国家自然科学基金(30571923)
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
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- 严重烧伤后肠黏膜肌球蛋白轻链磷酸化表达改变及其意义被引量：12
- 2008年
- 目的探讨肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化在严重烧伤早期对肠黏膜屏障功能及细胞紧密连接相关蛋白变化的作用。方法健康成年SD大鼠48只,采用随机数字表法分为正常对照组及烧伤后1、2、6、12、24h组,用异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)检测大鼠肠黏膜通透性,免疫荧光法检测肠黏膜细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、F-肌动蛋白(F-actin)及磷酸化型MLC(phosphorylated MLC,p-MLC)的变化。结果烧伤后大鼠肠黏膜通透性明显增加,伤后6h达高峰,为对照组的3倍(P<0.01);烧伤后肠上皮通透性的增加伴随有紧密连接相关蛋白ZO-1的明显重分布、细胞紧密连接损害以及肠上皮细胞p-MLC表达的增加。结论MLC磷酸化可能在严重烧伤后肠黏膜屏障功能紊乱及通透性增加的发生机制中起着重要的调控作用。
- 陈传莉刘依凌王裴孙玮王凤君
- 关键词：烧伤肠黏膜通透性ZO-1
- Rho激酶对严重烧伤大鼠血清诱导的肠黏膜上皮细胞调控机制的研究被引量：4
- 2008年
- 目的：观察烧伤血清刺激下肠黏膜上皮细胞通透性的变化及Rho激酶信号转导通路所起的作用。方法：常规培养肠黏膜上皮CaCO-2细胞,分为正常对照组、烧伤血清组和烧伤血清6 h＋Y27632组,以FITC-albumin荧光强度检测法检测人肠黏膜上皮细胞在未烧伤、1、2、6、12、24 h时相点通透性变化指标;采用Western blot法检测人肠黏膜上皮细胞中肌球蛋白轻链（MLC）、磷酸化MLC（p-MLC）和Rho激酶蛋白水平在6个时相点的变化及烧伤血清6 h＋Y27632组总MLC、p-MLC及Rho激酶蛋白水平表达。结果：严重烧伤后人肠黏膜上皮细胞通透性明显增加,并呈时相依赖性变化,6-12 h达到最高;p-MLC以及Rho激酶蛋白表达均明显增加。上述蛋白表达的增强可在加入Rho激酶特异性抑制剂Y27632后取消。结论：烧伤大鼠血清能诱导肠黏膜上皮细胞内Rho激酶激活、p-MLC表达增加及肠黏膜通透性增加,抑制Rho激酶活性能逆转这一作用。
- 刘依凌陈传莉王裴王凤君
- 关键词：烧伤大鼠血清肠黏膜上皮细胞RHO激酶
- 高效稳定表达人缺氧诱导因子抑制因子肠上皮细胞株的建立被引量：1
- 2008年
- 目的通过转染含有人FIH全长cDNA的质粒pcDNA3.1-V5-His-A-FIH,建立FIH高效表达的肠上皮细胞株。方法对pcDNA3.1-V5-His-A-FIH进行扩增、提取,用脂质体Lipofectamine 2000将pcDNA3.1-V5-His-A-FIH转入Caco-2细胞,经G418筛选并逐步传代,RT-PCR和Western blot法检测阳性细胞克隆FIH mRNA和蛋白表达。结果转染pcDNA3.1-V5-His-A-FIH后Caco-2细胞FIH mRNA是普通Caco-2细胞的1.98倍,而FIH蛋白含量是普通Caco-2细胞的1.70倍。结论成功建立了高效、稳定表达人FIH基因的肠上皮细胞株。
- 王裴戚华兵陈传莉刘依凌赵云王凤君
- 关键词：肠上皮细胞基因表达
- 缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α活化影响的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的了解缺氧对肠上皮细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）活化的影响。方法将肠上皮细胞分为常氧处理（正常对照）、缺氧（设缺氧1、2、6、12、24h）及缺氧＋寡霉素处理（分别用浓度为5、10、20、40μg／mL寡霉素处理1h，再缺氧6h）。采用蛋白质印迹法检测HIF-1α蛋白表达，免疫荧光法观察HIF-1α向细胞核转位的情况。结果与正常对照（0．08±0．07）相比较，缺氧1h肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达（0．52±0．30）即显著升高（P〈0．05），6h达峰值（2．37±1．08，P〈0．05），同时HIF-1α向细胞核转位也明显增加。寡霉素呈剂量依赖性地抑制缺氧引起的肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达增加，用5、10、20及40μg／mL寡霉素处理的缺氧肠上皮细胞HIF-1α蛋白表达量分别为1．62±0．96、1．48±0．56、1．08±0．36及0．58±0．11，均较单纯缺氧6h（2．67±1．38）显著降低（P〈0．05），HIF-1α向细胞核转位也被抑制。结论呼吸链抑制剂寡霉素可抑制缺氧肠上皮细胞HIF-1α活化，线粒体呼吸链可能在其发生机制中具有重要作用。
- 李牧王裴刘琛陈传莉王凤君
- 关键词：缺氧缺氧诱导因子1Α肠上皮细胞
- 肌球蛋白轻链激酶介导缺氧后肠上皮屏障功能紊乱的研究被引量：13
- 2009年
- 目的了解肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在缺氧后肠上皮屏障功能损害中的作用。方法建立单层肠上皮细胞缺氧模型，根据缺氧时间不同将细胞分为正常对照组（缺氧0h），缺氧2、6、8、12、24h组，（5-氯萘-1-磺酰）-1-六氢-1，4-双苯妥英钠（ML-9）处理组（缺氧6h并用终浓度为100μmol／L的MLCK特异性抑制剂ML-9处理）。用电阻仪测定单层肠上皮细胞跨细胞电阻（TER）；免疫荧光法检测单层肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的变化；蛋白质印迹法检测肠上皮细胞磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）及MLCK蛋白表达。结果缺氧6、8、12、24h组单层肠上皮细胞TER值分别为（422±17）、（427±27）、（403±40）、（426±22）Q，均低于正常对照组[（451±27）Ω，P〈0．05]，ML-9处理组为（558±110）Ω，显著高于各单纯缺氧组（P〈0．01）。缺氧6h组单层肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1发生明显改变，主要表现为不规则，出现明显皱褶、圆滑排列程度减弱，甚至有断裂及锯齿等不连续现象。ML-9组肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1近似于正常对照组，排列较规则，皱褶及锯齿状改变较单纯缺氧组减少或消失。各单纯缺氧组肠上皮细胞MLCK、p-MLC蛋白表达水平均较正常对照组增加。结论MLCK可介导缺氧引起的肠上皮屏障功能紊乱。
- 王裴陈传莉李牧王凤君
- 关键词：缺氧肌球蛋白轻链肌球蛋白轻链激酶肠上皮细胞
