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人Toll样受体4基因5'远端增强子样区定位及反式作用因子鉴定被引量：1: 2012年; 目的对人Toll样受体4(TLR4)基因5'远端增强子样区进行定位,并鉴定参与其转录调控的反式作用因子。方法采用PCR克隆方法,将TLR4基因5'旁侧-1337^-683序列及其缺失片段与荧光素酶报告基因载体pGL-3-promoter进行重组,构建pGL-3--1337^-683-promoter重组质粒及其系列缺失质粒。将构建成功的质粒转染入人白血病K562细胞,检测各质粒的荧光素酶活性,根据缺失序列对荧光素酶活性的影响来确定TLR4基因5'远端增强子样区的位置。采用转录因子数据库检索和电泳迁移率实验(EMSA)两种方法对TLR4基因5'远端增强子样区反式作用因子进行鉴定。结果 TLR4基因5'远端增强子样区位于-923～-679的245bp范围内,并再细化为-923～-742和-721～-679两个功能单元。EMSA和转录因子数据库检索证实激活蛋白-1(AP1)是与-721～-679功能单元结合的转录因子,淋巴增强因子-1(LEF-1)可能是与该功能单元结合的另一个转录因子。结论 TLR4基因5'远端增强子样区中的一个功能单元定位在-721～-679的43bp片段中,AP1是与该区域结合的反式作用因子,可能与LEF-1共同起到转录增强作用。; 彭建亮冯凯路浩军张军郑燕华景青萍; 关键词：TOLL样受体4 反式激活因子类

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