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乳腺珠蛋白基因在大肠杆菌中的诱导表达及纯化研究被引量：2: 2005年; 目的克隆乳腺珠蛋白(hum an m amm aglob in,hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。方法自乳腺癌组织提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cDNA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论成功地纯化出hMAM重组蛋白。; 刘秀娜王仙园周娟潘自铁赵力军胡川闽; 关键词：人乳腺珠蛋白原核表达系统蛋白纯化

抗重组人乳腺珠蛋白单克隆抗体的制备及其特异性鉴定被引量：1: 2008年; 目的通过杂交瘤技术获得特异性抗hMAM单克隆抗体,为进一步研制基于hMAM的乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法以纯化的重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,运用杂交瘤技术制备、间接ELISA法及免疫组化法筛选出能稳定分泌特异性抗hMAM的单克隆抗体细胞株。结果通过杂交瘤技术获得了2株能分泌特异性抗hMAM单克隆抗体的杂交瘤细胞株hMAM-A2及hMAM-B7,其分泌的单克隆抗体亚类均属于IgG1,Western blotting结果显示2株细胞分泌的单克隆抗体特异性强能与34kDa处的hMAM抗原形成单一的蛋白质显色条带,免疫组化结果显示其仅与乳腺癌组织呈阳性反应,与其他肿瘤组织不发生交叉反应。结论利用鼠-鼠杂交瘤技术成功的制备了2株稳定分泌高效价、高特异性抗hMAM的杂交瘤细胞株。; 刘秀娜郭建秀罗羽胡川闽; 关键词：人乳腺珠蛋白乳腺癌杂交瘤技术单克隆抗体

乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白基因的克隆及原核表达: 2006年; [目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白(humanmammaglobin,hMAM)基因并诱导其表达,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。[方法]从乳腺癌组织提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hMAM基因编码序列,将扩增产物克隆至PGEM-T载体中,DNA测序,用限制性内切酶切下目的基因,与相同酶切的表达载体pQE40连接、筛选、鉴定,构建pQE40-hMAM融合表达质粒,以硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌M15中表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达结果。[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应(PCR)扩增产物的分子量大小与预期相符。对重组质粒分析表明,插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致。在IPTG的诱导下,M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34kD的产物。[结论]重组表达质粒pQE40-hMAM表达成功。; 刘秀娜王仙园周娟赵力军潘自铁胡川闽; 关键词：珠蛋白基因相关分子原核表达逆转录聚合酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳

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重庆市应用基础研究项目(2004)