国家自然科学基金(81222005)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：杨晓明董小明李长燕詹轶群赵珂更多>>
- 相关机构：安徽医科大学军事科学院天津大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 红细胞分化相关基因敲除小鼠对低剂量辐射损伤敏感性的研究被引量：2
- 2015年
- 目的构建红细胞分化相关基因(EDAG)敲除小鼠并研究其对低剂量辐射损伤的敏感性。方法利用锌指核酸酶技术(ZFNs)建立EDAG敲除小鼠模型;通过外周血细胞计数、骨髓细胞的DNA损伤和集落形成能力评价低剂量辐射损伤。对野生型及EDAG敲除小鼠进行剂量率为0.31 Gy/min的X线照射,1 min/d,连续照射7 d,小鼠累计照射剂量为2.17 Gy。在X线照射后第1、3、5、7天称重并进行血常规检测(n=7);照射后第3天分离小鼠骨髓细胞,利用免疫荧光实验检测DNA损伤标志物p-H2A.x的表达水平(n=3);照射后第5天分离小鼠骨髓细胞,接种集落并于7 d后进行集落计数(n=3)。结果成功建立了EDAG敲除小鼠模型并在蛋白水平进行了敲除效果的鉴定;X线照射后第3天,与野生型相比,EDAG敲除小鼠白细胞明显减少,敲除小鼠骨髓细胞DNA损伤标志物p-H2A.x表达水平增加;X线照射7 d后骨髓细胞的集落形成能力降低。结论研究发现EDAG敲除小鼠对低剂量辐射诱导的损伤更加敏感,表现为血细胞数量减少,骨髓细胞成集落能力下降,DNA损伤增加。表明EDAG敲除小鼠作为一种对辐射高度敏感的动物模型,可作为低剂量辐射损伤生物学效应评价的有力工具。
- 潘婷婷尹荣华董小明赵珂詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：血细胞计数骨髓细胞集落形成
- 造血系统缺失Ronin基因降低胎肝细胞救治急性放射病的能力
- 2019年
- 目的研究造血系统特异敲除Ronin基因缺失后对胎肝细胞救治急性放射病能力的影响。方法利用基因组PCR和Western印迹鉴定Ronin的特异性敲除胚胎。8周龄CD45.1+C57BL/6J小鼠经60Co照射后,移植E14.5 d的野生型或敲除Ronin的小鼠(CD45.2+)胎肝细胞。移植后不同时间点检测受体小鼠存活率和体质量,并在移植后40 d分析外周血嵌合率。结果造血系统条件敲除Ronin基因后,胎肝细胞救治急性放射病的能力明显降低。结论Ronin是调节胎肝造血干细胞功能的关键因子,该研究为深入探讨Ronin基因在早期造血功能调控中的作用提供了实验模型。
- 杨小玉赵珂刘金芳高慧英陈慧詹轶群杨晓明李长燕
- 关键词：造血系统急性放射病
- 敲低EDAG加强NPM1蛋白的降解并增加AML病人对药物的敏感性(英文)被引量：2
- 2013年
- Nucleophosmin(NPM1或B23.1)是在细胞核内广泛表达的蛋白磷酸酶,在多方面发挥重要作用,如核糖体合成、中心体复制、细胞周期控制、细胞增殖及转化.NPM1是急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中最常见的突变基因之一.红系分化相关基因(erythroid differentiation associated gene,EDAG)是在造血组织特异表达的基因,在造血细胞的增殖与谱系分化调节方面发挥重要作用.在AML病人中,高表达的EDAG与较差的预后相关联.我们前期研究结果显示,EDAG与NPM1相结合并调节NPM1稳定性,但在AML病人体内EDAG与NPM1的关系,及EDAG与NPM突变体(NPMc+)的关系尚未明确.在本文中发现:在AML病人骨髓CD34+细胞中,敲低EDAG表达导致NPM1蛋白稳定性降低并提高了对柔红霉素的敏感性;EDAG虽不与突变体NPMc+相互作用,但在蛋白出核抑制剂(leptomycin B,LMB)作用下,过表达EDAG提高NPMc+蛋白稳定性;表达突变NPMc+的AML病人与表达NPM1蛋白的病人相比,其骨髓CD34+细胞对柔红霉素具有更高的敏感性,且敲低EDAG能微弱提高其敏感性.上述结果表明,EDAG在AML病人药物治疗中发挥的可能作用以及NPMc+"逃脱",使EDAG无法保护其稳定性,这提示了在AML病人药物治疗过程中EDAG的潜在作用,同时也提示,携带NPMc+蛋白的AML患者具有较好预后,可能与NPMc+蛋白"逃脱"出EDAG对其稳定性的保护有关.
- 郑巍薇杨扬张美江董小明唐刘军王晓辉詹轶群于淼葛常辉宁红梅李长燕杨晓明
- 关键词：柔红霉素AML
- 基于Lox P-Cre系统的Ronin基因造血系统条件性敲除小鼠模型的构建及鉴定被引量：4
- 2018年
- 目的建立Ronin基因造血系统条件性敲除的小鼠模型。方法基于Lox P-Cre系统设计基因敲除策略,获得Roninflox/+(flanked by lox P)小鼠,分别与Vav-iCre+小鼠、Roninflox/+小鼠交配繁殖得到Roninflox/+Vav-iCre+小鼠和Roninflox/flox小鼠,再将后两种小鼠交配获得Roninflox/floxVav-iCre+小鼠。提取鼠尾组织DNA,PCR扩增后鉴定基因型,提取小鼠造血相关组织蛋白,Western印迹检测Ronin表达情况。结果 Roninflox/+Vav-iCre+小鼠与Roninflox/flox小鼠交配所得子代共51只小鼠中,Roninflox/floxVav-iCre+基因型小鼠仅1只,实际出生数量远低于理论值,且小鼠出生1周内死亡。Roninflox/+Vav-iCre+基因型小鼠可正常存活,其造血相关组织中Ronin表达低于野生型小鼠。结论该研究构建了造血系统特异缺失Ronin基因的小鼠,为研究Ronin在早期造血调控中发挥的作用提供了动物模型。
- 李秀高慧英杨小玉刘超刘超詹轶群杨晓明杨晓明
- 关键词：造血系统
- 蛋白磷酸酶2A催化亚基β(PPP2Cβ)过表达慢病毒载体系统的构建及对K562红系分化的影响
- 2016年
- 目的:构建蛋白磷酸酶2A的催化亚基PPP2Cβ慢病毒表达载体,获得较高滴度慢病毒颗粒,感染K562细胞建立稳定株,检测过表达PPP2Cβ对K562红系分化的影响。方法:将PPP2Cβ的CDS序列插入到第二代慢病毒表达载体FUGW,并与包装质粒p MD2G和ps PAX2共转染293T细胞,36、48h分两次收集慢病毒上清,应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染K562细胞,应用Western blot检测过表达效果。采用联苯胺染色以及实时定量PCR检测过表达PPP2Cβ对K562红系分化的影响。结果:成功构建了PPP2Cβ慢病毒表达载体,利用慢病毒系统包装PPP2Cβ的慢病毒,获得了高滴度的慢病毒颗粒,并成功建立了PPP2Cβ的K562细胞稳定株,促进了K562向红系分化。结论:过表达PPP2Cβ能使K562细胞自发的向红系分化。
- 李敏赵珂董小明詹轶群尹荣华杨晓明李长燕
- 关键词：慢病毒载体红系分化K562细胞
