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大鼠β神经生长因子前体基因的克隆及其真核表达载体pEGFP-NGF的构建: 2004年; 目的　克隆大鼠脑组织中神经生长因子 (NGF) β亚基前体的全长序列 ,构建其真核表达载体 p EGFP-NGF。方法　采用 RT- PCR方法扩增 NGFβ亚基前体的全长序列 ,克隆入载体 p MD18- T,转化大肠杆菌 JM10 9,挑选白色菌落行酶切鉴定、PCR鉴定及序列分析 ;利用高保真 Taq酶自重组质粒 p MD18- T/ NGF中扩增目的基因NGF,将目的基因与真核表达载体 p EGFP- N1行双酶切 ,T4连接酶连接 ,转化大肠杆菌 DH- 5 α,挑选白色菌落行酶切鉴定。结果　 p MD18- T/ NGF测序结果与 Gen Bank的序列完全一致 ,p EGFP- NGF行限制性内切酶 H ind 、Bam H 酶切 ,可见酶切片断与插入基因长度相符。结论　成功从大鼠脑组织中克隆神经生长因子 (NGF) β亚基前体的全长序列 ,并构建其真核表达载体 p EGFP- NGF,为从分子水平开展 NGF转基因相关研究奠定了基础。; 丁鹏冯忠堂王廷华董坚杨志敏路华路钢; 关键词：NGF 真核表达载体神经生长因子 EGFP 酶切目的基因

新生大鼠海马源性神经干细胞的分离培养及其向胆碱能神经元定向诱导分化研究(英文)被引量：3: 2005年; 本研究目的是从新生SD大鼠海马分离、培养神经干细胞并诱导其向胆碱能神经元方向分化。利用含b FGF(20ng/ml)和B27的无血清DMEM/F12培养基培养新生SD大鼠海马分离的具有自我更新和多向分化能力的细胞群,用免疫细胞化学技术检测巢蛋白(nestin),并于分化后分别检查特异性成熟神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的标记抗原β微管蛋白(Tuj1 )、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(Galc)的表达;用鸡胚骨骼肌提取液,诱导神经干细胞向胆碱能神经元方向分化。结果显示:从海马分离的细胞群具有自我更新能力,表达nestin,分化成熟后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原;与对照组3. 9%相比,鸡胚骨骼肌提取液可以诱导这些细胞中的9. 6%分化成为胆碱能神经元。提示分离的细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,是中枢神经系统的干细胞;在加有鸡胚骨骼肌提取液的培养基诱导下,能向胆碱能神经元方向分化。; 罗湘颖杨志敏宋晓斌刘苏赵匡彦冯忠堂王廷华; 关键词：细胞培养胆碱能神经元分化免疫细胞化学

NGF、BDNF和NT3在AD大鼠海马中的分布及表达变化被引量：17: 2005年; 目的观察NGF、BDNF和NT3在A lzhe im er d isease(AD)大鼠海马中的分布及其表达变化。方法采用海马注射Aβ淀粉蛋白的方法建立AD模型。10 d后对大鼠进行灌注,取脑,冰冻切片,用NGF、BNDF和NT3抗体行免疫组织化学染色。对海马恒定视野内NGF、BDNF和NT3的阳性细胞进行记数并进行统计学分析。结果AD组海马中的NGF阳性细胞较正常组显著增多(P<0.01),且染色增强。BDNF阳性细胞较正常组明显减少(P<0.01),染色强度减弱。而NT3的阳性细胞数及染色强度与正常组比较差异均没有统计学意义(P>0.05)。结论NGF、BDNF和NT3在AD的海马中发生了不同的变化,提示NGF、BDNF和NT3在AD中发挥了不同的作用,尤其是BDNF阳性细胞的减少可能与AD的神经功能减退有关。; 张卓王廷华朱榆红冯忠堂孙冰胡艳丽; 关键词：神经生长因子脑源性神经生长因子神经营养因子3 ALZHEIMER

脑源性神经营养因子前体蛋白干扰促进脊髓全横断大鼠运动功能恢复被引量：2: 2010年; 目的探讨脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）前体（proBDNF）在脊髓损伤中的作用.方法建立SD大鼠T10脊髓全横断损伤模型.以随机数字表法将动物分为抗体封闭组和人工脑脊液对照组.抗体封闭组应用椎管内释放proBDNF抗体以封闭脊髓内proBDNF,采用免疫组化评价proBDNF抗体封闭的效果,行为学BBB评分研究proBDNF鞘内封闭对脊髓全横断大鼠运动功能的影响.结果在全横断大鼠椎管内注入脑脊液的对照组没有观察到明显的运动功能改进,而proBDNF抗体鞘内封闭不仅有效减少脊髓内proBDNF,而且明显改善大鼠行为功能.proBDNF抗体封闭组行为学BBB评分较人工脑脊液对照组明显升高.结论通过proBDNF抗体鞘内封闭减少脊髓内proBDNF能有效促进全横断脊髓损伤大鼠行为功能部分恢复.; 陈迎华金华但齐琴齐建国; 关键词：脊髓损伤脑源性神经营养因子

成人先天性心脏病膜部室间隔缺损封堵治疗的临床评价: 2005年; 目的:对成人先天性心脏病膜部室间隔缺损病例经导管Amplatzer法封堵治疗,随访3～6月,评价其疗效及安全性.方法:术前所有病例经胸超声心动图初筛选,左室造影最终筛选确定具有适应症的10例成人膜部室缺病例,其中5例伴室间隔膜部瘤,男性8例,女性2例,年龄18～49岁(37±12),身高153～170 cm(132±40),术中所有病例均使用经胸超声心动图(TTE)监测,封堵器均选用Amplatzer封堵伞.封堵术后1、2、3、6月随访TTE,X线观察疗效和安全性.结果:10例封堵手术成功,即刻手术成功率100%,无残余分流,主动脉瓣及房屋瓣未累及,未发生感染性心内膜炎、房屋传导阻滞等并发症,封堵伞位置良好.结论:对具有适应症的成人膜部室缺(伴或不伴有膜部瘤),选择Amplatzer封堵介入治疗认为是有效、安全的.; 张彤王礼琳张翔李文武丽萍; 关键词：成人先天性心脏病膜部室间隔缺损封堵治疗 AMPLATZER封堵伞 AMPLATZER法室间隔膜部瘤

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国家自然科学基金(30260112)