江苏省自然科学基金(BK95092309)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：刘景晶李泰明王朝晖丁敏胡卓逸更多>>
- 相关机构：中国药科大学广东药学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 人甲状旁腺素N端34肽基因的合成、克隆及融合表达被引量：5
- 1999年
- 选用大肠杆菌偏爱的密码子,用计算机辅助设计、合成长度分别为59 、59 及60 碱基的三段寡核苷酸。以中段寡核苷酸为模板,两端寡核苷酸为引物,经PCR 合成完整的hPTH(134) 基因,并克隆到pUC18 载体中。对克隆基因进行序列分析,结果与设计的完全一致。将该基因与表达载体pKA 连接构建表达质粒pKAT,转化大肠杆菌JM105 细胞,SDSPAGE 表明hPTH(134) 融合蛋白获得了表达,并且酸水解后融合蛋白被裂解为大小两个片段。
- 王朝晖刘景晶丁敏
- 关键词：聚合酶链式反应基因克隆
- 两种生长激素类似肽对大鼠和人流产胎儿垂体激素分泌的影响研究
- 2005年
- 目的研究ProProhGHRH(144)OH和ProProhGHRH(144)GlyGlyCys两种神经肽对大鼠垂体或人流产胎儿垂体激素分泌的影响。方法将神经肽加入KrebsRinger缓冲液内,在不同保温时间内测定大鼠垂体GH或人流产胎儿垂体的hGH、hTSH、hFSH、hLH和hPRL在体外的释放值。GH浓度用人GH放射免疫多抗试剂盒测定,其他垂体激素浓度用顺磁性粒子化学发光免疫测试试剂盒确定。结果鼠垂体活性结果显示,ProProhGHRH(144)OH组(0.1～10μg/mL)和ProProhGHRH(140)GlyGlyCys组(0.01～1μg/mL)的GH刺激值,与刺激前的空白对照值相比有明显的提高,而且随肽浓度的增加,GH的释放量明显提高。在相同浓度下,ProProhGHRH(144)GlyGlyCys肽释放的GH值远大于ProProhGHRH(144)OH肽释放的GH值,即使ProProhGHRH(144)GlyGlyCys的剂量0.01μg/mL,仍有较好的活性。流产胎儿垂体的体外测试结果显示,在5μg/mL剂量下,3种多肽都产生很好的活性,ProProhGHRH(144)GlyGlyCys的平均活性是ProProhGHRH(144)OH的1.71倍,但3种活性多肽间差异没有显著性(P>0.05)。对hTSH、hFSH、hLH和hPRL垂体激素的测试结果显示,这两种神经肽对它们没有刺激作用。结论ProProhGHRH(144)GlyGlyCys和ProProhGHRH(144)OH有很好的GH释放活性和功能特异性。测试结果表明,GHRH的C端改构可调节垂体释放生长激素的活性。
- 唐松山张娟辉刘景晶
- 关键词：神经肽垂体垂体激素
- 重组人胰高血糖素样肽-1类似物的制备及活性分析
- 2011年
- 通过重叠PCR的方法获得重组人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物PP-h[Gly8]GLP-1的目的基因片段,将该基因与融合表达载体pED连接,并在融合伴侣的N末端插入6×His标签,转入E.coli BL21(DE3),构建出重组GLP-1类似物融合表达菌。PP-h[Gly8]GLP-1通过Ni离子亲和色谱和酸水解等步骤分离纯化得到,其纯度大于90%,用电喷雾质谱法测定其相对分子质量与理论分析结果一致。ICR小鼠经口给予耐血糖及血浆胰岛素测定的结果表明,PP-h[Gly8]GLP-1具有明显的降血糖活性和促胰岛分泌作用(P<0.01),为开发潜在的治疗糖尿病药物提供了理论基础。
- 李泰明马艳红徐舒刘涛谷春娇徐辰刘景晶
- 关键词：分离纯化生物活性2型糖尿病
- N端延伸的人肠生长激素类似物基因的合成、克隆及融合表达被引量：3
- 2005年
- 目的:合成、克隆及融合表达N端延伸2个Pro,并由Gly取代N端第2个氨基酸Ala的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,初步测定其促肠生长的生物学活性。方法:合成长度分别为53,54及53个碱基的三段寡核苷酸,以中段寡核苷酸为模板,两端寡核苷酸为引物,经PCR合成PP-h[Gly2]GLP-2基因,克隆于pUC18载体。经测序正确后,将该基因与融合表达载体pED连接构建融合表达质粒pEDGLP-2,转化E.coliBL21(DE3),进行诱导表达,用SDS-PAGE分析。融合蛋白经分离纯化和酸切割后,分离获得PP-h[Gly2]GLP-2,用电喷雾质谱法测定其相对分子质量,并对雄性SD大鼠皮下给药14 d,初步测定其促肠生长活性。结果:诱导后融合蛋白表达量占菌体可溶性总蛋白的40%以上。电喷雾质谱法测得:经酸切割获得的PP-h[Gly2]GLP-2的相对分子质量为3 947.97 Da,与预测值3 947.38 Da基本一致。初步动物实验结果显示,0.5 mg/(kg.d)剂量组小肠增重百分比为41.65%,与PBS组相比具有显著差异。结论:制备获得的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,与设计的相对分子质量一致,有明显的促肠生长活性。
- 李泰明胡卓逸刘景晶马小驹周慧闵伟伟
