江苏省自然科学基金(BK97166)
- 作品数：3 被引量：10H指数：3
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- 相关机构：苏州医学院附属第一医院青岛医学院苏州大学更多>>
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- T-载体在聚合酶链反应扩增产物克隆中的应用被引量：3
- 2000年
- 目的 探讨克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增产物的简便方法。方法 用PCR方法分别特异性扩增Wilms瘤基因wt1和尿激酶受体 (UPAR)基因 ,并利用Taq聚合酶具有的延伸酶活性将扩增产物直接克隆入T -载体 ,EcoRⅠ酶切鉴定阳性重组子。结果 设计的引物可分别扩增wt1基因锌指区 (34 3bp)和UPAR基因编码区全长 (10 83bp) ;未经修饰的常规PCR和高保真PCR扩增产物可被直接克隆入pGEM -TEasy载体 ,其中正确重组率为 6 2 .5 %～ 87.5 % ;克隆的wt1基因和UPAR基因已被成功用于竞争性PCR或表达。结论 T -载体法是克隆PCR产物通用而有效的方法。
- 傅建新王玲白霞王玮奚晓东陈子兴阮长耿
- 关键词：聚合酶链反应基因克隆
- Wilms瘤基因WT1表达与急性白血病微小残留病的检测被引量：4
- 2000年
- 近年来发现急性髓性白血病 (AML)有Wilms瘤抑制基因WT1的异常表达 ,且表达水平与预后呈负相关 ,提示其可作为一种新的白血病标志。为探讨WT1能否作为急性白血病微小残留病 (minimalresidualdisease ,MRD)的标志 ,我们采用巢式逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定了WT1基因的灵敏度 ,并与肿瘤特异性标志基因进行比较。所有样本RNA的质量均用内对照c abl基因证实。以两轮RT PCR扩增WT1和肿瘤特异性融合基因检测白血病细胞的极限在NB4细胞分别为 10 -4 和 10 -5,而在K5 62细胞分别为 10 -3- 10 -4 和高于 10 -6 ;在 2 9例供血员的外周血单个核细胞 (MNC)均未检测到WT1基因表达 ,但在 2 1例非恶性疾病患者骨髓MNC中有 8例呈WT1基因阳性 (38.1% )。本研究提示 ,监测WT1表达可用于AML的疗效评价及MRD随访 。
- 傅建新王玲王玮陈子兴
- 关键词：WT1基因NB4细胞系微小残留病白血病
- 造血系统肿瘤WT1基因启动子区域DNA甲基化及其调控的研究被引量：3
- 2005年
- 目的应用聚合酶链反应(PCR)的实验方法研究白血病细胞系中WT1基因启动子区域的DNA甲基化水平,及其与WT1基因表达的关系。方法①采用RT-PCR技术及甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)技术检测8226、HL-60、Jurkat、KG-1及Raji等血液系统肿瘤细胞系中WT1基因mRNA表达水平及其启动子区域的DNA甲基化状态;②以5-杂氮脱氧胞嘧啶(5-aza-CdR)对U937细胞系进行去甲基化处理,并观察WT1基因表达水平的改变。结果①HL-60、K562、KG-1、NB4及SHI-1细胞系中WT1表达水平高,而8226、Jurkat、Raji、U266和U937细胞系WT1表达水平则极低,同时检测到在8226、Jurkat、Raji、U266和U937这5个细胞系存在WT1基因启动子区域DNA高甲基化;②经去甲基化处理后,U937细胞系的WT1基因表达水平较未处理者上升,同时伴随着WT1启动子区域DNA甲基化水平的下降和未甲基化水平的升高。结论WT1基因启动子区域DNA高甲基化是抑制其表达的机制之一。
- 赵晔陈子兴胡绍燕岑建农顾伟英
- 关键词：基因启动子造血DNA甲基化甲基化特异性PCRWT1基因表达基因启动子区域造血系统肿瘤U937细胞系
