国家自然科学基金(30260083)
- 作品数：14 被引量：29H指数：4
- 相关作者：马学恩刘淑英么宏强斯日古楞李景鹏更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学东北农业大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病毒中国NM株gag基因3'端951 bp段的分子克隆与序列分析被引量：4
- 2004年
- 究参照Genebank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒的全基因序列,设计合成一对引物,对JSRV中国NM株的gag基因3'端中主要编码核衣壳(NC)蛋白的基因段进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约951bp的特异条带,将其回收后克隆入pMD＿18T载体中,并进行序列测定。结果表明,与南非代表株(基因序列号NC＿001494)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为95 4%,推导出的氨基酸同源性为95%。与美国代表株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为91 3%,氨基酸同源性为91%。这是我国首次报道的绵羊肺腺瘤病毒的gag基因的一段序列,为我国科研工作者进行更深入的研究奠定基础。
- 刘淑英马学恩李景鹏
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒GAG基因
- 绵羊肺腺瘤病毒内蒙古株的分离与观察被引量：1
- 2004年
- 以内蒙古某羊场自然感染绵羊肺腺瘤病的病肺组织 4例和 3月龄绵羊胎肺 2例作为材料 ,对胎肺细胞进行了原代培养并接种绵羊肺腺瘤病毒悬液 ,进行了绵羊肺腺瘤病毒 (JSRV)的分离 ,同时采用电镜负染色技术和超薄切片透射电镜技术对上述样品进行了观察。结果表明 ,自然感染绵羊肺腺瘤病的 4例病肺组织中都有散在的病毒粒子 ,其直径为 10 0～ 12 5nm ,接种病毒悬液的胎肺细胞从第 2代到第 9代均出现细胞病变 ,但对绵羊胎肺培养的病毒悬液电镜负染色观察未发现典型的病毒粒子 。
- 刘淑英马学恩韩彩霞王凤龙张九河
- 关键词：绵羊病毒粒子
- 绵羊肺腺瘤病毒中国NM株部分gag基因的克隆与序列分析被引量：10
- 2004年
- 参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒的基因序列,设计合成一对引物,对绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)内蒙株的gag基因中主要编码CA蛋白的基因段进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约897bp的特异条带,将其回收后克隆入pMD-18 T载体中,并进行序列测定与分析。结果表明,与南非株(基因序列号NC-001494)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为83%,推导出的氨基酸同源性为84%。与美国株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为81.5%,氨基酸同源性为83%。这是我国首次报道的绵羊肺腺瘤病毒的gag基因的一段序列,为我国科研工作者进行更深入的研究奠定基础。
- 刘淑英马学恩李景鹏张九河
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒GAG基因绵羊肺腺瘤病SPA
- 绵羊基因组中内源性绵羊肺腺瘤病毒相关序列的确定被引量：1
- 2009年
- 绵羊都含有与绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus，JSRV）密切相关的15～20拷贝内源性绵羊肺腺瘤病毒（enJSRV）相关序列。宿主可利用内源性病毒来预防致病性反转录病毒的感染，一些内源性病毒可以有效地干扰相关外源性病毒的复制。本试验通过分子生物学手段确定了蒙占绵羊基因组中含有enJSRV6和enJSRV10两个内源性病毒基因而内蒙古白绒山羊中未发现。通过比较内、外源病毒LTR序列的酶切图谱，获得专一作用外源性病毒的核酸内切酶MspI、TfiI、BsaWI，如果将酶切与聚合酶链式反应（PCR）相结合，不需要经过测序就可分辨enJS—RV和外源性绵羊肺腺瘤病毒（exJSRV），形成“酶切-PCR”检测技术，将为绵羊肺腺瘤病的快速诊断提供了新的手段。
- 吴江鸿张文广刘淑英李金泉
- 关键词：蒙古羊绵羊肺腺瘤病毒
- 绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白基因在大肠杆菌中的分段表达被引量：2
- 2007年
- 为了建立原核高效表达体系,从自然感染绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株的肺肿瘤组织中提取基因组DNA,应用PCR技术分别扩增编码囊膜蛋白(env)基因的表面蛋白(surface protein,SU)和跨膜蛋白(transmembrane protein,TM)区域基因,通过T-A克隆的方法分别克隆入pGEM-TEasy载体中,然后利用设计的起始密码、终止密码以及相应酶切位点的引物,把env基因的SU区和TM区基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1中,分别构建SU和TM的重组表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化入大肠杆菌BL21 CodonPlus中并在IPTG的诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE分析鉴定。结果表明,该基因可以在大肠杆菌中以稳定的包涵体形式高效表达,表达的SU和TM融合蛋白表观分子质量约为68 ku和46 ku,表达量分别占全菌蛋白的25%和30%,并且从包涵体分离纯化得到的表达蛋白具有较高纯度,是一种理想的免疫原。
- 斯日古楞么宏强马学恩王升启
- 关键词：绵羊肺腺瘤病囊膜蛋白基因克隆
- 绵羊肺腺瘤病病毒NM株衣壳蛋白基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2007年
- 为了建立原核高效表达体系,从自然感染绵羊肺腺瘤病病毒内蒙(NM)株的肺肿瘤组织中提取基因组DNA,应用PCR技术扩增编码gag基因衣壳蛋白(Capsid protein,CA)基因,构建CA蛋白的重组表达质粒pGEX-4T-1-CA,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化入Ecoli BL21 CodonPlus中,在IPTG的诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE分析鉴定。结果表明,该基因可以在大肠杆菌中以可溶性和包涵体形式高效表达,表达的CA融合蛋白表观分子量约为37 Ku,表达量占全菌蛋白的20%,利用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析柱纯化可以得到具有较高纯度的表达蛋白,是一种理想的免疫原。本研究为下一步利用重组蛋白研制绵羊肺腺瘤病病毒NM株的单克隆抗体及诊断试制盒等奠定了基础。
- 斯日古楞么宏强马学恩王升启
- 关键词：绵羊肺腺瘤病衣壳蛋白基因克隆
- 绵羊肺腺瘤病自然病例的临床病理学观察被引量：5
- 2006年
- 么宏强马学恩于立新张淑琴郑秉武
- 关键词：肺腺瘤病病理学观察自然病例绵羊自然感染病羊
- 绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜基因的定向克隆与融合表达被引量：1
- 2005年
- 根据绵羊肺腺瘤病毒(SJRV) NM株基因组全序列,设计了 1 对包含囊膜(env)基因在内的引物,并在5′端分别设计了HindⅢ和 BamHⅠ酶切位点,利用 PCR技术扩增 env基因,通过连接反应将其克隆于pET 30b表达载体上。序列分析表明,env基因全长 1 836 bp,编码 612 个氨基酸残基;构建表达重组质粒env pET 30b,转化大肠埃希氏菌 BL21,经 IPTG于 37 ℃诱导培养,SDS PAGE电泳分析表明,表达的env基因融合蛋白分子质量约为69 ku。
- 刘淑英马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因定向克隆
- 绵羊肺腺瘤病毒NM株前病毒gag基因的克隆与序列分析被引量：6
- 2005年
- 参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的全基因序列,设计合成3对引物,对JSRVNM株的gag基因分3段进行PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳分析,分别呈3条531、888和949bp的特异条带,将其分别克隆入pMD 18T载体中,进行序列测定并拼接序列,得到完整的gag基因序列。分析结果表明,与南非代表株(基因序列号NC 001494)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为89 0%,推导出的氨基酸同源性为90%。与美国代表株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较,核苷酸同源性为86 3%,氨基酸同源性为87%。
- 刘淑英马学恩李景鹏
- 关键词：GAG基因肺腺瘤病绵羊氨基酸同源性病毒
- 绵羊肺腺瘤病毒自然感染病例的病理学观察
- 2006年
- 通过对2只自然感染绵羊肺腺瘤病毒的病羊进行剖检及病理组织学观察,了解此病毒对绵羊机体的主要侵害器官及其他各器官所发生的一系列变化。试验结果表明:剖检可见肺脏膨隆,体积增大、充满胸腔;肺的表面和切面上见到大小不一、质度较实的黄白色小结节;有些病例肺胸膜的脏层与壁层发生黏连;在支气管、细支气管内可见白色泡沫状的黏液。组织学检查可见肺泡壁上皮细胞和细支气管上皮细胞增生,呈乳头状向肺泡腔内或细支气管腔内生长;邻近部位的肺泡腔内有大量的巨噬细胞增生。从观察结果中可以看出,绵羊肺腺瘤病毒主要侵害肺脏和机体的免疫器官,可为绵羊肺腺瘤病的进一步研究提供参考。
- 么宏强马学恩于立新张淑琴郑秉武
- 关键词：绵羊肺腺瘤病自然病例病理学观察
