国家自然科学基金(30600188)
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 相关作者：陈红张苏明黎逢光湛彦强许慧芳更多>>
- 相关机构：华中科技大学中国人民解放军解放军第一六一医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人胚胎干细胞在3种培养体系中的生长被引量：1
- 2009年
- 人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)的培养一直是干细胞研究的重要内容.用本实验室独立建系的两株hESCs,建立3种不同的培养体系:小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)做饲养层,永生化人成纤维细胞(immortalized human adult fibroblasts,HAFi)做饲养层,无饲养层条件培养基培养体系(condition medium,CM),观察在3种培养体系中,干细胞的增殖和分化情况.发现3种培养体系中的hESCs都可以表达一致的生物学特性,但也有不同之处,相对于CM干细胞在MEFs和HAFi饲养层体系的分化率低,增殖快;但MEFs来源于鼠类是异源细胞,HAFi虽不含鼠源性成分却繁殖很慢;无饲养层的体系便于操作,无外源细胞存在.实验所得出的结果可以引导研究人员针对于临床、科研不同的需要,选择最适合的培养体系.
- 许慧芳陈红焦淑洁黎逢光张苏明
- 关键词：人胚胎干细胞
- 体外诱导人类胚胎干细胞定向分化为神经干细胞被引量：3
- 2007年
- 目的探索一种诱导人类胚胎干细胞(hESCs)向神经干细胞(NSCs)定向分化的简单高效的方法。方法将 hESCs 在细菌培养皿中以无血清培养基悬浮培养形成拟胚体,进一步将成熟拟胚体打散、贴壁培养于含有 B27和 noggin 等成分的特定培养基中,诱导其向神经干细胞定向分化。结果悬浮于细菌培养皿中的 hESCs 不贴壁,进行性长大,7～10 d 形成成熟拟胚体;拟胚体在特定培养基中可诱导成高纯度(约96.4%)的 nestin 阳性细胞(即 NSCs),进一步培养,这些细胞可分化成各种成熟的神经细胞。结论该方法诱导 hESCs 向 NSCs 定向分化较文献报道耗时更短、费用低廉且效率更高,为进行细胞移植治疗神经系统相关疾病提供了很好的种子细胞来源。
- 黎逢光许慧芳陈红柴竞艳邢变枝湛彦强李晓晴郭守刚张苏明
- 关键词：神经元干细胞细胞分化
- 人类胚胎干细胞及其衍生的神经干细胞的免疫原性
- 2007年
- 目的体外观察人类胚胎干细胞(hESCs)及其衍生的神经干细胞(NSCs)的免疫原性。方法运用流式细胞仪检测 hESCs 及其衍生的 NSCs 表面 HLA-Ⅰ类分子(HLA-ABC)、HLA-Ⅱ类分子(HLA-DR、-DP、-DQ)的组成型表达,并观察在30 ng/ml 重组人干扰素-γ(IFN-γ)诱导作用下 NSCs细胞表面 HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ诱导型表达的情况。同时通过将 IFN-γ诱导前后的 NSCs 与健康人外周血淋巴细胞共培养,观察淋巴细胞增殖的程度,了解其免疫反应情况。结果在未分化前 hESCs 表面仅少量表达 HLA-Ⅰ类抗原(6.18%),几乎没有 HLA-Ⅱ类抗原的表达;经诱导分化成 NSCs 后 HLA-Ⅰ类抗原表达有所增加(23.56%),HLA-Ⅱ类抗原表达亦轻度增高(1.28%、1.73%);经 IFN-γ诱导后,NSCs 表面 HLA-Ⅰ类抗原表达(46.43%)明显上调,HLA-Ⅱ类抗原的表达(8.73%、10.57%)也进一步地上调,且其刺激淋巴细胞发生增殖反应的能力也进一步增强。结论 hESCs 衍生的 NSCs 具有一定的免疫原性,可能会诱导针对 HLA-Ⅰ类分子的排斥反应,而在宿主的机体处于某些炎症或应激状态及移植局部存在炎症反应时,有可能进一步诱导针对 HLA-Ⅱ类分子的免疫反应。
- 黎逢光李朝武唐洲平柴竞艳湛彦强张苏明
- 关键词：干细胞细胞分化组织相容性抗原干细胞移植
- 两株人胚胎干细胞的无饲养层扩增被引量：1
- 2009年
- 目的:建立两株中国人胚胎干细胞(hESCs)的无饲养层的培养体系,观察条件培养基所需的饲养层密度,并探索最佳的传代方式。方法:两株人胚胎干细胞hES-846XX和hES-1846XY分别使用不同密度(3×105/mL、6×105/mL和1.2×106/mL)获得的条件培养基(CM)在无饲养层培养体系培养12代以上,用机械分离法和Ⅳ型胶原酶法进行传代,观察比较结果并对所得hESCs鉴定。结果:6×105/mL～1.2×106/mL之间的密度都是合适密度;Ⅳ型胶原酶在长期传代中优于机械法传代;所得细胞维持干细胞未分化状态和全能性。结论:无饲养层的培养体系可以用于中国胚胎干细胞培养,两株中国人胚胎干细胞(hESCs)的倍增周期、所需饲养层密度及分化率等方面与国外hESCs有明显差别。
- 许慧芳黎逢光陈红焦淑洁张苏明
- 关键词：人胚胎干细胞条件培养基
- 无动物源性培养系统对人胚胎干细胞生长的支持作用
- 2009年
- 目的:建立完全非动物源性培养系统,为人胚胎干细胞定向诱导为各系统细胞应用于临床、消除动物源性污染打下基础。方法:分别采用人包皮成纤维细胞、胎儿肌肉细胞及人子宫内膜基质细胞为饲养层细胞,以血清替代品取代动物血清,支持人胚胎干细胞生长,观察其增殖和分化情况。结果:人包皮成纤维细胞、胎儿肌肉细胞均能很好支持人胚胎干细胞生长增殖,并保持90%左右未分化表型:AKP染色强阳性,SSEA-4、TRA-1-81表达强阳性,可见OCT-4 mRNA表达,核型正常。人子宫内膜基质细胞不能支持hESC的生长。结论:完全可以使用非动物源性培养系统支持人胚胎干细胞增殖。
- 钱坤陈红朱桂金
- 关键词：胚胎干细胞成纤维细胞肌肉细胞子宫内膜细胞
- 稳定表达GFP的胚胎干细胞株的建立及其生物学特性研究被引量：1
- 2007年
- 目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的胚胎干细胞株,为探索胚胎干细胞及其衍生细胞移植后在体内的分化、迁移及整合提供细胞模型。方法构建含Neo抗性基因质粒pCX-EGFP-Neor并用脂质体转染胚胎干细胞系ES-D3,G418筛选得到稳定表达的细胞株。细胞计数检测其倍增时间、流式细胞仪分析细胞周期,酶组织化学检测碱性磷酸酶(AKP)的表达,免疫组化检测阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)并观察其体外分化能力。结果该细胞株可在体外形成拟胚体及各种形态的成熟细胞且均可发出绿色荧光。该细胞株的倍增时间约为12h,G0/G、G2/M、S期分别为22.16±2.03%、18.46±1.54%、59.38±5.76%。倍增时间和细胞周期与未转染GFP的ES-D3相比没有显著性差异(P>0.05)。碱性磷酸酶(AKP)和SSEA-1呈强阳性表达。结论我们成功地建立了稳定表达GFP的胚胎干细胞株,且其生物学特性未受到GFP的影响。
- 钱坤陈红朱桂金张苏明
- 关键词：胚胎干细胞绿色荧光蛋白生物学特性
- Olig2和Hb9在小鼠胚胎脊髓中的表达变化
- 2009年
- 目的探讨少突胶质细胞系基因（01igodendrocyte lineage gene）Olig2和同源盒基因（Homeobox）Hb9在小鼠胚胎脊髓发育过程中的表达情况。方法选择小鼠的9．5～13．5d胚胎脊髓，并分为E9.5d组、E10.5蝴、E12.5d组、E13.5d组；采用免疫荧光方法检测Olig2和Hb9在胎鼠脊髓中的分布，同时用流式细胞仪检测分别标记Olig2和Hb9的阳性细胞百分率。结果免疫荧光染色显示在这5组胎鼠脊髓的腹侧都有Olig2和Hb9的表达，流式细胞仪检测显示E9．5d组Olig2阳性细胞百分率高于其它4组，差异有统计学意义（P＜0．05），E11．5d组Hb9的阳性细胞百分率高于其它4组，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论Olig2和Hb9可能与胎鼠脊髓运动前体细胞和运动神经元的发育有关。
- 韦春霞陈红尤春景
- 关键词：脊髓运动神经元OLIG2
- E8.5天小鼠神经管来源的神经上皮细胞microRNAs的表达谱分析与功能预测
- 2008年
- 目的:microRNAs是一类非编码的小分子RNAs。通过抑制基因转录参与细胞、组织的发育、分化。本研究旨在发现调控神经发生的一些microRNAs并探讨其分子机制,为先天性神经系统发育畸形提供理论依据及可能的治疗靶点。方法:利用MICRORNA芯片,分析E8.5天小鼠胚胎神经管来源的神经上皮细胞microRNAs表达谱。然后利用生物信息学方法(ht-tp://pictar,bio.nyu.edu,http://www,targetscan.org)筛选相关的microRNAs并进行分析和功能预测。结果:有74个上调的基因和65个下调的microRNAs。其中一些microRNAs的靶基因是和神经系统发育相关的,例如miR-367、miR-26b、miR-10b、miR-219和-199*等。结论:microRNAs在早期神经系统发育中可能发挥了重要的作用。
- 陈海萍黄晓琳陈红
- 关键词：微RNAS神经管发育
- 小鼠胚胎干细胞定向分化为神经干细胞过程中microRNA的变化被引量：2
- 2009年
- 目的用生物芯片技术分析胚胎干细胞定向分化为神经干细胞过程中microRNA(miRNA)的表达变化,筛选调控的分化的miRNA,研究分化调控机制。方法胚胎干细胞在含LIF培养基中培养3d后,采用经典5步培养方法定向诱导向神经干细胞分化,采用nestin作为神经干细胞标记进行鉴定,送检胚胎干细胞及神经干细胞,提取总RNA以及小分子RNA,经荧光标记后与miRNA基因芯片杂交,获得胚胎干细胞诱导前后miRNA表达谱。结果1)胚胎干细胞在含LIF培养过程中保持未分化状态,Oct-4、碱性磷酸酶表达阳性;2)经典五步法诱导胚胎干细胞定向分化为神经干细胞,nestin阳性细胞为85%;3)通过基因微阵列分析,有90个miRNA的改变显著,其中68个表达上调,22个表达下调。结论miRNA可能对胚胎干细胞定向分化为神经干细胞过程起到关键作用。
- 邢变枝陈红湛彦强张苏明
- 关键词：胚胎干细胞分化生物芯片
- 小鼠胚胎干细胞移植入成体大鼠脑内的区域特异性存活与分化(英文)被引量：1
- 2007年
- 全能区域非特异性的胚胎干细胞是研究成体不同脑区控制干细胞分化能力的十分有力的工具。胚胎干细胞源性神经前体细胞移植入成体脑后可分化为功能性神经元,但是未分化的胚胎干细胞在成体脑内各个部位的存活、生长与分化的潜能差异尚不清楚。本文旨在探讨成体脑组织对胚胎干细胞的影响及胚胎干细胞在成体脑内的一系列行为。将少量转绿色荧光蛋白未分化的小鼠胚胎干细胞移植入成体大鼠脑内不同部位,分别于移植5、14和28 d后处死大鼠,进行形态学观察及免疫组化定性,以了解未分化的小鼠胚胎干细胞在大鼠脑内不同区域的存活、生长与分化。结果发现未分化的小鼠胚胎干细胞可逐步整合入受体组织并向nestin阳性神经前体细胞分化。移植细胞及其后裔在海马生长最为旺盛,而在隔区最差(P<0.01);移植细胞分化为神经干细胞的效率也是在海马最高,而在隔区最低(P<0．01)。提示只有部分脑区适合胚胎干细胞及其后裔生存,并提供促进其分化的有益环境。因此,由于位置特异的微环境因子及环境因素的存在,宿主组织特性对决定中枢神经系统疾病的细胞替代疗法策略是相当重要的。
- 鲁文果陈红王东黎逢光张苏明
- 关键词：存活分化胚胎干细胞细胞移植
