黑龙江省自然科学基金(ZJN0702-01)
- 作品数：13 被引量：58H指数：5
- 相关作者：李广兴任晓峰潘龙任玉东王衡更多>>
- 相关机构：东北农业大学华南农业大学浙江大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 猪IL-15对PRRSV GP5基因疫苗免疫增强作用的研究
- 本研究通过分子克隆技术构建了表达猪白细胞介素(IL)-15及猪繁殖呼吸综合症(PRRSV)病毒GP5基因重组核酸疫苗。以小鼠为实验模型,利用猪IL-15作为分子佐剂并检测其对表达PRRS病毒GP5基因核酸疫苗的免疫增强作...
- 任晓峰石娜崔进孟凡丹李训良李鹏冲斯琴高娃王超王鑫吴丹李广兴
- 关键词：PRRSV免疫增强作用
- 文献传递
- 三种IBV检测方法比较研究被引量：1
- 2014年
- IBV属于冠状病毒γ群,可引起鸡呼吸道疾病,对IBV诊断方法研究广泛,建立多种方法,而噬菌体展示技术广泛用于蛋白质研究中。使用分子生物学技术和噬菌体展示技术筛选到能与IBV S1蛋白特异性结合噬菌体建立三种IBV检测方法,Real-Time PCR、RT-PCR和噬菌体ELISA。结果表明,三种方法都可有效检测出传染性支气管炎病毒(IBV),证明三种方法可靠性,对这三种方法的灵敏性进行比较,敏感性上实时Real-Time PCR法最敏感,依次为RT-PCR和噬菌体ELISA技术,检测极限分别为7.64×101、7.64×103、1.21×105copies·μL-1,证明筛选的IBV S1蛋白特异性亲和噬菌体可用于IBV病毒诊断,具有较高特异性和敏感性,为IBV诊断提供新方法。Real-Time PCR、RT-PCR和噬菌体ELISA三种方法各具特点,可满足不同检测需要。
- 潘龙李广兴聂思静蔡皓璠李兰兰
- 关键词：IBVREAL-TIMEPCRRT-PCR
- 鸡痘DNA疫苗pVAX-env的构建及其体内外表达被引量：6
- 2011年
- 利用PCR技术将鸡痘病毒env基因亚克隆到pVAX1真核载体上,构建了含有该基因的真核表达质粒pVAX-env。将质粒pVAX-env体外瞬时转染BHK21细胞通过间接免疫荧光检测蛋白表达。将pVAX-env质粒肌肉注射免疫14日龄雏鸡,通过RT-PCR和组织免疫荧光检测体内质粒表达。结果表明,成功构建了真核表达质粒pVAX-env,并证明pVAX-env在体内体外都能有效表达。研究为鸡痘病毒基因工程疫苗进一步研制及应用奠定了基础。
- 洪琴任晓峰李广兴
- 关键词：鸡痘病毒ENV真核表达
- 猪IL-15与PRRS病毒GP5基因核酸疫苗免疫效力被引量：17
- 2010年
- 通过分子克隆技术构建了表达猪白细胞介素(IL)-15及猪繁殖呼吸综合症(PRRSV)病毒GP5基因重组核酸疫苗。以小鼠为试验模型,利用猪IL-15作为分子佐剂并检测其对表达PRRS病毒GP5基因核酸疫苗的免疫增强作用。结果表明,猪IL-15与GP5试验组小鼠抗体水平和T淋巴细胞亚群数量均高于PBS对照组及GP5基因单独免疫组,表明猪IL-15对核酸疫苗可有效增强PRRS病毒GP5基因的免疫效果,证实了其佐剂效应。
- 石娜尹杰超Dante Zarlenga李广兴任晓峰
- 关键词：PRRSVGP5基因疫苗
- 抗鸡传染性支气管炎病毒多克隆抗体的制备及其生物活性的鉴定被引量：3
- 2010年
- 本试验将商品化疫苗株H120鸡传染性支气管炎病毒(IBV)直接免疫大白兔进行抗IBV全病毒粒子多克隆抗体的制备,通过琼扩试验及酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,同时利用免疫组织化学、免疫荧光及Western blotting技术检测了所制备多抗血清的生物活性。试验结果表明,制备得到的多抗血清具有很高的抗体效价,同时能够与不同形式的IBV相关抗原发生特异性结合。
- 王衡刘博奇尹航唐丽任晓峰李广兴
- 关键词：传染性支气管炎病毒多克隆抗体活性检测
- 鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究
- 2015年
- 试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p ET-g APN并转化E.coli Rosetta,经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化g APN重组蛋白为免疫原制备兔抗g APN多克隆抗体,间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明,此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带,同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然g APN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到pc DNA-g APN转染HELA细胞所表达的g APN蛋白。上述结果可为g APN蛋白的深入研究奠定基础。
- 李广兴李兰兰潘龙洪琴张恒杨巍黄小丹马德星张瑞莉杨贵君
- 关键词：多克隆抗体间接免疫荧光
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒HH08株NSP2蛋白多克隆抗体的制备及其生物学功能的研究被引量：4
- 2013年
- 利用RT-PCR和SOE PCR技术扩增得到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HH08株NSP2全长基因,经抗原性和亲水性分析,将NSP2部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-NSP2转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经诱导表达获得107ku的重组NSP2蛋白。Western-blot检测表明,重组蛋白能够与PRRSV参考阳性血清反应。以纯化的重组NSP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,其ELISA效价达到1∶1015以上;Western-blot试验表明,其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验显示,用抗NSP2多克隆抗体可以检测到PVAX-NSP2转染BHK-21细胞所表达的NSP2蛋白,且与经典型和高致病型PRRSV毒株均有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明,多抗血清对PRRSV经典和高致病性毒株的抑制率可达到68%和53%。上述研究结果为PRRSV检测及NSP2蛋白功能的深入研究奠定了基础。
- 马玲李广兴洪琴任玉东任晓峰
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2多克隆抗体间接免疫荧光试验
- A型产气荚膜梭菌重组α毒素对小鼠的致病性研究被引量：1
- 2015年
- 为了研究A型产气荚膜梭菌α毒素(PLC)的致病性,采用PCR扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,构建重组质粒pGEX-plc,经IPTG诱导表达获得重组蛋白PLC。对纯化鉴定后的PLC蛋白进行细胞毒性试验,结果显示,感染后第4小时Hela细胞开始出现病变,并随时间延长而逐渐严重,说明α毒素对Hela细胞有毒性作用。进一步建立小鼠病理模型,重组PLC蛋白接种组与阳性细菌感染组的病理变化显示,小鼠发病迅速,腹部膨大,肠道臌气明显;组织学观察结果显示,被感染小鼠内脏器官出现不同程度的病理变化,以小肠各段尤为明显,表现为肠黏膜损伤、绒毛脱落等。上述结果为A型产气荚膜梭菌致病机制的研究奠定了基础。
- 乔艺然李兰兰郑晓星王莹莹聂思静任玉东李广兴黄小丹杨贵君
- 关键词：产气荚膜梭菌气性坏疽Α毒素细胞毒性试验
- 牛白细胞介素2基因原核表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2011年
- 根据GenBank发表的牛白细胞介素2(BoIL-2)基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增出重组牛白细胞介素2(rBoIL-2)基因。将克隆片段与pMD18-T载体连接,并经过酶切及PCR鉴定,测序结果显示,克隆的BoIL-2基因与GenBank发表的BoIL-2基因序列同源性为98.7%。将测序正确的克隆片段与pET30a(+)载体连接,构建重组表达质粒pET30a(+-)rBoIL-2,通过双酶切及PCR鉴定阳性的重组质粒进行序列测定后在大肠杆菌的表达,分子质量约为23.49ku;表达产物主要分布在包涵体中。Western blotting证实所得到的重组蛋白为BoIL-2重组蛋白。用镍离子亲和树脂对所得的BoIL-2重组蛋白进行纯化,并免疫新西兰兔成功制备兔抗rBoIL-2多克隆抗体,为下阶段的研究提供了重要的试验材料。
- 盖仁华王衡郎跃深李广兴张瑞莉马德星张国庆杨贵君
- 关键词：白细胞介素-2原核表达多克隆抗体
- 产气荚膜梭菌plc基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：8
- 2012年
- 采用PCR方法扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,利用原核表达载体pGEX-6P-1构建重组质粒pGEX-plc,经双酶切和测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,表达产物经切胶纯化后作为免疫原制备多克隆抗体,应用间接ELISA和Western-blot方法对所得抗体进行检测。结果显示,经1.0mmol/L IPTG诱导4～5h后重组蛋白表达量最高,并且主要以包涵体的形式存在,分子质量为66ku。用间接ELISA方法检测的多抗血清效价达到1∶65 536。Western-blot结果证实,重组蛋白与制备的多克隆抗体发生特异性结合,具有良好的反应原性,而且多抗血清能够检测产气荚膜梭菌分泌的天然α毒素蛋白。上述结果表明,此多克隆抗体能够应用于临床诊断。
- 郑晓星解真真任晓峰王衡王勇杨静红任玉东马德星李广兴
- 关键词：产气荚膜梭菌多克隆抗体蛋白质印迹
