吉林省教育厅基金(2013-351)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- 氯离子敏感的YFP-H148Q/V163S在FRT细胞中的表达及其应用研究
- 2015年
- 运用点突变试剂盒构建pcDNA3.1-YFP-H148Q/V163真核表达载体,脂质体介导YFP-H148Q/V163S转染稳定表达Ano1的FRT细胞,荧光淬灭动力学试验检测YFP-H148Q/V163S对其氯离子的敏感性。测序结果显示,YFP(yellow fluorescent protein)特异编码序列上第508-510位碱基CAC突变为CAG,148位组氨酸H突变为谷氨酰胺Q;第553-555位碱基GTG突变为AGC,163位缬氨酸V突变为丝氨酸S。荧光淬灭动力学试验结果显示,向表达YFP-H148Q/V163S的FRT细胞加入Anol激活剂ionomycin和Cl^-,其相对荧光强度明显下降。pcDNA3.1-YFP-H148Q/V163真核表达载体成功构建,并证实表达于FRT胞浆中的YFP-H148Q/V163S具有对氯离子敏感的特性。
- 郑锴张雲乔许会静方芳杨紫嫣郑岩董校汝李荣霞郝峰
- 钙激活氯通道蛋白ANO1在小鼠主动脉平滑肌细胞的表达及其功能鉴定被引量：3
- 2016年
- 探讨钙激活氯通道蛋白ANO1在C57BL/6小鼠主动脉平滑肌细胞中的表达及其功能特性。运用胶原酶消化法获得原代培养的小鼠主动脉平滑肌细胞,流式细胞术检测平滑肌细胞纯度;应用RT-PCR检测主动脉平滑肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO1蛋白在主动脉平滑肌细胞的表达情况;应用荧光淬灭动力学实验检测ANO1钙激活氯通道的功能特性。原代培养成功获得主动脉平滑肌细胞;RT-PCR结果分析表明,主动脉平滑肌细胞在mRNA水平有ANO1表达;免疫印迹显示主动脉平滑肌细胞蛋白水平有ANO1表达;荧光淬灭动力学实验证实表达在主动脉平滑肌细胞的ANO1具有阴离子转运功能,即钙激活氯通道典型特性。小鼠主动脉平滑肌细胞表达的ANO1是钙激活氯通道的分子基础。
- 张雲乔王胜刘艳杰崔爽曲适王鑫鑫龙啸方芳郝峰
- 关键词：小鼠主动脉平滑肌细胞
- YFP-H148Q/I152L在FRT细胞中的表达及其对碘离子敏感特性的研究被引量：5
- 2015年
- 为探讨YFP-H148Q/I152L在FRT细胞中的表达及其对碘离子的敏感性,应用点突变试剂盒将真核表达载体YFP特异编码序列第148位氨基酸H突变为Q,第152位氨基酸I突变为L,脂质体介导将YFP-H148Q/I152L转染入稳定表达Ano2的FRT细胞中,应用荧光淬灭动力学试验检测YFP-H148Q/I152对其碘离子的敏感性。测序结果证实,成功将YFP突变为YFP-H148Q/I152L,且荧光淬灭动力学试验表明,表达YFP-H148Q/I152L的FRT细胞在加入激活剂和碘离子后,相对荧光强度显著下降。表明成功构建YFP-H148Q/I152L真核表达载体,并证实表达于FRT胞浆中的YFPH148Q/I152L具有对碘离子敏感的特性。
- 郑锴朱杭飞王长文郭素红李正祎藏雨轩张雲乔郑岩方芳郝峰
