目的利用表面增强激光解析／离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF-MS）技术研究神经管缺陷胎儿羊水和神经管缺陷胎鼠羊水的蛋白质谱变化规律。方法根据实验对象不同分为①经超声确诊为胎儿神经管缺陷的孕妇11例为畸形组，包括脊柱裂5例，无脑儿5例，脑积水1例，病例组孕母均于引产前经腹抽取羊水5ml，另选产前行羊膜腔穿刺取羊水做染色体核型检测，结果正常且孕周数相匹配的正常孕妇9例为对照组；②45只雌性Wistar大鼠（体重220-260g），随机分为畸形组（n=30）和对照组（n=15）。在标准条件下饲养，午夜雌：雄=4：1合笼。次日清晨8时阴道涂片，镜检精子，确定其妊娠日期，有精子者计为孕0日（E0）。在孕10日（E10）晨8时，畸形组雌鼠称体重，按120mg／kg称取维甲酸与矿物油混合均匀（维甲酸浓度为40mg／ml），经胃管一次注入孕鼠胃内。对照组仅将与畸形组同量且不含维甲酸的矿物油经胃管一次注入。在孕17d剖腹，每只胎鼠抽取羊水约0．1～0．3ml，选取11只脊柱裂畸形胎鼠的羊水，15只正常对照胎鼠的羊水。选用CM10蛋白质芯片，在PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据。采用Ciphergen protein chip3．1．1软件对数据进行统计分析。结果在设定的优化相对分子量1～30×10^3范围内，神经管缺陷胎儿的孕母羊水中共检测到35个差异蛋白峰，其中7个有统计学意义，有6种蛋白质／多肽高表达，相对分子质量分别为14700，7995，15891，16027，13776，11040；1种蛋白质／多肽低表达，相对分子质量为23417。神经管缺陷胎鼠羊水中共检测到55个羊水差异蛋白峰，有统计学意义的差异蛋白峰有9个。脊柱裂畸形组有5种蛋白质／多肽高表达，相对分子质量分别为11658，27387，7898，11603，13829；4种蛋白质／多肽低表达，相对分子质量分别为5124，14702，5403，13626。将神经管�
目的探讨表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在筛选神经管缺陷胎儿母亲尿液中蛋白质标志物的应用。方法经超声确诊为神经管缺陷胎儿的孕妇20例和正常孕妇15例。神经管缺陷包括脊柱裂10例,无脑儿5例,脑积水5例。所有孕妇均取清晨空腹尿5ml,离心后取上清,选用CM10芯片检测。采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据。设定优化相对分子质量范围1000～30000Da。数据分析使用Ciphergen protein chip 3.1.1软件。结果共检测到39个尿液差异蛋白质峰,有统计学意义的差异蛋白质峰5个。病例组中有4种蛋白质高表达,相对分子质量分别为8320,8209,9099,10567;1种蛋白质低表达,相对分子质量3458。建立决策分类树,得到带有3个终结点的决策分类树,获得2个标志性蛋白质,分子量为9096,8244。进行留一法交叉验证后,神经管缺陷诊断模型的灵敏度为80.0%,特异度为93.3%。结论应用SELDI-TOF-MS技术可以在孕妇尿液中筛查出神经管缺陷的特异性蛋白质标志物,进一步可用于神经管缺陷产前早期无创诊断。
目的探讨利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术结合分类与回归树分析(classification and regression tree analysis,CART)在筛选神经管缺陷胎儿母亲血清和尿液蛋白质标志物的应用。方法孕母血清样本31例,尿液样本35例和羊水样本20例用于检测。采用PBSIIC型蛋白质芯片阅读机读取数据。SELDI数据结果采用分类与回归树分析(CART)建立血清和尿液诊断模型,用于区分神经管缺陷组与正常对照组。结果与正常组比较,神经管畸形组血清中有8种蛋白质高表达,4种蛋白质低表达;尿液中有4种蛋白质高表达,1种蛋白质低表达;羊水中有6种蛋白质高表达,1种蛋白质低表达。4种蛋白质峰用于建立决策分类树诊断模型,血清诊断灵敏度88.20%,特异度100%;尿液诊断灵敏度80.00%,特异度93.33%。结论血清和尿液蛋白质谱的高灵敏度和特异度提示表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱结合分类与回归树分析能够筛选神经管缺陷胎儿和正常对照。
