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严重烫伤合并铜绿假单胞菌脓毒症家兔外周血淋巴细胞蛋白质组学的研究被引量：3: 2009年; 目的研究烫伤脓毒症时外周血淋巴细胞蛋白质组的变化特点。方法24只雄性成年家兔被随机分为对照组、烫伤组、烫伤脓毒症2h和6h组，每组6只。采用30％总体表面积（TBSA）I度烫伤模型，烫伤后24h经耳缘静脉注射铜绿假单胞菌悬液（ATCC27853，浓度6×10^12cfu／L）1ml／kg制备烫伤脓毒症模型；对照组用37℃温水进行假烫伤。烫伤组于伤后24h、烫伤脓毒症组于注射菌液后2h和6h取颈动脉血分离淋巴细胞，裂解细胞，提取总蛋白，用双向凝胶电泳分离蛋白质，考马斯亮蓝染色，扫描、分析图像并筛选差异蛋白质点（判断差异的标准为平均表达量相差超过3倍，由本课题组设定）。应用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱分析方法得到肽质量指纹图谱，利用Mascot软件搜索数据库鉴定蛋白质。结果对照组、烫伤组、烫伤脓毒症2h和6h组平均蛋白质点数分别为1051±21、1026±30、1078±36、1065±31，平均匹配率分别为91％、89％、92％、94％。烫伤脓毒症2h与6h组间各蛋白质点表达量无差异；与对照组比较，烫伤组、烫伤脓毒症2h和6h组共筛选出19个差异蛋白质点，得到鉴定的有12个，包括11种蛋白质，即Cofilin、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶胞溶质蛋白A、泛素、核苷二磷酸激酶、谷氨酸脱氢酶、硒结合蛋白I、β-肌动蛋白、过氧化物氧化还原素6、膜联蛋白I、肌动蛋白-3、细胞视黄酸结合蛋白。结论严重烫伤并脓毒症时外周血淋巴细胞蛋白质组发生变化，表达改变并经鉴定的11种蛋白质功能涉及蛋白质折叠、装配、运输、降解，以及胞内信号传递、炎症、免疫、能量代谢、细胞增殖、分化、凋亡等，这些蛋白质与烧伤后脓毒症的发生有关。; 曾纪章张丕红李莉莉任利成梁鹏飞黄晓元; 关键词：脓毒症铜绿假单胞菌淋巴细胞蛋白质组

地塞米松对烧伤早期中性粒细胞体外凋亡的影响被引量：2: 2007年; 目的观察地塞米松对烧伤早期中性粒细胞体外凋亡的影响及bcl-2、核因子кB(NFкB)蛋白表达的变化。方法应用荧光染色和流式细胞仪观察地塞米松对正常血清和烧伤血清诱导烧伤早期中性粒细胞体外自发凋亡的影响;免疫组织化学SP法检测中性粒细胞bcl-2、NFкB蛋白表达。结果烧伤血清较正常血清诱导中性粒细胞凋亡减少(6.18±0.96vs.21.77±2.32,P<0.05),bcl-2、NFкB蛋白表达增加(83.27±5.45vs.49.95±2.67,0.1802±0.0130vs.0.0434±0.0196,P<0.05);加入地塞米松后,烧伤血清组凋亡增加(12.67±0.71vs.6.18±0.96,P<0.05);且NFкB蛋白表达减少(0.1031±0.0154vs.0.1802±0.0130,P<0.05),而正常血清组差异无显著性。结论地塞米松可减轻烧伤血清对中性粒细胞凋亡的抑制作用,其机制可能与NFкB蛋白表达下调有关。; 张丕红杨柳荣黄晓元梁鹏飞; 关键词：地塞米松烧伤中性粒细胞 BCL-2 核因子КB

严重烫伤影响家兔外周血中性粒细胞的蛋白质组学研究被引量：1: 2009年; 【目的】研究严重烫伤对家兔外周血中性粒细胞蛋白质组的影响。【方法]12只家兔分为A、B两组（每组6只），A组为对照组（假烫处理）、B组为严重烫伤组（30％TBSA，II度）。A组假烫、B组烫伤后24h经颈动脉采血分离中性粒细胞。裂解细胞，提取蛋白质。利用固相pH梯度胶条（240mm×3mm×0．5mm，pH3～10）及SDS-PAGE双向凝胶电泳分离蛋白质，考马斯亮蓝染色，图像扫描，PDQuest软件分析图像，筛选出差异表达蛋白质点。再从凝胶上切割差异蛋白质点，胰酶消化，应用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱分析，得到肽质量指纹图，再利用Mascot软件搜索数据库，鉴定蛋白质。【结果】建立了家兔外用血中性粒细胞蛋白质2-DE图谱。A、B组平均蛋白质点数分别为（759±20）个、（749±27）个，平均匹配率分别为93％、9l％。两组间筛选出19个差异蛋白质点，鉴定了其中8个，包括7种蛋白质。【结论】家兔严重烫伤后外同血中性粒细胞蛋白质组发生改变，表达变化的蛋白质包括蛋白质二硫键异构酶、β-肌动蛋白、膜联蛋白I、巯基特异性抗氧化蛋白等，功能涉及细胞内酶活性、细胞能动功能及可变形性、炎症、代谢、抗氧化能力、细胞凋亡等，这些蛋白质与严重烧伤后中性粒细胞功能改变有关。; 曾纪章张丕红李莉莉任利成梁鹏飞黄晓元; 关键词：中性白细胞蛋白质类

金黄色葡萄球菌侵袭烫伤家兔致淋巴细胞蛋白质组的变化被引量：1: 2009年; 目的观察金黄色葡萄球菌（SA）侵袭烫伤家兔后淋巴细胞蛋白质组的变化。方法将24只家兔按随机数字表法分为对照组、烫伤组、SA侵袭2h组、SA侵袭6h组，每组6只。对照组家兔37℃模拟烫伤；其余3组家兔均造成背部30％TBSAⅢ度烫伤，SA侵袭2、6h组分别于伤后18、22h经耳缘静脉注射2mL（1．0×10^8CFU／mL）对数生长期SA悬液。4组家兔致伤后24h取颈动脉血分离获取淋巴细胞，提取细胞总蛋白，进行双向凝胶电泳和质谱分析。结果4组家兔淋巴细胞平均蛋白质点数约为1030个；与对照组比较，其余3组筛选出差异蛋白质点19个，鉴定了其中11个蛋白质点，包括10种蛋白质。表达下调的蛋白质有丝切蛋白、胞溶质蛋白A、泛素、核苷二磷酸激酶、谷氨酸脱氢酶和膜联蛋白1，而过氧化物氧化还原素表达明显上调。结论家兔烫伤后或烫伤＋SA侵袭后淋巴细胞蛋白质组发生了明显变化，这可能与伤后免疫抑制和脓毒症的发生有关。; 张丕红杨柳荣李莉莉曾纪章黄晓元; 关键词：葡萄球菌金黄色淋巴细胞蛋白质组

严重烫伤合并铜绿假单胞菌脓毒症影响家兔外周血中性粒细胞的蛋白质组学研究被引量：2: 2008年; 目的研究严重烫伤合并铜绿假单胞菌脓毒症家兔外周血中性粒细胞蛋白质组变化。方法实验地点在卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室（湘雅医院内），实验动物为健康雄性成年中国本兔24只，随机分为四组（每组6只）：对照组（A组）、严重烫伤组（B组）、严重烫伤并脓毒症2h组（C组）和严重烫伤并脓毒症6h组（D组）。A组37℃温水假烫，B组烫伤（30％TBSA，Ⅲ度）后24h采颈动脉血分离中性粒细胞，C、D组烫伤（30％TBSA，Ⅲ度）后24h经耳缘静脉注射对数生长期铜绿假单胞菌悬液（ATCC27853，浓度6×10^9cfu／ml，剂量1ml／奴），再分别于2、6h后采颈动脉血分离中性粒细胞。裂解细胞，提取总蛋白。利用双向凝胶电泳分离蛋白质，考马斯亮蓝染色，扫描图像，PDQuest软件分析图像并筛选组间差异蛋白质点（判断差异的标准为平均表达量相差超过3倍，由本课题组成员设定）。再从凝胶上切割差异蛋白质点，胰酶消化，应用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱分析，得到肽质量指纹图，利用Mascot软件搜索数据库、鉴定蛋白质。结果A、B、C、D组平均蛋白质点数分别为（759±20）、（749±27）、（786±29）、（774±26）个，平均匹配率分别为93％、91％、89％、92％。C、D两组间蛋白质点表达量差异无统计学意义，B、C、D组与A组比较，筛选出21个差异蛋白质点，鉴定了其中9个，包括7种蛋白质。结论家兔严重烫伤并铜绿假单胞菌脓毒症时外周血中性粒细胞蛋白质组发生变化，表达改变的有蛋白质二硫键异构酶、β-肌动蛋白、膜联蛋白Ⅰ、巯基特异性抗氧化蛋白等，功能涉及细胞内酶活性、细胞能动功能及变形性、炎症、代谢、抗氧化能力、细胞凋亡等，这些蛋白质与烧伤后铜绿假单胞菌脓毒症有关。; 曾纪章张丕红李莉莉任利成梁鹏飞黄晓元; 关键词：脓毒症铜绿假单胞菌中性粒细胞蛋白质组

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国家自然科学基金(30571920)

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