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时钟基因在胚胎干细胞分化为神经元过程中的表达特征被引量：2: 2007年; 目的检测小鼠胚胎干细胞(ES)体外向神经元诱导分化过程中,7种重要时钟基因的表达情况。方法小鼠胚胎十细胞(ES),经过5个阶段诱导分化为神经元。各阶段细胞的总 RNA反转录为 cDNA,利用7种时钟基因的特异引物进行 PCR 反应,以明确其随分化表达的情况。结果各个时钟基因无非特异扩增,BMAL1、CLOCK、CRY1和 CRY2、PER1、PER3基因在各个分化阶段中都表达,而 PER2基因只在终末阶段被检测到。结论时钟基因的转录在 ES 细胞向神经元分化的过程中并不一致,提示在成体动物存在的时钟基因环路,在 ES 细胞向神经元分化过程中还没有建立。PER2 仅在分化终末期——大量停止分裂的神经元和胶质细胞出现的时期才转录,提示其可能在细胞增殖过程中发挥某种作用。; 谢淑蔡彦宁关云谦武文琪徐艳玲张愚陈彪; 关键词：胚胎干细胞细胞分化神经元节律基因

胚胎干细胞“五步法”体外诱导成为神经细胞的实验观察被引量：7: 2004年; 目的:采用“五步法”将鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ES)诱导成为神经元和胶质细胞。方法:首先将ES细胞接种到铺有明胶的培养瓶里,在无滋养层细胞的情况下生长3d,然后将细胞悬浮培养4d成为胚胎体(,胚胎体经过无血清培养基培养6d,富集nestin阳性细胞,在有丝分裂原bFGF作用下扩增6d,最后经过烟酰胺诱导分化6d,共计经过5个步骤。结果:诱导出多量表达Tuj-1的不成熟神经元(约占分化后细胞数量的80%～90%)和表达神经胶质纤维酸性蛋白的星形胶质细胞(5%～10%),还有少量表达微管相关蛋白Ⅱ的成熟神经元(5%～10%)。结论:“五步法”诱导使胚胎干细胞在分化过程中处于不同的阶段,最终诱导出大量不成熟的神经元,少量星型胶质细胞和成熟神经元。为利用不同成熟度的分化细胞移植治疗神经系统疾病提供了充足的细胞来源。; 关云谦陈彪邹春林张愚; 关键词：胚胎干细胞体外诱导神经细胞神经元神经系统疾病

干细胞脑内移植有效标记研究:绿色荧光蛋白质粒标记的应用价值被引量：20: 2004年; 目的:观察绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)质粒转化小鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESC)的效果,以及将转化的胚胎干细胞移植入正常大鼠纹状体后,GFP质粒作为细胞存活情况示踪剂的效果。方法:首先利用感受态大肠杆菌提取大量高纯度GFP质粒DNA,然后将GFP质粒与脂质体孵育形成的转化复合物和小鼠胚胎干细胞共同孵育,使GFP质粒转入胚胎干细胞;筛选表达GFP的胚胎干细胞。将筛选后表达GFP的ESC移植入活体大鼠纹状体内,移植21d后,观察表达绿色荧光蛋白的移植细胞的存活情况。结果:GFP质粒转化以后的ES细胞团和单细胞都表达亮绿色的GFP,细胞打散计数证实大约60%的细胞携带GFP,移植21d后,大鼠脑内可见大量表达GFP的移植细胞。结论:脂质体可以将GFP质粒转入鼠的胚胎干细胞,携带有GFP的ES移植后21d,GFP可以作为示踪剂观察移植细胞的存活状况。脂质体辅助的GFP质粒转化胚胎干细胞是移植示踪的较好方法。; 关云谦陈彪刘平邹春林张愚; 关键词：胚胎干细胞转基因技术

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北京市科委科技计划项目(H020220010290)