广东省自然科学基金(011766)
- 作品数：36 被引量：107H指数：7
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- 小鼠蛋白激酶CK2β亚基的克隆、表达及活性测定被引量：3
- 2003年
- 通过反转录PCR从NIH 3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶CK2 β亚基编码区cDNA ;构建其表达质粒并经测序证明其编码小鼠蛋白激酶CK2 β亚基 ,但与两种已报道的小鼠CK2 β亚基cDNA编码区序列分别存在一个碱基差异 ,与大鼠、猪、兔和人CK2 β亚基cDNA的编码区相应碱基序列则一致。将其在表达菌BL2 1(DE3)中诱导表达 ,出现一 2 6kDa分子量蛋白过度表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 31 7%,但大多数以不溶形式存在。Westernblot鉴定表明 :过度表达产物能与抗人CK2 β亚基抗体发生特异性免疫反应。当CK2α和 β亚基以 1:1摩尔比混合时 ,构成性的CK2全酶显示出最大活性 ,直接表明CK2 β亚基对CK2α有激活作用。这些结果有力地证明了克隆表达的重组蛋白是小鼠蛋白激酶CK2
- 陈小文郑克勤梁景耀刘新光梁念慈
- 关键词：小鼠蛋白激酶分子克隆DNA测序免疫印迹
- 体外突变技术在研究蛋白激酶CK2中的应用被引量：1
- 2003年
- 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普通存在的非信使依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工、细胞凋亡等方面起重要作用。体外突变技术是在DNA重组及测序等技术的基础上发展起来的一项技术 。
- 黄功华刘新光梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2信号传导
- 蛋白激酶CK2与HIV的生命周期被引量：9
- 2002年
- 蛋白激酶CK2是一种高度保守的真核细胞中普遍存在的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶。CK2与HIV-1的关系十分密切,它可在HIV-1生命周期的不同阶段中发挥重要的作用。CK2的抑制剂可能在细胞水平具有一定的抗HIV-1效应。
- 李春梅刘新光梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2HIV生命周期艾滋病毒艾滋病
- 黄芩甙对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析被引量：7
- 2004年
- 背景与目的蛋白激酶CK2是一种在真核细胞中普遍存在的多功能的丝/苏氨酸蛋白激酶。在许多实体瘤、白血病细胞中CK2的活性均增高。其α及α'基因是原癌基因。CK2作为一种具有潜在抗肿瘤作用的分子靶点正日益受到重视。为了寻找肿瘤细胞内CK2的特异性抑制剂,本研究观察黄芩甙体外对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果,并进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α'及β亚基并在体外等摩尔混合构成CK2全酶,测定不同条件下CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果黄芩甙能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=2.54μmol/L)。酶动力学分析表明,黄芩甙与ATP呈非竞争性抑制CK2的活性(Ki=7.73μmol/L),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=3.07μmol/L)。结论黄芩甙是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂。
- 林小聪刘新光陈小文陈伟珠梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2重组蛋白全酶黄芩甙酶动力学
- 酵母双杂交系统在研究蛋白激酶CK2中的应用被引量：4
- 2003年
- 酵母双杂交系统是研究蛋白质间相互作用的一种有效方法 ,蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工等方面起重要作用。
- 黄功华梁景耀刘新光梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2酵母双杂交系统相互作用蛋白
- 槲皮素-7,4′-二硫酸酯钠对重组人CK2全酶的抑制作用及动力学分析被引量：4
- 2002年
- 目的 观察槲皮素 7,4′ 二硫酸酯钠 (sodiumquercetin 7,4′ disulphate ,SQDS)对重组人CK2全酶的直接作用及酶动力学机制。方法 通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP的3 2 P放射活度检测不同条件下的重组人CK2全酶的活性。结果 重组人CK2是一种Ca2 +,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。SQDS对重组人CK2全酶有很强的抑制作用 ,IC50 为 4 4μmol·L- 1 ,抑制作用大于已知CK2抑制剂DRB和A3。CK2的动力学研究表明 :SQDS与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用。结论 SQDS是有效的CK2抑制剂 ,对于开发更有效的CK2抑制剂及将SQDS用于临床提供了一定的实验依据。
- 刘新光梁念慈刘文佘戟莫丽儿
- 关键词：蛋白激酶CK2全酶酶动力学
- 蛋白激酶CK2的神经生物学功能
- 2003年
- 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的多功能 ,丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶具有高度保守性。CK2全酶由两个催化亚基 (α和 /或α′亚基 )和两个调节亚基 β所构成。α/α′亚基具有催化活性 ,β亚基主要稳定及调节CK2的活性。CK2大量存在于大脑 ,而且集中分布于神经元及其突触 ,在突触形成、突触传递、信息传递和储存、生长、发育及神经元形态发生等方面发挥着重要作用 ;CK2对海马神经细胞具有营养刺激活性 ,其磷酸化作用与大脑的记忆功能有关 ;CK2可能在某些神经系统特异性病变 (如阿尔茨海默病 )
- 林小聪刘新光
- 关键词：蛋白激酶CK2神经系统
- 重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定被引量：1
- 2003年
- 目的 研究重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达 ,并进行纯化和活性的测定。方法 将已构建成功的小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,产物依次进行DE 5 2、P11磷酸纤维素和肝素 Sepharose柱层析分离 ,SDS PAGE银染。结果 重组质粒转化表达菌经IPTG诱导后出现一分子量为 4 2ku蛋白过度表达 ,表达蛋白约占菌体总蛋白的 30 6 %。从2 87mg可溶性蛋白质中得到 4 7mg纯化蛋白。SDS PAGE银染显示纯化的蛋白为单一蛋白带。纯化的CK2α和 β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶。重组的CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致。
- 梁景耀陈小文刘新光梁念慈
- 关键词：原核表达蛋白质纯化
- 醛缩酶A可与人蛋白激酶CK2α′亚基发生特异相互作用被引量：3
- 2004年
- 通过PCR扩增构建的重组质粒pTHCKA′获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将PstⅠ NdeⅠ双酶切的PCR产物 ,连接到同样酶切的“诱饵”载体pGBKT7,构建为酵母双杂交穿梭表达质粒 (BD质粒 ) ,经DNA测序确证及转染感受态酵母菌AH10 9以排除自主激活 .从体外培养的HL 6 0细胞中提取总RNA ,采用CLONTECHSMART(switchingmechanismat 5′endofRNAtranscript)技术 ,在酵母细胞中构建HL 6 0细胞的酵母双杂交cDNA文库 ,将构建的BD质粒、文库cDNA、酵母穿梭表达质粒pGADT7 Rec ,共转染感受态酵母菌AH10 9进行酵母双杂交实验 .筛选与人蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白 .筛选结果及一对一回复性实验显示 ,有 6种与CK2α′相互作用蛋白 ,核酸序列分析及同源性检索表明 ,其中 1种与醛缩酶A有高度同源性 (99 6 % ) .
- 黄功华梁景耀陈碧刘新光梁念慈
- 关键词：酵母双杂交系统相互作用蛋白
- 七种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶抑制作用的结构效应关系(英文)被引量：4
- 2009年
- 目的:观察7种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响并进行结构效应关系的分析。方法:将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨黄酮类化合物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果:杨梅黄酮、槲皮素、桑色素、毛地黄黄酮、莰非醇、芹菜苷配基和白杨黄素能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是1.18,0.51,16.16,0.86,1.88,1.72和13.63μmol/L;其中杨梅黄酮、槲皮素、毛地黄黄酮、莰非醇和芹菜苷配基的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3;而桑色素和白杨黄素的作用效果接近于DRB。结构效应关系分析表明,C6,C3′和C4′上的-OH可能是黄酮类CK2抑制剂发挥抑制作用的药效基团;而在C3上去除1个-OH对其抑制效果基本没有影响;此外,C2′和C5′上的-OH可减弱黄酮类化合物对CK2的抑制作用。结论:黄酮类化合物对体外蛋白激酶CK2的抑制效果可能取决于其羟基的位置。
- 李春梅刘新光林小聪陈小文
- 关键词：蛋白激酶CK2全酶黄酮类化合物
