教育部科学技术研究重点项目(106101)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 神经营养肽NP14基因的合成及其在大肠杆菌中的高表达
- 2007年
- 目的:根据鞘脂激活蛋白原神经营养序列设计并构建短肽(neurotrophic peptide,NP)多拷贝串连表达载体,利用基因工程的方法制备短肽NP。方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子设计并合成NP的碱基片段,通过PCR方法合成串联双拷贝2NP片段,经平端连接克隆到载体pUC18中。利用EcoT14I酶切pUC18-2NP后可产生非镜相对称黏性末端,与表达载体pETEcoT一次连接反应,得到一系列含有不同片段拷贝数的表达载体pETE-coT-multiNP,经PCR-array方法进行阳性克隆筛选、测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达。结果:经IPTG诱导后,在BL21(DE3)菌中高效表达了2、4、8拷贝融合蛋白,并在每个单拷贝之间加入了溴化氢的切割位点,使融合蛋白切割后能够得到单拷贝的短肽。结论:短肽NP在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究其生物活性奠定了基础。
- 张之勇苑辉卿姜安丽蔡捷任凯胡晓燕孔峰张建业
- 关键词：融合蛋白质类原核表达
- 鞘脂激活肽真核表达载体的构建及其对前列腺癌细胞增殖的影响
- 2007年
- 目的:构建含有鞘脂激活蛋白原神经营养序列短肽-鞘脂激活肽NP(neurotrophic peptide,NP)的真核表达载体以及NP与TAT的融合蛋白真核表达载体(TAT-NP),探讨NP在前列腺癌细胞中的作用。方法:根据NP和TAT的氨基酸序列合成其DNA序列,利用基因克隆技术构建含有TAT和NP读码框架的真核表达载体pcDNA-TAT-NP和pcDNA-NP。在前列腺癌PC3、LNCaP细胞中转染上述载体后通过RT-PCR、MTT和流式细胞术,分别检测TAT-NP、NP的mRNA的表达,NP对前列腺癌细胞的增殖情况以及对细胞周期的影响。结果:经测序鉴定,成功构建pcDNA-TAT-NP和pcDNA-NP真核表达载体。RT-PCR结果显示,TAT-NP、NP能够在前列腺癌细胞中表达。MTT结果表明,TAT-NP、NP均对前列腺癌细胞增殖具有促进作用。流式细胞结果显示,TAT-NP、NP具有促进细胞进入S和G2/M期的作用。结论:外源表达的鞘脂激活肽NP能够促进前列腺癌细胞的增殖,并能影响细胞周期各时相的变化。
- 任凯苑辉卿孔峰蔡捷王小玲胡晓燕徐霞张建业
- 关键词：流式细胞术前列腺肿瘤细胞株
