国家自然科学基金(30972982)
- 作品数：15 被引量：62H指数：5
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- 相关机构：中国人民解放军总医院北京大学天津市肿瘤医院更多>>
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- Dicer表达与肾透明细胞癌发生及转移的关系被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨Dicer在肾透明细胞癌发生及转移中的作用。方法:选取正常肾小管上皮细胞株HKC、非转移性肾透明细胞癌细胞株769-P、转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1以及36例肾透明细胞癌手术标本(其中11例已发生远处转移)和相应癌旁正常肾组织,应用实时定量PCR和Western blot方法检测Dicer在肾透明细胞癌细胞株和组织中mRNA和蛋白的表达情况,并分析Dicer的mRNA水平与临床病理资料的关系。结果:和正常肾小管上皮细胞株HKC相比,Dicer的mRNA水平在肾透明细胞癌细胞株769-P和Caki-1中均降低(P<0.001),而转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1比非转移性肾透明细胞癌细胞株769-P表达水平更低(P<0.001);和癌旁正常肾组织相比,Dicer的mRNA水平在肾透明细胞癌手术标本中明显降低(P<0.001),且已发生远处转移的肾癌标本比未发生远处转移的肾癌标本表达水平更低(P=0.04);Dicer在细胞株和组织中的蛋白水平的变化与mRNA水平的变化一致(P<0.001);Dicer的mRNA水平在不同年龄、性别、组织学分级、肿瘤大小及T分期组间无统计学差异(P>0.05)。结论:Dicer表达降低可能在肾透明细胞癌的肿瘤发生中发挥作用,且其表达的进一步下降可能与肾透明细胞癌的远处转移有关。
- 范阳黄庆波高宇艾青倪栋陈伟浩马鑫张旭
- 关键词：肾透明细胞癌DICER
- microRNA-34a靶向抑制Notch-1基因对膀胱癌J82细胞增殖和迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨microRNA-34a（miR-34a）通过靶向抑制Notch-1基因表达对人膀胱癌J82细胞增殖和迁移的影响。方法查询基因组数据库，应用基因预测软件进行生物信息学分析，预测miR-34a可能靶向调控Notchl基因；实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹法分别检测16例浸润性膀胱癌组织及质粒转染的膀胱癌J82细胞的miR-34a和Notchl表达情况；萤光素酶实验检测miR-34a与Notchl基因的结合位点；将miR-34a表达质粒转染J82细胞，新型四唑氮盐化合物比色法和迁移实验评估miR-34a对细胞增殖和迁移的影响。结果浸润性膀胱癌组织miR-34a的表达中位数为0．016，四分位数间距0．018；Notchl基因表达中位数为2．765，四分位数间距2．156；癌旁组织miR．34a表达中位数为0．042，四分位数间距0．059；Notchl基因表达中位数为2．312，四分位数间距1．365，组间差异均有统计学意义（P〈0．01）；浸润性膀胱癌组织的Notchl蛋白表达量为0．857±0．197，癌旁组织为0．648±0．171，组间差异有统计学意义（P〈0．01）。质粒转染J82细胞，miR-34a表达质粒组miR-34a的表达量为（2．408±0．789）×10-4，对照质粒组为（0．153±0．029）×10-4（P=0．0026）；miR-34a表达质粒组Notchl基因表达量为3．001±0．106，对照组为4．998±1．053（P=0．0308）；miR-34a表达质粒组Notchl蛋白表达量为0．747±0．050，对照组为0．988±0．102（P=0．0215）；miR-34a表达质粒组细胞萤光素酶活性为0．422±0．028，对照组为2．392±0．148（P〈0．0001），组间差异均有统计学意义；miR-34a表达质粒组细胞增殖受到抑制，细胞迁移数量为179．3±21．02，对照组为269．7±23．71，组间差异有统计学意义（P=0．0078）。结论miR-34a可与Notchl基因的3’非翻译区（3’UTR）结合靶向抑制Notchl基因表达，进而抑制了膀胱癌J82细胞的增殖和迁移。
- 姚志勇张超马鑫朱鸣阳张瑜史涛平司马晋艾青刘尚文黄庆波杨素霞张旭
- 关键词：膀胱肿瘤MIR-34A基因靶向抑制
- Notch信号抑制剂（2S）-N—N-（3，5-二氟苯乙酰基）-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯对肾正常及肿瘤细胞c—myc的影响被引量：5
- 2012年
- 目的观察Notch信号抑制剂（2s）-N—N-（3，5-二氟苯乙酰基）-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯（DAPT）对肾小管上皮细胞HKC及肾肿瘤细胞786-O中c—myc表达及对细胞增殖的影响。方法通过实时定量聚合酶链反应（real—timePCR）及Westernblot方法连续3次检测HKC及786-O中c—myc的表达及DAPT处理后HKC及786—0细胞中c—myc的表达变化，并检测DAPT对细胞增殖及周期的影响。结果786-O中c—myc表达比HKC高（2．54±0．24）倍（P〈0．01）。DAPT处理后，HKC及786．0细胞中c．myc表达分别下调（1．41±0．13）和（2．93±0．26）倍（P均〈0．05）；两株细胞的增殖均受到抑制，HKC及786-O G0／G1期细胞比例分别增加9．75％和16．54％（P均〈0．01）。结论Notch信号抑制剂DAPT可能通过抑制c-myc的表达而抑制肾正常及肿瘤细胞的增殖。
- 黄庆波艾青刘尚文朱鸣阳马鑫张旭
- 关键词：NOTCHC-MYC肾肿瘤
- 人Ras同源物基因家族成员B真核表达载体的构建及对肾癌细胞786—0增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2013年
- 目的观察人Ras同源物基因家族成员B（RhoB）对肾癌细胞株786一O细胞增殖和凋亡的影响。方法构建pcDNA3．0-Flag—RhoB真核表达载体，脂质体转染法将其转入肾癌细胞786一O，利用Westernblot检测细胞中RhoB的表达。用MTS法和流式细胞仪检测RhoB对肾癌细胞增殖和凋亡效应的影响。结果真核表达载体pcDNA3．0-Flag-RhoB构建成功，脂质体转染后RhoB在786一O细胞中表达明显升高；在转染后48、72、96h，重组质粒组细胞的增殖速度明显低于空载体组和阴性对照组（P〈0．05）；转染重组质粒细胞凋亡率为（24．05±0．60）％，明显高于空载体组[（1．67±0．30）％]和阴性对照组[（1．22±0．50）％，P〈0．05]。结论RhoB对肾癌细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。
- 陈伟浩张鹏宋尔霖高宇马鑫张旭
- 关键词：肾癌脱噬作用
- microRNA-34a的表达对膀胱癌细胞系J82生物学行为的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨microRNA-34a(miR-34a)的外源性表达对人膀胱癌J82细胞生物学行为的影响。方法:将miR-34a表达质粒或对照质粒转染J82细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-34a在转染细胞中的表达水平,细胞计数法、流式细胞术、Transwell侵袭实验分别检测外源性miR-34a表达后J82细胞增殖、凋亡、周期和侵袭能力的变化情况。结果:miR-34a表达质粒组与对照组比较,其miR-34a表达诱导性升高(P=0.002 6),细胞增殖受到抑制(P=0.000 1),细胞凋亡率增加(1.237%±0.116%vs 5.497%±0.293%;P<0.000 1),细胞周期阻滞于G0～G1期(54.510%±1.501%vs 62.200%±0.754%;P=0.001 5);细胞侵袭能力降低,(65.01±11.79)vs(34.33±9.71),P=0.025 4。结论:在膀胱癌J82细胞中增加miR-34a的表达,可抑制细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡和周期阻滞,并通过影响上述细胞生物学行为降低肿瘤细胞恶性度,miR-34a在膀胱癌细胞系中发挥潜在的抑癌基因作用。
- 姚志勇张超马鑫朱鸣阳张瑜史涛平杨素霞张旭
- 关键词：膀胱癌增殖凋亡MIR-34A
- 过表达Notchl基因对前列腺癌细胞增殖和周期的影响被引量：10
- 2014年
- 目的观察Notehl基因对前列腺癌细胞增殖和周期的影响。方法在前列腺癌细胞PC-3中转染Notchl—ORF质粒，采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot检测Notchl和细胞核增殖抗原（Ki-67）的表达。以四唑氮化合物（MTS）试剂（每孔20μl）加入细胞，检测490nm处吸光度（A）值评价细胞增殖能力。以碘化丙锭反应液1ml染色细胞，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果实验组Notchl基因表达水平为43．740±6．438，明显高于阴性对照组（3．574±0．368）和空白对照组（3．306±0．278）；同时实验组Ki-67的表达减低，实验组为0．576±0．063，阴性对照组为1．012±0．01，空白对照组为1．000±0．007（P〈0．01）。MTS实验中实验组细胞在24、48、72h的4值均低于两对照组细胞（P〈0．01）。实验组G0／G1期比例为（64．013±1．952）％，明显高于阴性对照组的（48．917±2．771）％和空白对照组的（51．317±1．907）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论前列腺癌细胞中Notchl的表达可以促使细胞发生G0／G1期阻滞，抑制细胞增殖能力，这种抑制作用可能是通过Notchl负性调节Ki-67的表达实现的。
- 司马晋张保杨素霞王保军张帆张旭
- 关键词：前列腺癌NOTCH1基因增殖细胞周期
- NOTCH1／HES1／PTEN信号通路在浸润性膀胱癌中的表达分析被引量：11
- 2012年
- 目的观察NOTCH1／HES1／胛EN信号通路在浸润性膀胱癌组织中的表达情况，以及膀胱癌细胞中过表达NOTCH1对下游基因HES1与PTEN的表达及生物学的影响。方法运用荧光定量PCR和Western印迹技术，检测了36例浸润性膀胱癌组织和10例正常膀胱黏膜组织中NOTCH1、HES1和PTEN的表达情况。在膀胱癌细胞T24中转染NOTCH1表达质粒，检测各组细胞的NOTCH1、HES1、PTEN在mRNA和蛋白质水平的表达改变。采用MTS法和流式细胞技术检测各组细胞的增殖、凋亡与周期情况的变化。结果较正常膀胱黏膜组织，浸润性膀胱癌组织中NOTCH1表达水平为正常膀胱黏膜组织的4．22倍，HES1为正常组的3．75倍。而浸润性膀胱癌组织中PTEN的表达显著下调，为正常组的38．96％（P〈0．05）。过表达NOTCH1的T24细胞较对照组细胞，HES1表达上调而PTEN下调（P〈0．01）。MTS实验显示，转染NOTCH1表达质粒的细胞增殖能力较对照组细胞升高（P〈0．01）。结论NOTCH1的异常高表达是浸润性膀胱癌的分子事件之一，提示NOTCH1在浸润性膀胱癌中可能发挥癌基因的作用。
- 司马晋朱明阳艾青张超姚志勇黄庆波张旭
- 关键词：膀胱肿瘤基因表达调控
- E2F1在肾透明细胞癌中的表达及意义被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨E2F1在肾透明细胞癌中的表达及意义。方法:通过实时定量PCR和Western blot方法检测E2F1在肾透明细胞癌及对应瘤旁组织中mRNA和蛋白的表达情况,并分析E2F1的mRNA水平与临床病理资料的关系及表达相关性。结果:与对应瘤旁组织相比,E2F1的mRNA水平在肾透明细胞癌手术标本中表达明显升高(P=0.0002),相应的蛋白水平对比与mRNA变化一致;E2F1的mRNA水平在不同年龄、性别组间差异无统计学意义(P>0.05),而在组织学分级、肿瘤直径大小、T分期、临床分期和大血管浸润与否差异有统计学意义(P<0.05)。结论:E2F1表达上调可能在肾透明细胞癌的肿瘤形成中发挥作用,且E2F1表达升高可能促进肾透明细胞癌的恶性进展。
- 高宇范阳陈伟浩黄庆波倪栋艾青马鑫张旭
- 关键词：肾透明细胞癌E2F1恶性进展
- Notch1、Notch2及c-Myc在肾透明细胞癌中的表达及意义被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨Notch信号受体Notch1、Notch2及c-Myc在肾透明细胞癌中的表达与意义。方法:通过实时定量PCR及western-blot方法检测27例肾透明细胞癌及瘤旁组织中Notch1、Notch2及c-Myc的表达水平,并采用相关性分析检验Notch1、Notch2的表达与c-Myc的表达相关性。结果:Notch1、Notch2及c-Myc在肾癌组织中表达水平明显高于相应的癌旁组织(P<0.001),相关性分析表明在肿瘤组织中c-Myc与Notch2的mR-NA水平呈正相关(r=0.629,P<0.001),而与Notch1的mRNA水平无相关(P=0.389)。结论:Notch信号通路及c-Myc的异常高表达可能与肾透明细胞癌的发生发展有关,而且c-Myc可能作为Notch信号通路的下游靶基因,发挥促癌的作用。
- 黄庆波刘尚文艾青司马晋姚志勇张帆马鑫张旭
- 关键词：肾肿瘤C-MYC
- Numb基因对膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响及机制研究被引量：10
- 2014年
- 目的 研究Numb基因对膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响及相关机制.方法 2013年6月我们使用Numb-ORF表达质粒和pCMV6-Entry空载体质粒转染人膀胱癌细胞T24,作为实验组和阴性对照组,无质粒转染的人膀胱癌细胞T24作为空白对照组,采用荧光定量PCR和蛋白质印迹技术检测各组的Numb和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达情况,采用细胞划痕实验和Transwell小室法分别检测细胞的迁移和侵袭能力.结果 荧光定量PCR检测显示,与阴性对照组（△CT值5.871±0.685）和空白对照组（△CT值5.618±0.597）比较,实验组中Numb表达（△CT值1.655±0.432）显著升高（P＜0.01）.实验组的MMP-9表达（△CT值8.423±0.202）低于阴性对照组（△CT值7.294±0.138）和空白对照组（△CT值7.220±0.118）,差异有统计学意义（P＜0.01）.划痕实验中,12h的划痕修复比实验组为0.525±0.037,阴性对照组为0.693±0.034,空白对照组为0.701±0.038,组间比较差异有统计学意义（P=0.004）.侵袭实验中,实验组的穿膜细胞数为（12.6±3.2）个,明显少于阴性对照组[（130.8±9.2）个]和空白对照组[（132.2±10.6）个],差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 上调Numb基因可以降低人膀胱癌细胞T24的侵袭和迁移能力,其机制可能是通过Numb负性调节MMP-9实现的.
- 司马晋张保马鑫王保军艾青张旭
- 关键词：膀胱癌基质金属蛋白酶-9迁移
