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辐射诱导表达载体pEgr-hTRAIL的构建及其对肿瘤细胞的体外诱导凋亡作用被引量：8: 2005年; 目的 :构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (h TRAIL )基因的辐射诱导表达载体p Egr- h TRAIL ,并研究其在人肺腺癌细胞株 A 5 4 9中的表达及促凋亡作用。方法 :采用常规分子生物学方法构建表达质粒 p Egr- h TRAIL ,体外通过脂质体转染 A5 4 9细胞 ,经 G4 18筛选稳定转染细胞 A 5 4 9- sh TRAIL ,利用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测目的基因的表达 ,采用 Annexin- V- FITC凋亡检测试剂盒检测细胞早期凋亡。结果 :经限制性内切酶酶切鉴定 p Egr- h TRAIL表达质粒构建正确 ;稳定转染细胞 A 5 4 9- sh TRAIL的 h TRAILm RNA表达量明显增加 ;稳定转染细胞 A 5 4 9- sh TRAIL的凋亡细胞百分数明显增加 ,是 A5 4 9细胞的 1.8倍(P<0 .0 5 )。结论 :成功构建 p Egr- h TRAIL表达质粒 ,体外稳定转染细胞 A5 4 9- sh TRAIL具有明显诱导凋亡作用。; 朴春姬田梅刘林林杨巍李修义1; 关键词：基因表达细胞凋亡

pEgr-angiostatin基因辐射诱导表达特性及其抗肿瘤作用被引量：8: 2003年; 目的 :检测 p Egr- angiostatin重组质粒在 B1 6细胞中的辐射诱导表达和观察 p Egr-angiostatin基因 -放射治疗的抗肿瘤作用。方法 :用 RT- PCR方法从小鼠肝脏中扩增出 angiostatinc DNA,经测序证实后 ,构建 p Egr- angiostatin重组质粒 ,脂质体介导的转染法转染小鼠 B1 6细胞 ,检测 B1 6细胞内 angiostatin m RNA的辐射诱导表达 ,体内观察 p Egr- angiostatin基因 -放射治疗的抑瘤作用。结果 :测序表明扩增的 angiostatin c DNA序列与报道基本一致 ,Egr- 1启动子和 angiostatinc DNA正确插入表达载体 pc DNA3.1 ,转染 B1 6细胞内 angiostatin m RNA的表达具有辐射诱导特性 ,p Egr- angiostatin基因 -放射治疗荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用。结论 :成功地克隆小鼠angiostatin基因 ,并证实 p Egr- angiostatin的辐射诱导表达规律及其基因; 李秀娟宋祥福杨巍田梅杨旭刘林林李修义; 关键词：小鼠血管抑素 EGR-1启动子基因-放射治疗

pEgr-ssEndostatin重组质粒瘤内辐射诱导表达及其抗肿瘤作用被引量：3: 2003年; 目的　观察pEgr ssEndostatin基因放射治疗对移植黑色素瘤B1 6小鼠的抗肿瘤作用及其在瘤内辐射诱导表达。方法　肿瘤局部注射脂质体包裹的pEgr ssEndostatin重组质粒后 42h ,接受2 0GyX射线照射 ,观察放疗后不同时间肿瘤大小 ,检测放疗后第 2天瘤内Endostatin转录水平。结果　pEgr ssEndostatin基因放射治疗荷瘤小鼠能够增强放疗疗效 ;单纯接种pEgr ssEndostatin质粒组和接种pEgr ssEndostatin质粒 +2 0Gy照射组小鼠的肿瘤组织内有EndostatinmRNA表达 ,且pEgr ssEndostatin质粒照射组的EndostatinmRNA水平高于单纯pEgr ssEndostatin质粒组。结论　pEgr En dostatin基因放射治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗和单纯基因治疗。; 李秀娟李修义田梅杨巍; 关键词：肿瘤基因-放射治疗

pEgr-hPTEN稳定转染联合辐射诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡及Bcl-2表达下调被引量：4: 2006年; 目的探讨辐射诱导表达载体pEgr hPTEN体外稳定转染人胶质瘤SHG44细胞后联合X射线照射,诱导细胞凋亡的作用及凋亡相关蛋白Bcl2表达的变化。方法以脂质体介导携有外源野生型PTEN基因的辐射诱导表达载体pEgr hPTEN,体外转染SHG44细胞,筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养;应用电子显微镜、流式细胞仪等方法,检测稳定转染联合X射线照射对胶质瘤细胞超微结构、细胞凋亡及Bcl2蛋白表达等特性的影响。结果稳定转染细胞超微结构有明显的退行性改变,可见核内染色质趋边的类似早期凋亡的改变;稳定转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡,5Gy以内随吸收剂量的增加,早期凋亡细胞百分数明显增加,稳定转染不同剂量照射组早期凋亡细胞百分数分别为稳定转染0Gy假照组的1.5～2.3倍、为未转染照射组的1.9～4.4倍、为未转染0Gy假照组的3.4～5.1倍;同时稳定转染细胞Bcl2蛋白表达则呈剂量依赖性下降。结论体外PTEN基因转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,Bcl2蛋白表达下调,具有显著的肿瘤抑制作用。; 田梅朴春姬刘林林杨巍李修义; 关键词：X射线胶质瘤 BCL-2

多次小剂量pEgr-IFN-γ基因-放射治疗的抑瘤效应及其机制的研究被引量：1: 2004年; 目的:探讨多次小剂量pEgr-IFN-γ基因-放射治疗对接种B16黑色素瘤小鼠的抑瘤效应及其免疫学机理。方法: 肿瘤局部注射脂质体包裹的重组质粒pEgr-IFN-γ后36 h,接受不同剂量X射线照射,观察各组小鼠照后不同时间肿瘤生长速率和平均存活时间。照后第3天用RT-PCR法检测瘤内IFN-γ转录水平,ELISA法检测小鼠血清中IFN-γ含量,并于照后第15 天检测小鼠部分免疫学指标。结果:照后第9-15天,4次(质粒+5Cy)组小鼠肿瘤生长速率明显低于质粒+20 Gy组,且平均生存时间明显延长;照后第3天质粒+20 Gy组瘤内IFN-γ转录水平明显高于质粒组,照后第1,3天血清中IFN-γ含量明显高于质粒组和对照组,照后第15天脾脏NK细胞毒活性、IL-2和IFN-γ分泌活性均明显高于20 Gy照射组。结论:多次小剂量基因-放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因-放射治疗。基因-放射治疗组可能通过诱导瘤内IFN-γ表达增强,使血液中 IFN-γ浓度升高,从而提高荷瘤机体免疫功能和抗肿瘤能力。; 杨巍刘林林吴丛梅朴春姬潘艳龚守良李修义; 关键词：X射线 B16黑色素瘤基因-放射治疗

γ干扰素和内皮抑素双基因-放射治疗的体内抑瘤效应及其机制被引量：3: 2005年; 目的探讨γ干扰素和内皮抑素双基因放射治疗在荷Lewis肺癌小鼠的体内抑瘤效应及其机制。方法小鼠肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒后36h,接受5GyX射线照射,观察各组小鼠照射后不同时间肿瘤生长速率和平均存活时间;照射后第15天检测各组小鼠脾脏CTL、NK细胞毒活性和腹腔巨噬细胞TNFα分泌活性,照射后第10天用免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度。结果基因放射治疗后第6～18天,双基因放射治疗组小鼠肿瘤生长速率明显低于对照组、单纯放疗组及单基因放射治疗组,且平均生存时间明显延长。治疗后第12～18天,4次(双基因质粒+2.5Gy)组肿瘤生长速率明显低于双基因质粒+10Gy组,且平均生存时间明显延长。照射后第15天双基因放射治疗组小鼠脾脏CTL、NK细胞毒活性和腹腔巨噬细胞TNFα分泌活性均明显高于对照组、单纯放疗组及内皮抑素单基因放射治疗组,肿瘤组织微血管密度明显低于对照组、单纯放疗组及γ干扰素单基因放射治疗组。结论双基因放射治疗抑瘤效应明显优于单基因放射治疗,其机理可能与辐射诱导γ干扰素和内皮抑素表达,提高机体抗肿瘤免疫功能和抗肿瘤血管生成作用有关。多次小剂量双基因放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量双基因放射治疗。; 杨巍朴春姬刘林林田梅吕喆李修义; 关键词：Γ干扰素内皮抑素肺癌

pEgr-ssEndostatin的构建及其在体外的辐射诱导表达: 2004年; 为探讨 pEgr-ssEndostatin 重组质粒转染 B16 细胞后接受不同辐射剂量以及接受同一剂量不同时程endostatin 表达的规律。采用 RT-PCR 方法从鼠肝脏中扩增出 Endostatin cDNA,连入信号肽,构建了pEgr?ssEndostatin 重组质粒,用脂质体介导的转染法转染小鼠 B16 细胞,用 ELISA 方法检测 B16 细胞上清中endostatin 的表达水平。结果表明的分泌型 Endostatin 序列与报道完全一致,Egr-1 启动子和 Endostatin cDNA正确插入表达载体 pcDNA3.1;pEfr-ssEndostatin 具有辐射诱导表达特性。提示小鼠 Endostatin 基因成功地被克隆和表达,Egr-1 启动子具有辐射激活和诱导下游基因表达增强的功能。; 李秀娟李治国田梅杨巍刘林林李修义

PTEN基因稳定转染联合辐射对肿瘤细胞周期进程及G_1期激酶抑制蛋白P27^(kip1)表达的影响被引量：5: 2007年; 目的:研究辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外转染对人脑胶质瘤SHG-44细胞周期进程及G1期激酶抑制蛋白P27表达的影响。方法:脂质体包裹重组载体体外转染肿瘤细胞并经G418筛选稳定表达细胞株,光学显微镜和透射电镜观察稳定转染细胞形态,以Western blotting法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞术研究稳定转染联合0~10Gy X-射线照射对胶质瘤细胞周期进程及P27kip1的表达。结果:稳定转染PTEN基因的SHG-44细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5Gy以内PTEN蛋白的相对表达量随照射剂量增加而增加;稳定转染细胞超微结构有明显的退行性改变,可见核内染色质趋边的类似早期凋亡的改变;稳定转染联合X-射线照射细胞周期发生明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞,细胞周期相关蛋白P27表达上调。结论:PTEN基因稳定转染联合辐射可诱导肿瘤细胞G1期阻滞,并与P27kip1表达上调有关。; 田梅吴丛梅刘林林朴春姬李修义; 关键词：P27^KIP1 细胞周期

小鼠血管抑素基因的克隆及真核表达载体构建: 2003年; 目的 :克隆小鼠血管抑素 (Angiostatin)cDNA ,构建其真核表达载体pCMV -Angiostatin重组质粒 ,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法 :根据Genebank中小鼠血管抑素基因序列 ,用RT -PCR方法从鼠肝脏中扩增出AngiostatincDNA ,连接 pMD18T载体测序 ,经测序证实后 ,通过中间载体 pKS ,构建pCMV -Angiostatin重组质粒。结果 :测序表明扩增的AngiostatincDNA序列与报道基本一致 ,AngiostatincDNA正确插入表达载体。结论; 李秀娟杨旭李治国李修义; 关键词：小鼠血管抑素基因克隆真核表达载体

西洋参叶三醇组皂苷对乳腺癌放疗患者外周血免疫球蛋白、补体水平及淋巴细胞CD4、CD8和CD25表达的影响被引量：15: 2005年; 目的 :探讨西洋参叶三醇组皂苷 (PQL )对乳腺癌放疗患者细胞免疫功能的影响。方法 :30例乳腺癌放疗患者随机分为 PQL观察组 (17例 )和对照组 (13例 ) ;两组在进行放射治疗的同时 ,PQL观察组口服 PQL ,对照组不给该药 ;放疗 4 0 Gy后取外周血测定白细胞计数 ,免疫球蛋白 Ig G、 Ig A、 Ig M及补体 C3、 C4、 T淋巴细胞转化率和淋巴细胞 CD4、CD8、CD2 5阳性细胞百分率。结果 :在对照组中 ,患者的外周血白细胞计数为 (4.0 2±0 .6 7)× 10 9· L- 1 ,淋巴细胞转化率为 796 6± 15 6 2 ,而 PQL实验组中分别为 (6 .17± 1.2 0 )× 10 9· L- 1 ,180 35±15 77,明显高于对照组 (P<0 .0 0 1)。在 PQL观察组中 ,CD8及 CD2 5阳性细胞的百分率 (% )分别为 2 0 .9± 5 .0 8和4 1.3± 6 .15 ,与对照组比较差异具有显著性 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 0 1)。两试验组中免疫球蛋白 Ig G、 Ig A、 Ig M及补体 C3、 C4水平差异无显著性。结论 :PQL增强乳腺癌放疗患者的细胞免疫功能。; 王春刚贾晓晶董丽华吴镇凤龚守良马兴元陈燕萍

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