国家自然科学基金(30700936)
- 作品数：14 被引量：27H指数：3
- 相关作者：张延平张晓强孙玉蕊李丽娜刘金伟更多>>
- 相关机构：解放军第309医院中国人民解放军总医院河南省医学情报研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 耳蜗内毛细胞带状突触与感音神经性聋相关研究进展被引量：1
- 2013年
- 耳蜗内毛细胞传入神经突触是声音信息传递到中枢神经系统的第一个传入性突触结构，因其空间分布呈带状，故常被称为“带状突触”。这些带状突触是声音信号传导和释放的重要节点，在听觉形成和听力损伤过程中起着不可替代的作用。但是由于耳蜗体积小，带状突触所在的位置深、数量少，长期以来，关于内毛细胞带状突触结构及功能的研究进展缓慢。
- 李晓瑞蒋兴旺张延平
- 关键词：感音神经性聋中枢神经系统突触结构信息传递神经突触
- 中国人常见GJB2基因突变表达载体的构建及鉴定被引量：6
- 2009年
- 目的:构建中国人常见GJB2基因突变235de1C、299-300delAT和176de116bp与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白表达载体,寻找体外研究GJB2基因缺失突变致聋机制的有效途径。方法:用体外定点突变法构建235de1C、299-300delAT和176de116bp突变全序列与EGFP表达载体,以此为模板PCR扩增突变有效表达序列,将PCR产物连接到pMD19-T载体中,EcoRI/BamHI双酶切克隆载体,测序鉴定序列正确性后,将酶切产物插入pEGFP-N1载体中,脂质体转染HEK293细胞,荧光显微镜观察表达的融合蛋白。结果:GJB2基因突变235de1C、299-300delAT和176de116bp在HEK293细胞中高效表达,表达主要位于细胞质中。结论:成功构建了中国人常见GJB2基因突变235de1C、299-300delAT和176de116bp与EGFP的融合蛋白表达载体,为进一步研究其致聋机制奠定了基础。
- 张延平张元丁李丽娜马磊孙玉蕊张宗霖刘金伟邓惠严祝威
- 关键词：突变绿色荧光蛋白
- GJB2基因条件敲除小鼠的繁殖、基因型鉴定及听力检测被引量：3
- 2013年
- 目的探讨GJB2基因条件敲除(conditional connexin 26knock out,cCx26KO)小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定方法,为进一步研究GJB2基因突变导致非综合征型聋的机制奠定基础。方法将引进的两对转基因小鼠Cx26loxp/loxp和Pax2-Cre/+进行交配饲养与繁殖,选取子一代雌性Cx26loxp/-_Pax2-Cre/+小鼠与雄性小鼠Cx26loxp/loxp合笼交配,即获得cCx26KO小鼠。提取鼠尾组织基因组DNA,PCR方法鉴定动物基因型。采用c-ABR检测成年cCx26KO小鼠和野生型小鼠的听力,进一步验证PCR方法的正确性。结果 cCx26KO小鼠繁殖成功后,采用PCR方法鉴定分析,成功获得Cx26loxp/loxp_Pax2Cre/+、Cx26loxp/-_Pax2-Cre/+、Cx26loxp/loxp、Cx26loxp/-4种基因型小鼠,其繁殖结果符合孟德尔遗传定律。与野生型小鼠相比,cCx26KO小鼠c-ABR反应阈显著升高,约达95dB SPL。结论 PCR方法可准确鉴定子鼠的基因型,雌性Cx26loxp/-_Pax2-Cre/+小鼠与雄性Cx26loxp/loxp小鼠交配是获得cCx26KO实验小鼠的有效途径。
- 万亚蕊张延平张晓强杨仕明
- 关键词：GJB2基因野生型基因型鉴定感音神经性聋
- GRP78/Bip在GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的研究GRP78/Bip在GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗中的表达,探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)与非综合征型聋的相关性。方法敲基因小鼠(6只)Cx26loxp/loxp;Pax2 Cre/+(cCx26)为实验组,野生型BALB/c小鼠(6只)为正常对照组,两组分别选取P8、P12和P21小鼠各2只进行实验。采用耳蜗冰冻切片,免疫组化法检测耳蜗切片中葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)的表达。结果 cCx26小鼠耳蜗的GRP78/Bip表达定位与对照组相同,但在P8和P12时cCx26小鼠耳蜗表达更强,到P21时,在盖膜、耳蜗外侧壁GRP78/Bip表达较对照组减弱,而在顶回仅存的不成熟Corti细胞团中,GRP78/Bip表达与对照组接近。结论 GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗发育成熟之前,其耳蜗中GRP78/Bip表达增高,ERS可能参与了GJB2基因突变导致的非综合征型聋的发生过程。
- 张延平张晓强刘雅丽黄玮孙玉蕊
- 关键词：小鼠基因敲除内质网分子伴侣
- 人GJB2基因错义突变表达载体构建及鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的构建6种分别携带GJB2基因错义突变A40G、V37I、L90P、L90V、V84L和W44C的真核表达载体,转染HEK293细胞,建立6种错义突变的稳定表达细胞系。方法以野生型Cx26-EGFP融合蛋白质粒为模板,用Stratagene公司定点突变试剂盒构建错义突变表达载体,直接测序鉴定序列正确性,选取含有突变的载体转染HEK293细胞,G418选择性培养2周,流式细胞仪筛选表达阳性细胞,扩增培养形成稳定表达人Cx26突变的HEK293细胞系。培养细胞用4%多聚甲醛固定,鬼笔环肽和4',6-二脒基-2-苯基吲哚衬染细胞核,荧光显微镜下检测结果。结果6种突变表达载体经过测序,均含有相应突变,无多余突变出现,转染后均可在细胞间形成缝隙连接,呈现绿色荧光。结论成功构建6种携带GJB2基因错义突变的真核表达载体,为进一步研究错义突变致聋原因奠定了实验基础。
- 张延平汤文学常青Shoeb Ahamad林曦
- 关键词：错义突变基因表达
- 单只小鼠耳蜗总RNA提取方法被引量：1
- 2012年
- 目的探索一种高效、简便的小体积组织RNA提取方法。方法取单只野生型BALB/c小鼠或GJB2条件敲除小鼠cCx26loxp/loxp-Pax2Cre/+(cCx26ko)P10、P18耳蜗膜迷路组织,采用与EP管底部体积、形状均相似的玻璃研磨棒在裂解液中进行组织破碎,提取RNA后用琼脂糖电泳、紫外分光光度计检测所提取RNA的质量和完整性及浓度。结果本实验单只小鼠耳蜗中获得的总RNA紫外光吸光值(260/280)均在1.9～2.1之间,电泳结果显示28S和18S的条带清晰度高,PCR产物扩增出的目的基因片断单一,说明其完整、质量高且纯度高。结论单只小鼠耳蜗总RNA的提取方法操作简便、成本低廉且相对安全和快速,提取效率较高,适合于小体积组织RNA的提取。
- 张晓强张延平
- 关键词：小鼠耳蜗RNA提取
- GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗外毛细胞凋亡时程观察被引量：4
- 2012年
- 目的探讨GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗毛细胞缺失方式和具体时间。方法 GJB2基因条件敲除小鼠cCx26loxp/loxp-Pax2-Cre(cCx26)由转基因小鼠Cx26loxp/loxp与Cx26loxp/--Pax2-Cre小鼠杂交获得,分别选取P8、P14、P18和P21四个发育阶段各6只小鼠进行实验。野生型BALB/c小鼠作为正常对照。常规解剖出耳蜗基底膜,鬼笔环肽-FITC及碘化丙啶(PI)分别染色、铺片,激光共聚焦显微镜观察、拍照。结果与野生型小鼠相比,cCx26小鼠P8时耳蜗外毛细胞纤毛、细胞核形态均未见明显异常改变;P14时,鬼笔环肽染色显示耳蜗中回表皮板疏松,外毛细胞纤毛染色开始不规则,PI染色外毛细胞核排列极性欠佳,细胞核着色不均匀,可见深染的胞核,尚未见明显的外毛细胞缺失;P18时,鬼笔环肽染色显示表皮板出现区域性的模糊和单个外毛细胞纤毛的消失,外毛细胞核出现皱缩、片断化,甚至缺失,这一改变以中回最为明显,底回次之,顶回改变最轻微;P21时,表皮板出现了片状缺失,外毛细胞丢失明显,残余细胞排列紊乱。与野生型小鼠相比,cCx26ko小鼠各阶段内毛细胞纤毛染色不规则,深浅不一,细胞核未见明显形态异常及缺失。结论 GJB2基因缺失可引起小鼠耳蜗Corti器表皮板破损以及外毛细胞的凋亡,表皮板及外毛细胞纤毛的变化开始于P14,P18时外毛细胞出现典型的凋亡表现。
- 张延平张晓强刘雅莉黄玮孙玉蕊
- 关键词：凋亡
- 中国人常见GJB2基因突变蛋白亚细胞定位研究被引量：3
- 2010年
- 目的研究中国人常见三种GJB2基因突变(c.235de1C,c.299-300delAT,and c.176-191de1(16)bp)的亚细胞定位和致聋机理。方法用MegaTran 1.0将GJB2野生型和三种突变的绿色荧光蛋白融合表达载体转染HEK293细胞,转染48h后用红色ER-TrackerTM复染细胞,激光共聚焦显微镜下观察结果。结果转染野生型质粒后可见细胞膜上出现点状或线状绿色荧光,三种突变融合蛋白质粒转染后均可见HEK293细胞质中有弥漫分布的绿色荧光,而胞膜上没有表达;转染突变质粒的细胞用ER-Tracker TM复染后,激光共聚焦显微镜下见红色和绿色几乎完全重叠,提示上述三种突变蛋白没有出现在细胞膜上,而是滞留在内质网中。结论中国人常见三种GJB2基因突变没有到达细胞膜上形成缝隙连接,而是滞留在细胞内质网中,提示过多的突变蛋白可能通过诱发内质网应激以及后续的内质网应激相关细胞凋亡导致耳聋。
- 张延平刘雅莉张晓强李丽娜孙玉蕊张宗林
- 关键词：感音神经性耳聋
- 坑道噪声及MP3对某部队官兵听力影响的调查研究被引量：4
- 2011年
- 目的为研究坑道混合型噪声及随身听设备对人体听觉系统的影响规律,进一步加强对坑道作业人员的听力防护,调查坑道作业噪声及随身听对部队官兵听觉系统的危害。方法对总参某部从事坑道作业人员73人和长时间使用MP3的人员53人进行问卷调查,除外耳鼻咽喉科其他疾病,进行纯音测听和声导抗检查。听力检查前脱离噪声20小时以上,在隔音室内进行纯音和声导抗检查。用Stata软件对听力检查结果进行统计分析。结果听力检查发现坑道作业组出现语频听力下降3人(4.11%,3/73),平均听阈50dBHL;出现高频听力损伤30人(41.10%,30/73),频率主要为3.0kHz、4.0kHz、6.0kHz、8.0kHz高频区,平均听阈46dBHL。使用MP3的人员中无语频听力下降,高频听力损伤人数为17人(32.08%,17/53),平均听阈45dBHL。坑道作业组语频听力损失比例与长期使用MP3组无统计学差异(P>0.05),高频听力损失两组发生比例差异无显著性(P>0.05)。结论坑道噪声可能引起坑道作业人员的听力下降,需进一步加强噪声防护。长期使用MP3也可引起听力损伤。
- 李丽娜张延平孙玉蕊刘金伟张晓强邓惠严王戈佟明望张俊伟
- 关键词：听力损失随身听
- 细胞凋亡与耳聋研究进展被引量：1
- 2013年
- 凋亡是一种主动性程序性细胞死亡（programmed cell death，PCD），在这个过程中凋亡蛋白酶（caspase）（细胞自杀性半胱氨酸蛋白酶家族）被激活，并在凋亡过程中起核心作用。细胞凋亡形态学上表现为细胞骨架塌缩、细胞固缩、细胞膜泡形成、染色体集聚、DNA片段化、磷脂酰丝氨酸在细胞膜上不对称性消失、有吞噬作用的细胞吞噬活性缺失等。目前研究发现细胞凋亡主要有3种途径，即死亡受体途径、线粒体途径、内质网途径。许多凋亡相关基因在这些过程中起作用，最终引起细胞凋亡。
- 崔小缓张延平
- 关键词：细胞凋亡半胱氨酸蛋白酶耳聋DNA片段化磷脂酰丝氨酸死亡受体途径
