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血脂水平与华支睾吸虫致病性的初步研究被引量：2: 2014年; 目的比较高血脂小鼠和正常血脂小鼠感染华支睾吸虫后的肝脏病理变化及炎症因子水平,以研究血脂水平对华支睾吸虫致病性的影响。方法通过向BALB/c小鼠投食高脂饲料建立高血脂小鼠模型,用相同囊蚴数感染高血脂小鼠和正常血脂小鼠,比较感染1个月后小鼠相关病理指标。通过Masson染色(Masson′s trichrome staining)判断肝胆纤维化程度,使用免疫组化和实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏α-平滑肌蛋白(α-SMA)定位情况和转录水平,用流式细胞术检测小鼠脾细胞在刀豆素(ConA)刺激48 h培养上清中细胞因子表达水平。结果与正常血脂感染组小鼠相比,高血脂感染组小鼠出现较显著的肝胆管扩张、肝实质及汇管区出现大量的胶原纤维增生、小胆管增生等病变。高血脂感染组α-SMA转录水平升高,并在肝脏组织汇管区及增生的纤维间隔内表达。高脂感染组脾细胞培养上清中白介素6(IL-6)和IL-10表达水平比正常血脂小鼠高(P<0.05),高脂感染组IFN-γ水平比高脂未感染组低(P<0.05)。结论高血脂可能使华支睾吸虫感染所致的肝脏胶原纤维增生、胆管扩张更明显,血脂水平高低还可影响华支睾吸虫感染后宿主的免疫应答。; 林金思陈桂珊孙恒昌屈红伶何蕾谢芝芝尚梅陈雪晴余新炳黄艳; 关键词：华支睾吸虫高血脂肝纤维化白介素6

肝吸虫病:严峻挑战与防治对策的思考被引量：48: 2016年; 肝吸虫病是我国目前最严重的食源性寄生虫病,流行形势严峻,科学研究严重滞后。从开展基线调查、发展诊断技术、防治策略研究与"重心前移"、研制特效药物和普及健康教育等方面提出了肝吸虫病防治对策的几点思考。; 陈庭金黄艳余新炳; 关键词：华支睾吸虫病流行病学方法

Current status and perspectives of Clonorchis sinensis and clonorchiasis: epidemiology, pathogenesis, omics, prevention and contro被引量：56: 2016年; Clonorchiasis,caused by Clonorchis sinensis(C.sinensis),is an important food-borne parasitic disease and one of the most common zoonoses.Currently,it is estimated that more than 200 million people are at risk of C.sinensis infection,and over 15 million are infected worldwide.C.sinensis infection is closely related to cholangiocarcinoma(CCA),fibrosis and other human hepatobiliary diseases;thus,clonorchiasis is a serious public health problem in endemic areas.This article reviews the current knowledge regarding the epidemiology,disease burden and treatment of clonorchiasis as well as summarizes the techniques for detecting C.sinensis infection in humans and intermediate hosts and vaccine development against clonorchiasis.Newer data regarding the pathogenesis of clonorchiasis and the genome,transcriptome and secretome of C.sinensis are collected,thus providing perspectives for future studies.These advances in research will aid the development of innovative strategies for the prevention and control of clonorchiasis.; Ze-Li TangYan HuangXin-Bing Yu; 关键词：CLONORCHIASIS PATHOGENESIS OMICS PREVENTION

华支睾吸虫糖基转移酶基因全长序列的克隆和生物信息学分析被引量：1: 2012年; 目的分析和预测华支睾吸虫囊蚴全长cDNA质粒文库中编号为cs091c06的糖基转移酶基因EST序列结构和功能特征及其编码蛋白的理化性质,预测该基因的生物学意义和应用前景。方法利用NCBI网站和ExPaSy等生物信息学在线分析工具和Vector NTI suite等软件包,分析华支睾吸虫囊蚴全长cDNA质粒文库中cs091c06的EST序列及编码蛋白的理化性质、结构与功能特征。结果 BLASTx工具分析该EST序列是糖基转移酶的同源基因,序列全长为1 402bp,其完整的编码框为37～1 011bp,编码325个氨基酸。Target P和Signal P软件预测该编码氨基酸前30个氨基酸是分泌信号肽,蛋白的理化性质较稳定。蛋白质一级结构扫描发现两个糖基转移酶的保守功能区分别位于67～178aa和69～253aa,且在该基因的N端发现明显的蛋白质糖基化位点,分别位于76～79aa和190～193aa。在该基因的氨基酸序列中,共发现8个B细胞表位和6个T细胞表位。RT-PCR结果显示,该基因在华支睾吸虫成虫阶段高表达,囊蚴和虫卵阶段低表达。结论华支睾吸虫糖基转移酶基因与多个物种同源,编码蛋白可能是华支睾吸虫重要的虫体分泌排泄抗原成分;阶段特异性表达特征提示该基因很可能参与华支睾吸虫重要虫源蛋白糖基化过程,可作为华支睾吸虫病疫苗候选分子和药物靶标。; 边萌汪肖云陈文君田艳丽吕晓丽余新炳; 关键词：华支睾吸虫糖基转移酶生物信息学克隆

华支睾吸虫NOSIP基因的克隆表达及免疫学鉴定被引量：1: 2019年; 目的对华支睾吸虫一氧化氮合酶相互作用蛋白(CsNOSIP)进行克隆和原核表达,初步了解其重组产物的免疫学功能。方法从华支睾吸虫基因文库中获得CsNOSIP的全长cDNA并克隆至原核表达质粒pET-30a(+)中,诱导表达后用亲和层析柱进行纯化,用纯化的rCsNOSIP及rCsNOSIP蛋白免疫BALB/c小鼠以获得rCsNOSIP免疫血清,采用Western blot鉴定重组蛋白CsNOSIP的表达及其反应原性;采用ELISA检测rCsNOSIP免疫小鼠血清特异性抗体亚类水平。结果CsNOSIP基因的开放阅读框(ORF)包含867bp,编码288个氨基酸,PCR、双酶切及DNA测序表明pET-30a(+)-CsNOSIP重组质粒构建成功。SDS-PAGE检测目的蛋白在大肠埃希菌BL21/DE3中获得高效表达,表达产物相对分子质量为35×103;经亲和层析法获得高纯度的重组蛋白,该蛋白可被His单抗、CsNOSIP免疫小鼠血清、感染华支睾吸虫小鼠血清及ESP免疫血清识别,重组蛋白免疫血清能识别CsESP;ELISA检测显示rCsNOSIP免疫小鼠血清特异抗体滴度为1∶25 600,以IgG1水平较高。结论CsNOSIP可在原核表达系统中呈现高效可溶性表达,且具有抗原性,是华支睾吸虫分泌排泄抗原(CsESP)之一,免疫小鼠后可获得高滴度的特异性抗体,抗体亚类以IgG1为主,为该蛋白的功能研究奠定了基础。; 边萌汪肖云许青霞余新炳; 关键词：华支睾吸虫基因克隆免疫原性

时间分辨荧光免疫分析技术在寄生虫病诊断中的应用被引量：1: 2010年; 时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)是一种新型的体外超微量分析技术,被公认为是目前灵敏度最高的分析方法之一,并以其独特的优势近些年迅速发展,已延伸至生物医学、临床医学研究的各个领域。本文就该技术的研究进展及在某些寄生虫病检测诊断中的相关应用作一简要综述。; 邓传欢吴英松徐劲; 关键词：时间分辨荧光免疫分析寄生虫病

广州管圆线虫生活史的实验研究进展被引量：3: 2011年; 广州管圆线虫是一种鼠源性寄生虫,其幼虫侵入人体后,可引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎或嗜酸性粒细胞增多性脑膜脑炎。本文综述了近年来有关广州管圆线虫生活史的实验研究进展,以加深对广州管圆线虫病的认识。; 曾炘吴忠道; 关键词：广州管圆线虫实验动物模型

华支睾吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶的表达定位及其酶活性的研究被引量：3: 2014年; 目的克隆和表达有酶活性的华支睾吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶（CsTPx）,并进行组织定位研究,为进一步研究其功能奠定基础。方法利用生物信息学方法从华支睾吸虫基因组文库中识别硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）基因,并对蛋白的结构特征和相关生物学和免疫学功能进行预测。从华支睾吸虫成虫cDNA中扩增目的基因,克隆到原核表达载体pET-30a（＋）中,进行蛋白纯化,免疫印迹鉴定、组织定位及其酶活性的检测。结果华支睾吸虫TPx基因全长2 175 bp,有一大一小的两个内含子,其编码区序列长度为636 bp,编码212个氨基酸;该蛋白第1~17位氨基酸为其信号肽序列,第51-74位氨基酸为跨膜区,属于经典的2-Cys过氧化物还原酶。重组蛋白可被感染了华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该蛋白定位于成虫的皮层、肠支、卵黄腺、虫卵和囊蚴的体壁中。酶活性检测结果表明,在一定范围内,CsTPx还原H2O2呈剂量和时间依赖性。抗体对酶活性有影响,在合适的抗体水平可以促进酶活性。结论 CsTPx可在大肠杆菌中进行功能性表达,其产物具有良好的免疫学和生物学活性。; 李婷杨梅陈金桃宋天章余新炳陈红武胡旭初; 关键词：华支睾吸虫酶活性

外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的研究被引量：3: 2012年; 目的探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。方法取感染旋毛虫的BALB/c小鼠小肠组织,分离成虫,配制成虫悬液(1 000条/ml)。48孔板中每孔加入100μl成虫悬液,再加入各组试剂,终浓度分别为:亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00mmol/L,1.00mmol/L SNP+0.15mmol/L血红蛋白(Hb)、1.00 mmol/LSNP+0.15 mmol/L硫酸亚铁(FeSO4)、1.00 mmol/L SNP+1.00 mmol/L L-半胱氨酸(L-cyst)、1.00 mmol/L SNP+0.15 mmol/LFeSO4+1.00 mmol/L L-cyst,设空白对照组和阳性对照组(1.00 mmol/L SNP+100μl肌幼虫悬液),每组设3个复孔。置37℃5%CO2培养箱中孵育,第4天收集各孔成虫,镜检并作番红染色,计算各组虫体死亡率。结果 SNP 0.02 mmol/L和0.05 mmol/L组旋毛虫死亡率分别为(1.4±1.2)%和(3.2±1.0)%,这两组与空白对照组的死亡率[(1.9±0.2)%]之间的差异无统计学意义(P>0.05)。SNP 0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L组虫体死亡率分别为(9.9±1.8)%、(37.7±2.5)%、(50.1±3.5)%和(80.8±1.1)%,与空白对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。SNP浓度在0.02～1.00 mmol/L范围内与旋毛虫成虫死亡率呈线性正相关(P<0.05)。在1.00 mmol/L SNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与仅SNP1.00 mmol/L实验组比较,成虫死亡率均有所下降,分别为(56.5±3.7)%、(72.7±5.6)%、(74.8±2.4)%和(69.8±2.3)%。SNP1.00 mmol/L组与SNP+Hb、SNP+FeSO4+L-cyst组旋毛虫成虫死亡率间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性NO对体外培养的旋毛虫成虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst+FeSO4可抑制该杀伤作用。; 王小莉王媛媛方强薛玉芹沈继龙; 关键词：外源性NO 旋毛虫成虫

华支睾吸虫LAP2基因的生物信息学分析及克隆表达、组织定位: 2011年; 目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征。针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位。结果华支睾吸虫LAP2基因全长为1761bp,其编码序列长度为1662bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59696.5Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%。该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜。结论华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一。; 邓传欢余新炳王乐旬黄灿黄艳李文芳李然徐劲; 关键词：华支睾吸虫生物信息学克隆

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国家重点基础研究发展计划(2010CB530000)

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