果的序列搜寻法 (sequencequery)则显示出更高的专一性 ,利用较少酶解片段数据就能得到稳定和明确的鉴定结果 ,搜寻参数变化的影响很小 .就酶解条件、数据处理和搜寻参数设置对蛋白质鉴定结果的影响展开详细的讨论。; 王贤纯范春明唐新科陈平梁宋平; 关键词：色谱-质谱

基于等电聚焦-反相HPLC的虎纹捕鸟蛛毒素组学的初步研究被引量：5: 2006年; 虎纹捕鸟蛛(Ornithoctonus huwena)是中国最毒的蜘蛛之一.已有研究表明,其粗毒中含有丰富的低分子量(<10kD)多肽活性成分.为分析这些成分,利用目标蛋白快速分离系统(Proteome LabPF 2D)建立了一种新的二维液相色谱分离方法.该方法包括一维的基于蛋白质等电点(pI)的色谱聚焦分离和二维利用无孔硅胶反相柱的基于疏水性的高效液相色谱分离.得到的反相图谱通过仪器配套的ProteoVue软件转换成与凝胶电泳图像相似的pI/UV图,以更直观地显示多肽成分的数量、分布规律及相对丰度等.洗脱的多肽自动收集后用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱进行分析.从一维分离的11个馏分(pH4.53～8.59)中共检测到大约600个多肽条带.通过质谱分析测得130个多肽的精确分子量,同时通过Denovo测序得到26种多肽(其中包括12种已知多肽)的部分序列信息,并利用这些序列信息对未知多肽进行了生物信息学分析.; 周铁杨周健熊继先王贤纯; 关键词：蜘蛛二维液相色谱

化学合成ω-芋螺毒素MⅦA的复性与质谱分析被引量：7: 2003年; 为了探讨质谱分析在合成多肽氧化复性和分离纯化研究中的应用 ,用固相多肽合成方法合成ω -芋螺毒素MⅦA ,在含谷胱甘肽的缓冲体系中进行氧化复性后 ,经离子交换和RP HPLC分离纯化。利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)和电喷雾串联质谱 (ESI MS/MS)分析ω -芋螺毒素MⅦA氧化复性和分离纯化的效果 ,最后用电生理学实验测定复性ω -芋螺毒素MⅦA的生理活性。其结果表明 ,获得的ω -芋螺毒素MⅦA纯化复性样品具有与天然ω; 王贤纯梁宋平; 关键词：氧化复性质谱分析

MALDI-TOF质谱源后衰变技术鉴定2D胶蛋白点被引量：1: 2003年; PMF方法由于具有高灵敏度、高通量和容易自动化等优点,在蛋白质组学鉴定中占有重要的地位。然而,许多样品(比如:小分子蛋白,混合物等)仅仅通过PMF方法不能明确鉴定。在这种情况下,在测定PMF的同一个样品上,选择一个酶解片段峰进行PSD测序,并把这些序列信息输入MS-Tag软件进行搜索,结合PMF方法,表观分子量等电点等参数,能够对胶上的点进行明确的鉴定。本文先用PSD方法对胶上的三个标准蛋白进行鉴定,都得到了非常准确的结果,同时鉴定了胶上的几个未知点。; 聂松陈平梁宋平; 关键词：蛋白质组学

反相高效液相色谱/电喷雾质谱法分析化学合成七肽粗产物被引量：6: 2004年; 利用RP HPLC/ESI MS直接分析用芴甲氧羰基 (Fmoc)固相多肽合成方法在PHB树脂上偶联合成的一个七肽 (H2 N Tyr Val Asn Thr Asn Met Gly CO0H ,Mr 797.3 )粗产物。RP HPLC显示合成粗产物含有 1个主成分 ,4个次要成分和多个微量成分 ;与之联用的电喷雾质谱则同步准确地测定出各成分的分子量 (m/z)并自动对各主要成分的化学结构进行了串联质谱分析。结果证明 ,粗产物中的主成分即为目标七肽 ,另外几个主要副产物为七肽的氧化产物或残缺肽。; 王贤纯梁宋平; 关键词：反相高效液相色谱电喷雾质谱法

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湖南省自然科学基金(01JJY2028)

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