国家自然科学基金(31171199)
- 作品数：10 被引量：58H指数：3
- 相关作者：肖君华李凯周宇荀黄俊波贝学文更多>>
- 相关机构：东华大学华南农业大学中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金广东省大学生创新实验项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- qPCR array检测高糖对胆固醇合成基因表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:高血糖易引起胆固醇在体内积聚,增加糖尿病合并动脉粥样硬化性心血管疾病的患病风险。本文通过建立稳定的实时定量PCR芯片(Real-time quantitative polymerasechain reaction array,qPCR array)检测方案,研究高糖对小鼠肝癌细胞Hepa1-6胆固醇合成基因表达的影响,探讨胆固醇合成基因在糖尿病大血管并发症发展中的作用机制。方法:以不同浓度葡萄糖(5、15、30mmo/L)和不同时间(0、6、12、18、24 h),刺激肝癌细胞Hepa1-6,利用qPCR array检测其胆固醇合成基因的表达差异。结果:与5mmol/L相比,高糖组(15、30 mmo/L)处理细胞18 h后,胆固醇合成基因CYP51、EBP、NSDHL、SQLE、FDFT1和PMVK的表达上调(P<0.05),呈现剂量依赖性。与0 h相比,15 mmol/L高糖处理细胞12 h,CYP51、EBP和SQLE mRNA表达量上调(P<0.01)。至24 h,CYP51、EBP降至0 h水平,而SQLE的表达量继续增加;NSDHL在12 h表达无差异,至18 h表达量发生上调(P<0.05)。结论:该qPCR array检测方案能特异性检测胆固醇合成基因的表达量。高糖能够促进胆固醇合成基因的表达,使细胞内胆固醇积聚,这可能是糖尿病患者容易发生动脉粥样硬化的原因。这提示我们将胆固醇合成基因作为药物靶点可能延缓糖尿病动脉粥样硬化进展。
- 朱长保徐福意晁天柱薛慧慧肖君华李凯
- 关键词：高糖胆固醇合成
- 野生小鼠来源1号染色体替换系小鼠的生长表型与血液生化检测
- 2015年
- 目的分析野生小鼠来源1号染色体替换系小鼠群体的生长表型与血液生化指标,探讨替换系群体的QTL定位潜力。方法以染色体替换系近交后代小鼠为研究对象,测定其体重、体长、尾长、血液生化、内脏器官重量等表型数据,统计其与C57BL/6差异显著性。结果发现替换系小鼠在多个指标上与C57BL/6具差异有显著性。不同发育时期的外部表型上与C57BL/6相比,体重具显著差异的是B6-Chr1KM等6个品系,体长具显著差异的是B6-Chr1K M等5个品系,尾长具显著差异的是B6-Chr1K M等9个品系;部分品系在肝、脾、肾脏和脑部重量上存在与C57BL/6的显著差异;生化指标上,丙氨酸氨基转移酶B6-Chr1CM雌鼠显著偏高,碱性磷酸酶B6-Chr1HZ雌鼠显著偏高、B6-Chr1KM雄鼠显著偏低,总胆红素B6-Chr1CM雄鼠、B6-Chr1SMX雄鼠和B6-Chr1HZ雄鼠显著偏高,甘油三酯B6-Chr1SMX雄鼠显著偏高,总胆固醇B6-Chr1TW雄鼠显著偏高。结论培育的野生小鼠来源的1号染色体替换系群体在部分表型上与C57BL/6差异有显著性,具备作为QTL定位的遗传资源潜力。
- 高遄徐伟徐福意张耀奇赵莹赵丽亚周宇荀李凯肖君华
- 关键词：近交系小鼠野生小鼠血液生化
- 特异性逆转录microRNA-505的高效茎环引物的设计
- 2015年
- 目的:构建一个高效且特异性的逆转录茎环引物,以准确定量检测小鼠的mi RNA-505基因,同时探讨茎环引物的结构对逆转录效率的影响。方法:规律性地改变通用茎环引物的茎部和环部的碱基结构,再进行不同的组合,利用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术,探寻效率最高的茎环引物。结果:当固定茎部结构为14对碱基,规律性改变环部碱基个数(15,18,21),经RT-PCR检测的CT值无差异,均为28.5;当固定环部结构为21个碱基,CT值随茎部碱基对(8,11,14)规律性地延长而逐渐增大;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时CT值最小,为26.7。结论:环部结构对茎环引物的效率无贡献;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时,茎环引物的效率和特异性是最佳的,适用于准确检测小家鼠的mi RNA-505基因。
- 熊黎仝莉王茂春周宇荀李凯肖君华
- 关键词：MI逆转录
- 基于PCR-LDR平台的近交系小鼠遗传质量快速检测方法被引量：11
- 2012年
- 目的建立基于PCR-LDR平台的近交系小鼠SNP快速分型方法,用于检测实验小鼠的遗传质量与品系纯度。方法利用可移植性极高的PCR-LDR技术,以常见近交系小鼠为研究对象,选取了21条染色体上的45个SNP位点,分别设计引物和探针,经过筛选和验证,建立了多重PCR-LDR(polymerase chain reaction and ligase detection reaction,PCR-LDR)分型方案。结果四组多重PCR-LDR可实现45个SNP位点的基因分型,其中43个、44个与45个SNP在样本中的检出率分别为100%、90.9%与36.4%。所有样本经分型确定为纯合体,并得到了常见近交系小鼠SNP位点信息。结论实现了常见近交系小鼠快速、高通量的基因分型,可用于遗传质量检测和品系鉴定。
- 谢雯鲍世民谢建云李凯周宇荀肖君华
- 关键词：近交系小鼠单核苷酸多态性位点聚合酶链式反应
- 菜粉蝶osiris基因家族鉴定与发育动态被引量：1
- 2017年
- osiris基因家族是昆虫特异性基因,迄今尚未在昆虫纲以外的物种中发现同源基因。本研究利用菜粉蝶转录组数据,鉴定了菜粉蝶16个osiris基因家族成员,分属11个亚家族。通过与菜粉蝶基因组比对,发现菜粉蝶osiris基因均为断裂基因,外显子数量为3-15个;通过结构域分析,发现菜粉蝶Osiris完整编码蛋白含有信号肽和一个未知功能结构域DUF1676,且多数Osiris蛋白含跨膜结构域。系统发育分析表明,osiris基因家族成员与其他昆虫种类相应成员更似直系同源,而非种内基因扩张,再次验证了osiris基因是在昆虫物种分化之前就已形成的多基因家族。发育转录组基因表达分析表明,osiris家族不同成员表达量在不同发育阶段趋势几乎完全一致,多在菜粉蝶1龄幼虫和5龄幼虫高表达,卵期、蛹期与成虫期低表达,预示着osiris基因家族不同成员转录调控机制的相似性与发育的相关性。
- 赵磊夏昊钱强徐圆李凯
- 关键词：菜粉蝶系统进化发育
- 改进茎环引物RT-PCR法实时定量检测microRNA被引量：3
- 2014年
- 目的:为检测不同组织中microRNA(miRNA)的表达量,本研究建立了一种改进的qRT-PCR(Quantitative reverse transcription PCR)技术。方法:采用具有高特异性的茎环引物逆转录,结合SYBR Green实时定量PCR技术,建立了以延伸茎环引物RT-PCR为基础的实时定量检测microRNA的方法。结果:本研究建立的microRNA检测方法,特异性好,灵敏度高,线性范围宽。熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性。对标准品的检测跨越了7个数量级的浓度范围,最低拷贝数为103,效率高达98%。结论:利用该技术检测了120个组织样本,说明该方法可快速、准确、高效的获取不同组织中miRNA的表达量,为进一步探讨miRNA对性发育的影响提供了实验依据。
- 薛慧慧马骁骁朱长保晁天柱肖君华周宇荀
- 关键词：MIRNART-PCR
- 贝叶斯一致性分析法在全基因组系统发生树分析上的应用
- 2015年
- 构建系统发生树时,其拓扑结构会在不同的基因组区域产生不一致性。对此问题,贝叶斯一致性分析法(BCA)可在全基因组规模上进行系统发生树分析,并进而对不一致性信息进行量化统计。采用此方法对由C3H/Hu小鼠(Mus musculus)和129Sv小鼠回交多代产生的129S1小鼠进行系统发生树分析,输入相应的一组序列文件,用若干生物信息学软件(如VCFtools,Repeat Masker,PAUP*4.0,Mr Model Test,Mr Bayes等)对其进行屏蔽重复序列、序列比对等处理,辅以Perl语言脚本,最终得到全基因组范围不同区段系统发生树不一致信息。在小鼠10号染色体的所有99个基因座中,支持129S1和129Sv品系小鼠为姐妹关系的拓扑结构占了84.7%(后验概率最高),这证明了C3H/Hu小鼠对129S1小鼠基因组的贡献程度较小。结果表明,贝叶斯一致性分析法有助于基因组不同区段进化历史的研究。
- 章祎胤徐福意戚礼兴李凯周宇荀肖君华
- 关键词：系统发生树
- 小鼠Agouti基因变异及生物信息学分析被引量：2
- 2014年
- 目的分析候选基因Agouti的多态性,揭示染色体工程小鼠毛色差异的分子机制。方法首先,用测色仪检测小鼠的毛色差异。其次,利用DNA芯片进行全基因组扫描确定候选基因Agouti。最后,运用生物信息学软件分析Agouti基因cDNA序列和氨基酸序列的多态性,预测突变对蛋白结构和功能产生的影响。结果发现Agouti基因cDNA序列上存在5个SNPs,使Agouti信号蛋白产生了3个错义突变。生物信息学分析发现,其中一个错义突变使该蛋白丢失了一个β折叠,并且其三级结构发生改变,最终导致与受体结合的能力相较于野生型有所下降。结论在毛色基因Agouti的编码区发现了一个新的错义突变,该突变使Agouti信号蛋白与受体结合能力下降,最终导致小鼠的毛色由浅灰色变为深灰色。
- 何晓丹赵莹赵丽亚肖君华周宇荀李凯
- 关键词：单核苷酸多态性单倍型DNA芯片生物信息学
- 遮荫和环剥对荔枝枝梢生长和光合生理的影响被引量：33
- 2013年
- 以 12 年生‘黑叶’荔枝(Litchi chinensis Sonn.‘Heiye’)为研究材料,进行遮荫、环剥及遮荫 + 环剥处理,观测这些处理对新梢生长,以及叶片净光合速率、叶片光系统Ⅱ(PSⅡ)最大光量子效率(Fv/Fm)和淀粉含量的影响。结果表明:遮荫处理和环剥处理均能显著抑制枝梢生长,降低叶片的净光合速率,但两种处理抑制光合作用的机制各异。其中,环剥处理导致叶绿素含量降低,产生永久性光抑制,显示光系统Ⅱ(PSⅡ)受到破坏,因此,环剥处理导致光合作用的降低与光反应系统的破坏有关;遮荫下叶片最大光化学效率 Fv/Fm维持正常,淀粉含量降低,但即使在相同的人工光源下,光合作用速率同样低于对照,可能主要与暗反应系统活性减弱有关;而遮荫可显著缓解环剥对光反应系统的破坏效应。
- 莫伟平周琳耀张静逸黄俊波贝学文付欣雨王惠聪黄旭明
- 关键词：荔枝环剥遮荫光合作用枝梢生长
- 遮阴对荔枝光合特征及矿质营养积累的影响被引量：13
- 2014年
- 【目的】揭示荔枝对低光照的响应和适应生理机制。【方法】以5 a生‘桂味’荔枝盆栽苗为材料,观测遮阴对新梢生长、叶片形态、光合作用和矿物质含量的影响。【结果】90%遮光率的全株遮阴处理显著抑制新梢伸长,导致新叶和老叶比重显著降低,成熟叶片净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)明显下降,而叶肉二氧化碳浓度(Ci)不降反略升,同时,使成熟叶片叶绿素指数(SPAD)及Fv/Fm显著增加。遮阴处理还使新、老叶片的矿质营养含量普遍提高,硝态氮:铵态氮的比值显著提高。持续遮阴导致叶片由老叶向新叶逐渐枯萎,遮阴45 d导致植株死亡。【结论】遮阴可引起荔枝叶片形态适应性变化和光能利用效率提高,其光合作用速率降低与气孔关闭及暗反应弱化等非气孔因素密切相关;遮阴导致矿质营养大量动员到叶片,但抑制硝酸还原;荔枝为不耐阴植物,长期遮阴可导致植株衰退死亡。
- 周琳耀莫伟平张静逸黄俊波贝学文付欣雨王惠聪黄旭明
- 关键词：荔枝遮阴矿质营养暗适应
