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南京市医学科技发展项目(YKK08090)
作品数:
2
被引量:8
H指数:1
相关作者:
陈鑫
邱志兵
许欢
段超
肖立琼
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相关机构:
南京医科大学
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许欢
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靶向STAT3的慢病毒表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞增殖凋亡的影响
被引量:7
2011年
目的构建大鼠STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体,并观察其对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法针对STATS基因的不同部位设计4对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到慢病毒载体PLKO-1中,构建靶向STA33基因的慢病毒载体PLKO.1-STA33-shRNA,检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞,用噻唑蓝法和流式细胞仪检测沉默STAT3基因后对血管平滑肌细胞增殖和凋亡能力的影响。结果靶向STA33慢病毒表达载体构建成功。转染PLKO.1一STA33一shRNA后,STA33蛋白表达明显下降,其中以PLKO.1一STA33一S1最为明显,达到90%以上;转染PLKO.1-STA33-S1的细胞增殖能力(A值=0.25±0.05)明显低于未转染组(A值=0.62±0.12)和阴性对照组细胞(A值=0.59±0.11)(P〈0.05);而早期细胞凋亡率(26.9±2.8)%和晚期细胞凋亡率(9.5±1.6)%均明显高于未转染组和阴性对照组(P〈0.01)。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向STAT3慢病毒表达载体PLKO.1-STAT3-S1,该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖,并促进细胞凋亡。
邱志兵
陈鑫
段超
许欢
关键词:
STAT3
血管再狭窄
慢病毒
靶向RNA干扰骨桥蛋白基因的慢病毒载体对血管平滑肌细胞增殖凋亡的影响
被引量:1
2012年
目的构建大鼠骨桥蛋白(OPN)基因的shRNA慢病毒表达载体,并观察其对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法针对OPN基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到慢病毒载体PLKO-1中,构建靶向OPN基因的慢病毒载体PLKO-1-OPN-shRNA,检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT.PCR)检测VSMCsOPNmRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测VSMCOPN蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测沉默OPN基因后对VSMC增殖和凋亡能力的影响。结果靶向OPN慢病毒表达载体构建成功。重组慢病毒载体PLKO-1-OPN—shRNA转染后可显著抑制VSMCs的OPNmRNA及蛋白的表达水平,OPN蛋白表达明显下降,其中以PLKO-1-OPN2-shRNA最为明显,达到90%以上;转染PLKO-1-OPN2-shRNA后72h的细胞增殖能力[吸光度(A)值=0.365±0.011]明显低于未处理组(A值=0.941±0.028)和阴性对照组细胞(A值:0.941±0.040,P〈0.05);而早期细胞凋亡率(20.44±2.69)%和晚期细胞凋亡率(16.79±1.01)%均明显高于未转染组和阴性对照组(P〈0.01)。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向OPN慢病毒表达载体PLKO-1-OPN2-shRNA,该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖,并促进细胞凋亡。
邱志兵
陈鑫
薛昊
许欢
徐明
蒋英硕
汪黎明
肖立琼
关键词:
骨桥蛋白
血管再狭窄
RNA干扰
慢病毒
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