国家自然科学基金(30772135)
- 作品数：5 被引量：26H指数：3
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- 相关机构：中山大学附属第三医院广州军区广州总医院广东省第二人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
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- 肿瘤靶向性细胞穿膜肽的固相合成及体外活性研究被引量：6
- 2011年
- 目的采用固相合成法合成以基质金属蛋白酶为靶点的肿瘤靶向性细胞穿膜肽,用5-羧基四甲基罗丹明对其进行荧光标记,并对合成的产物进行生物活性和细胞毒性评估。方法采用N-芴甲氧羰基(Fmoc)作为α-氨基酸的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成肿瘤靶向性细胞穿膜肽,并在有耦合剂HATU和DMF的情况下,加入5-羧基四甲基罗丹明进行荧光标记,应用高效液相色谱分析仪和质谱仪测定其纯度和分子量;荧光显微镜观察穿膜肽对体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721和正常肝脏细胞株LO2的穿膜效果,以评价穿膜肽的生物学活性;MTT比色法检测穿膜肽对SMMC-7721细胞活性的影响。结果所合成的细胞穿膜肽经高效液相色谱法鉴定纯度为96.05%,经质谱鉴定相对分子量为3504.9。这种穿膜肽对正常肝脏细胞株LO2无明显穿膜作用,但对肝癌细胞株SMMC-7721有较强的穿膜作用,并且对细胞活性无明显影响。结论采用Fmoc固相肽合成法成功合成细胞穿膜肽;所合成的细胞穿膜肽具有肿瘤靶向性。
- 何吉文李华姜楠台艳张琪杨扬陈规划
- 关键词：肝肿瘤肿瘤靶向性固相合成基质金属蛋白酶2
- 胆管空肠吻合术在肝移植术后肝外胆道并发症治疗中的应用价值被引量：6
- 2012年
- 目的探讨胆管空肠Roux-en-Y吻合术(胆肠吻合术)在肝移植肝外术后胆道并发症治疗中的作用。方法本回顾性研究对象为2003年3月至2008年3月在中山大学附属第三医院行原位肝移植(OLT),术后发生胆道并发症的109例患者。患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。按照肝移植术后胆道并发症治疗方法不同分为胆肠吻合组(40例)和非胆肠吻合组(69例)。胆肠吻合组男性31例,女性9例,年龄25～69岁,中位年龄47岁;胆漏4例、胆道狭窄31例、胆泥或结石形成5例。非胆肠吻合组男性56例,女性13例,年龄31～59岁,中位年龄45岁;胆漏3例、胆道狭窄41例、胆管炎19例、胆泥或结石形成6例;首次肝移植术中胆道重建方式均采用供肝胆管￣受体胆管端端吻合术。胆肠吻合组患者均行胆肠吻合术,非胆肠吻合组治疗方法包括内镜下逆行性胰胆管造影术(ERCP)鼻胆管引流、经皮经肝穿刺胆道引流术(PTCD)、胆道介入放置支架、肝动脉放置支架。患者接受随访。观察两组死亡发生情况、胆道并发症的治疗情况、治疗后患者的术后胆道感染发生率,比较采用χ2检验。结果所有患者均接受随访,随访时间6～24个月,中位随访时间15个月。胆肠吻合组无发生死亡,非胆肠吻合组发生死亡4例,均死于术后严重的胆道感染及合并其他器官感染。胆肠吻合组的胆道并发症明显好转率为78%(31/40),非胆肠吻合组明显好转率为70%(48/69);胆肠吻合组胆道并发症的明显好转率显著高于非胆肠吻合组(χ2=32.517,P<0.01)。胆肠吻合组的胆道感染发生率61%(19/31),非胆肠吻合组为63%(30/48),两组比较差异无统计学意义(χ2=0.060,P>0.05)。结论胆肠吻合术能有效改善肝移植术后肝外胆道并发症的临床症状,在治疗肝移植术后胆道并发症方面有一定应用价值。
- 李华汪根树傅斌生张彤朱曙光吴小材张剑杨杨陈规划
- 关键词：肝移植胆肠吻合术胆道感染
- 一种人硫氧还蛋白基因修饰肝细胞的制备
- 2010年
- 【目的】制备出一种人硫氧还蛋白(hTrx)基因修饰的肝细胞。【方法】逆转录聚合酶链反应法扩增出hTrxcDNA,应用重组逆转录病毒制备hTrx基因修饰大鼠肝细胞。白蛋白免疫组化SABC法进行肝细胞活性鉴定,MTT比色试验进行抗氧化应激能力检测。【结果】克隆出hTrx开放阅读框cDNA并制备出重组逆转录病毒,感染真核细胞后可分泌融合表达的hTrx并具有生物学活性。制备出hTrx基因修饰大鼠肝细胞,免疫组化SABC法显示肝细胞功能正常,MTT比色法检测具有较强的抗氧化应激能力(P<0.05),并可有效增殖。【结论】成功制备出一种具有较强抗氧化应激的hTrx基因修饰肝细胞。
- 李华汪根树张剑姜楠贾昌昌杨扬陈规划
- 关键词：肝细胞人硫氧还蛋白基因修饰
- RNAi靶向人端粒酶逆转录酶对人肝癌细胞的生长抑制作用被引量：11
- 2008年
- 目的利用RNAi技术降低人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,抑制其活性,研究其对人肝癌细胞的增殖和凋亡影响。方法构建针对hTERT基因的siRNA真核表达载体pLXSN-EGFP-U6-siTERT,制备靶向hTERT的重组逆转录病毒;用重组逆转录病毒感染HepG2人肝癌细胞,以TRAP法检测端粒酶活性变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;MTT法检测肿瘤细胞生长抑制情况。结果成功制备出hTERTsiRNA逆转录病毒表达载体;重组病毒感染HepG2细胞24、48、72h后端粒酶活性分别下降了23.84%、58.03%和85.01%(P<0.05);感染后24h细胞凋亡率29.05%;MTT实验结果显示肿瘤生长受到抑制,并存在一定量效和时效关系。结论hTERTsiRNA能特异性使hTERT基因表达抑制,端粒酶活性下降,肝癌细胞增殖受到抑制。
- 李华王欣璐杨扬张剑汪根树姜楠陈规划
- 关键词：RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因治疗
- 肿瘤靶向性细胞穿膜肽介导小分子干扰RNA对肝癌细胞的抑制作用被引量：3
- 2013年
- 目的 观察以基质金属蛋白酶为靶点的肿瘤靶向性细胞穿膜肽介导小干扰RNA（siRNA）进入肝癌并对肝癌细胞SMMC-7721起一定抑制作用.方法 以体外培养的肝癌细胞SMMC-7721为研究对象,将细胞分为实验组和对照组,实验组加入siRNA质粒/穿膜肽复合物,对照组加入空质粒/穿膜肽复合物,培养48 h后收集两组细胞,流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的表达水平,噻唑蓝（MTT）法检测SiRNA质粒/穿膜肽复合物对细胞增殖的抑制作用.结果 实验组与对照组比较G1期细胞所占比例增多（实验组75.14％、对照组62.55％）,G2期细胞比例减少（实验组11.39％、对照组12.14％）、S期细胞比例减少（实验组13.47％、对照组25.31％）,说明经穿膜肽质粒复合物处理后细胞被阻滞在G1期,实验组细胞hTERT mRNA的表达量约为未对照组的74％,即实验组mRNA表达水平下调约26％.肝癌细胞经穿膜肽复合物处理48 h后MTT法测细胞增殖抑制率为34.82％.结论 肿瘤靶向性细胞穿膜肽可介导siRNA进入肝癌细胞并可对肝癌细胞起一定的抑制作用.
- 何吉文李华向国安陈开运傅斌生杨扬陈规划
- 关键词：穿膜肽肿瘤靶向性小干扰RNA
