国家自然科学基金(30571932)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 相关作者：高亚肖莉刘勇康安静王岗更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第二附属医院西安交通大学河南省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 比较胚胎和新生小鼠肠神经嵴干细胞体外增殖分化的实验研究被引量：7
- 2007年
- 目的联合应用简化无血清培养基和连续传代法，从胚胎14～17d、新生1d、新生5d小鼠肠管分离培养肠神经嵴干细胞（gut neural crest stem cells，GNCSCs），观察其体外培养过程中增殖、分化的特点，用p75、GFAP、Peripherin、α-Actin作为特异性标志来鉴定GNCSCs及其分化的细胞系，比较胚胎和新生小鼠GNCSCs在生长速度、分化细胞的种类及数量上的差异。方法取3组小鼠的肠管，分离制成单细胞悬液，接种于DMEM／F12完全培养基贴壁培养，在连续传代培养中观察克隆球的形成；将克隆球接种于含血清培养基，观察其分化现象；用免疫细胞化学和免疫荧光法检测克隆球及其分化细胞系特异性标志物的表达。结果部分胚胎和新生小鼠肠管细胞在无血清培养基中连续传代培养形成克隆球。在血清刺激下克隆球可分化为多种形态的细胞。克隆球和分化细胞系的免疫染色均为阳性。结论胚胎和新生鼠肠管内存在具有自我更新能力的GNCSCs，且均可分化为神经元、神经胶质细胞和平滑肌三类细胞。新生鼠较胎鼠GNCSCs生长速度慢，分化的神经元数量减少，神经胶质细胞数量增加，平滑肌细胞无显著变化。
- 肖莉高亚刘勇
- 关键词：细胞培养技术细胞分化小鼠
- 人胚胎发育中p75 NTR免疫阳性肠神经元的时空分布研究被引量：5
- 2007年
- 目的通过定位和半定量分析胚胎各期肠神经嵴干细胞特异性标记p75NTR(p75)的表达水平,了解p75免疫阳性肠神经元在人类胚胎整个发育过程中的空间和时间的分布变化,为进一步阐明先天性巨结肠的发病机制和初步确定神经干细胞移植治疗先天性巨结肠获取供体细胞来源部位提供研究基础。方法流产胎儿标本20例,根据胎龄分为早期组(3个月,n=6)和中晚期组(4～9个月,n=14)。全消化道从口端到尾端分为3组:前肠、中肠和后肠。链霉亲合素-过氧化酶法免疫组织化学染色分析各期各部位p75NTR的表达水平。结果胚胎发育各期(3～9个月)全消化道各部位肌间丛和黏膜下丛均可见肠神经元胞浆和神经纤维内有p75阳性表达,胶质细胞和平滑肌细胞未见有p75阳性表达。肌间丛强阳性表达率早期为44.4%(8/18),中晚期为57.1%(24/42),均高于黏膜下丛相应各期(11.1%,19.0%,P<0.05)。中晚期肌间丛强阳性表达率在前肠(36/42,85.7%)高于中肠(18/42,42.9%)和后肠(15/42,35.7%)(P<0.05)。结论p75阳性肠神经嵴干细胞可能稳定地存在于各期前肠、中肠和后肠的肌间丛和黏膜下丛,而且肌间丛p75NTR表达水平高于黏膜下丛。而在胚胎发育中晚期,前肠肌间丛p75NTR表达水平高于中后肠肌间丛。
- 高亚秦宏康安静
- 关键词：先天性巨结肠肠神经系统
- 成体小鼠肠神经嵴干细胞体外分离、培养及鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的利用简化无血清培养基和连续传代法,从成体小鼠肠管分离培养肠神经嵴干细胞(GNCSCs),观察细胞体外培养过程中增殖、分化的特点.用p75,GFAP,Peripherin,α-Actin作为特异性标志来鉴定GNCSCs及其分化的细胞系.方法将新生1,5d的小鼠肠管制成单细胞悬液,接种于无血清DMEM/F12完全培养基中贴壁培养,连续传代培养并观察克隆球的形成过程.将克隆球接种于含血清的DMEM/F12完全培养基中,观察其分化现象.用免疫细胞化学和免疫荧光法检测克隆球及其分化细胞系特异性标志物的表达.结果成体小鼠肠管中有少数细胞在无血清培养基中存活且增殖形成克隆球.免疫染色表明克隆球是GNCSCs并且在血清诱导下可分化为神经元、神经胶质细胞、平滑肌细胞.结论成体肠管中存在具有自我更新和多向分化能力的GNCSCs,在体外GNCSCs可分化为肠神经系统所必须的细胞类型.
- 肖莉高亚刘勇
- 关键词：小鼠细胞培养技术细胞分化
- 小鼠胚胎肠神经嵴干细胞的分离培养及鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的建立分离培养及鉴定小鼠肠神经嵴干细胞(gut neural crest stem cells,GNCSCs)的方法,为临床应用奠定基础。方法分离胚鼠肠管,消化后接种于添加N2、B27和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养基,贴壁培养;连续传代后用血清促进GNCSCs分化;最后用免疫细胞化学方法染色鉴定。结果分离培养的细胞聚集生长,形成的克隆球可以传代;克隆球p75染色阳性;分化后的细胞分别表达肠神经元、神经胶质细胞和平滑肌细胞特异性抗原。结论分离培养的克隆球具有自我更新和多向分化的能力,表达肠神经嵴干细胞的特异性抗原p75,是肠神经嵴干细胞。
- 肖莉刘勇高亚
- 关键词：胚胎小鼠细胞培养细胞分化先天性巨结肠症
- 小鼠肠神经嵴干细胞体外神经元亚型分化的研究被引量：3
- 2008年
- 目的研究胚鼠（E14-17）、新生鼠（P1、P5）肠神经嵴干细胞（GNCSCs）在体外培养中经诱导向一氧化氮合酶（NOS）和血管活性肠肽（VIP）神经元分化的特点；研究标本取材和细胞消化分离间隔时间对P5鼠收获GNCSCs克隆球数量和诱导分化能力的影响。方法分离并培养胚鼠、新生鼠GNCSCs，采用血清联合多聚赖氨酸或单纯多聚赖氨酸促分化，SABC法进行nNOS和VIP免疫细胞化学染色；将P5鼠按标本取材和细胞分离的间隔时间分为0、15、30、45、60min组，对培养72hGNCSCs克隆球进行计数，再采用血清联合多聚赖氨酸促分化，SABC法进行nNOS和VIP免疫细胞化学染色。结果血清联合多聚赖氨酸对胚鼠、新生鼠GNCSCs克隆球诱导分化作用明显强于单纯使用多聚赖氨酸（P〈0．05）；胚鼠、新生鼠GNCSCs经体外培养、血清联合多聚赖氨酸诱导，均可分化出nNOS和VIP阳性细胞；P5鼠0min组获得的GNCSCs克隆球数和经联合诱导分化出的阳性细胞数明显高于其他各组（P〈0．05），15、30min均明显高于45、60min组（P〈0．05）。结论血清联合多聚赖氨酸对GNCSCs向NOS和VIP神经元分化的诱导作用明显优于单纯使用多聚赖氨酸；胚鼠和新生鼠GNCSCs经体外培养、血清联合多聚赖氨酸的诱导，可分化出NOS和VIP神经元；P5鼠肠管获得GNCSCs数和NOS、VIP神经元分化能力随标本取材、细胞分离间隔时间延长而降低。
- 王岗肖莉高亚
- 关键词：巨结肠先天性神经嵴神经元肠神经系统
