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p38 MAPK信号通路参与受体介导的细胞内吞的调控被引量：13: 2007年; 目的:观察p38MAPK信号转导通路在受体介导的细胞内吞中的作用。方法:利用Alexa594标记的转铁蛋白作为受体介导的内吞作用的观察指标,来研究p38特异性抑制剂SB203580或ERK通路特异性抑制剂PD98059预处理以及p38基因敲除对该过程的影响。结果:在受体介导的细胞内吞中,p38被磷酸化激活。SB203580的预处理或p38基因的敲除都能阻断受体介导的细胞内吞,而PD98059的预处理对该过程没有影响。结论:p38MAPK信号转导通路参与了受体介导的细胞内吞的调控。; 龚小卫魏洁李煜生程蔚蔚邓鹏姜勇; 关键词：P38 MAPK 信号转导

信号分子复合物在细胞信号转导中的作用及其研究技术被引量：1: 2005年; 细胞的代谢、迁移、增生、分化等活动,都是在各种信号分子(signalingmolecules)的控制下进行的。各种细胞过程并非单个信号转导分子的直接作用就能完成的,而是以多个相关分子形成复合物的形式参与调控。例如多种转录因子在调节基因表达时,通常都是相互作用形成复合物而发挥功能的。细胞的生命过程并不仅是许多独立反应的总和,而是由信号分子复合物执行并调控的。通过生物大分子之间的相互作用并形成不同的复合物,从而对细胞信号过程进行精密调控。本文对信号分子复合物的形式、功能域、调节机制以及研究的主要技术手段进行综述,并预测信号分子复合物的研究前景。; 赵雷姜勇; 关键词：信号转导

信号肽-FRET荧光蛋白载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达被引量：1: 2003年; 目的构建带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白(pECFP-C1-SP)和增强型黄色荧光蛋白(pEYFP-C1-SP)的质粒载体,为使用荧光共振能量转移(FRET)技术研究LPS在细胞膜上的受体识别机制提供依据。方法采用点突变技术构建了带TLR4信号肽的载体,用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞,观察带信号肽载体和融合蛋白载体在细胞内的表达。结果DNA测序证明所构建的带TLR4信号肽的载体正确;酶切和DNA测序表明融合蛋白载体的构建正确,TLR4信号肽可以使蛋白主要表达在膜上。结论所构建的带信号肽的荧光蛋白载体是正确的,pECFP-C1-SP和pEYFP-C1-SP能够表达在细胞膜上,可有效地应用于膜蛋白相互作用的研究。; 孙学刚宋革刘靖华安海燕李红乐邢飞跃张丽华姜勇; 关键词：荧光共振能量转移信号肽细胞膜

细胞酶联免疫吸附试验在检测噬菌体阳性克隆中的应用和改进被引量：4: 2008年; 目的:通过对影响细胞ELISA的关键条件和步骤进行优化和改进,以降低实验假阳性率,提高敏感性。方法:THP-1细胞接种96孔培养板,分别用脂多糖(LPS)刺激或不刺激作为处理组和对照组,将通过噬菌体展示技术筛选获得的噬菌体分别与处理组及对照组细胞作用,洗脱未结合的噬菌体,加入HRP标记的抗M13单克隆抗体,分别用酶标仪和Kodak IS 2000R数码成像系统检测细胞与短肽的结合情况。并针对细胞的特性,在细胞的准备、固定、孵育和洗涤等关键步骤进行改进。结果:酶标仪和数码成像系统检测分别得到6个和8个可与细胞高亲和力结合的阳性噬菌体克隆,经过免疫荧光实验证实数码成像系统检测得到的8个阳性克隆均与细胞结合,并且数码成像系统多次测量值具有很好的重复性。结论:本方法为蛋白质与完整细胞的亲和活性研究提供了有效的实验方案,具有较好的应用前景。; 丁宁刘承武李志杰刘靖华邓鹏姜勇; 关键词：细胞酶联免疫吸附测定噬菌体展示

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂研究进展被引量：18: 2009年; p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路是细胞内应激反应信号通路,与炎症反应密切相关。炎症反应失控是很多疾病产生的重要原因之一,传统抗炎药物的严重副作用使得寻找强效、安全的抗炎药物极为迫切。通过抑制剂调节信号通路的炎症药物研发成为目前发展的趋势,而p38MAPK的中心地位使其成为首选靶点。p38MAPK抑制剂和p38MAPK的研究进展相辅相成,发展迅速。已报道的100多种不同化学结构的p38MAPK特异性抑制剂中已有20多种进入临床试验阶段,但至今尚没有一种化合物被批准应用于临床治疗。我们讨论了p38MAPK抑制剂的研究现状和研究策略。; 王国军刘亚伟李玉花姜勇; 关键词：炎症

用FRET技术研究TLR4和MD-2的相互作用被引量：9: 2006年; 目的利用荧光共振能量转移(FRET)技术在活体细胞研究人Toll样受体(TLR)4与髓样细胞分化蛋白2(MD-2)的相互作用。方法用PCR方法扩增TLR4编码序列和MD-2编码序列(不包括信号肽序列)并分别亚克隆入带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白和增强型黄色荧光蛋白表达载体(pECFP-C1-SP,pEYFP-C1-SP)中,重组质粒经酶切、序列鉴定分析后分别或共同转染HEK293细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白表达和分布情况,并用常规的方法和受体光漂白的方法对共表达青色荧光蛋白(CFP)-TLR4和黄色荧光蛋白(YFP)-MD-2的细胞进行FRET分析。结果重组质粒在HEK293细胞中得到表达,仅转染pECFP/TLR4或pEYFP/MD-2的细胞可见青色或黄色荧光主要分布在胞质内,以核周较多;而共转染pECFP/TLR4和pEYFP/MD-2的细胞可同时检测到青色和黄色荧光,主要分布在细胞膜,同时胞质也有少量表达。无论是用常规的方法还是受体光漂白的方法,对共表达CFP-TLR4和YFP-MD-2的细胞进行FRET分析结果表明有FRET现象的发生,提示TLR4和MD-2有相互作用并形成复合物。结论本研究为TLR4和MD-2在活体细胞中的相互作用提供了直接的证据。; 刘亚伟刘靖华唐靖赵清李建军赵明哲李志杰王国军钟田雨邓鹏姜勇; 关键词：TOLL样受体4 荧光共振能量转移

糖类微生物产物的天然识别被引量：1: 2007年; 抗感染免疫是由天然（先天）免疫（innate immunity）和获得性（adapted immunity）免疫（适应性）共同介导的。病原微生物侵入机体后，天然免疫系统作为宿主的第一道防御线，对微生物进行识别和清除。天然免疫模式从低等生物到人类都非常保守，主要通过模式识别受体（PRR）对病原微生物表面保守、共有的基团，即病原体相关分子模式（PAMPs）进行天然识别。; 龚小卫姜勇; 关键词：糖类微生物产物天然免疫

一种增强MLPA检测SNP位点的特异性方法: 2012年; 目的:在传统多重连接探针扩增(MLPA)技术基础上建立一种更为特异的检测单核苷酸多态性(SNP)位点的方法。方法:设计针对Kras基因216 G-C SNP位点的MLPA探针,使用不同方法优化MLPA实验,观察其对SNP位点检测时的影响。结果:直接用锁核酸(LNA)修饰MLPA探针的SNP位点或添加阻滞探针均可显著提高SNP检测时的特异性,3个LNA修饰的阻滞探针能最好地保证检测的灵敏度和特异性。结论:成功地建立了一种增强MLPA检测SNP位点的特异性方法。; 胡佳莉邓鹏姜勇; 关键词：核酸探针

一种用于穿透多肽筛选的随机文库的构建及筛选被引量：2: 2006年; 以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)为示踪物,在pET-14b载体上构建编码12个氨基酸的随机多肽表达文库.建立一种简便、经济、有效的文库筛选方法,从所构建的文库中筛选出细胞穿透多肽(cell-penetratingpeptide,CPP).采用点突变技术,首先在pET-14b载体多克隆位点NdeⅠ和XhoⅠ之间加入4个限制性内切酶位点,随后在BamHⅠ位点后加入三联终止密码子,接着再利用亚克隆的方法在KpnⅠ和XhoⅠ之间插入EGFP,形成一个新的用于原核表达示踪蛋白的载体pET-14bMCStop/EGFP.最后再利用点突变技术在上述构建的示踪载体的多克隆位点XhoⅠ和BamHⅠ之间插入36个随机碱基序列.以His-Tat-EGFP作为工具建立有效的筛选方法,利用这种方法对文库进行筛选.酶切和测序表明,示踪载体的构建是正确的,且在大肠杆菌中可有效地表达出His标记的EGFP.在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库至少包含了105个独立克隆,其中90%以上的克隆插入的随机片段都是36个碱基.建立的筛选方法是可行的,并用此方法进行了初步的筛选.; 刘瑜刘亚伟李海玉刘靖华邓鹏姜勇; 关键词：跨膜转运内化

髓样相关蛋白14真核表达载体的构建及其细胞内定位研究: 2008年; 目的:构建小鼠髓样相关蛋白14(MRP14)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增得到MRP14编码序列。然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后转染NIH3T3细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果:重组质粒经聚合酶链反应(PCR)、酶切和测序鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论:成功构建带HA标签的MRP14真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为下一步深入研究MRP14作用细胞的信号通路提供了一个重要工具。; 刘铮徐佳伍丽琼王娟邓鹏姜勇; 关键词：血凝素细胞内定位

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国家重点基础研究发展计划(2002CB513005)

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