国家自然科学基金(30872610)
- 作品数：8 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：华中科技大学山西医学科学院更多>>
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- 自噬参与压力诱导兔髓核细胞退变的研究被引量：1
- 2013年
- 目的观察自噬是否参与压力诱导兔髓核细胞退变，探讨压力诱导髓核细胞退变机制。方法从3月龄兔胸腰段脊柱提取兔髓核细胞培养，取第2代兔髓核细胞，1Mpa压力环境下培养12、24、48h。细胞活力与细胞毒性检测观察压力对细胞生长的影响，透射电镜观察压力条件下细胞的微观结构。单丹磺酰尸胺（MDC）染色观察细胞内自噬性空泡结构及自噬率，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）观察自噬相关基因在压力条件下的表达。结果压力导致细胞衰老及死亡，透射电镜见细胞内存在自噬体结构，MDC染色后行流式细胞学检测显示12、24、48h自噬率分别为（1．580±0．171）％、（7．930±0．252）％、（13．530±1．206）％，PER结果显示压力诱导自噬相关基因（LC3B、Beclin-1）表达量与正常条件下表达明显增多（P〈0．05），且随着压力培养时间延长，LC3B、Beclin-1表达量也明显增多（P〈0．05）。结论自噬参与压力诱导细胞退变的过程，为压力诱导椎间盘髓核细胞退变的防治提供新的途径。
- 马凯歌邵增务王佰川熊蠡茗吴强杨述华
- 关键词：椎间盘自噬髓核细胞
- 脊索细胞对类软骨细胞增殖及基质合成代谢的影响
- 2012年
- 目的观察非接触共培养条件下脊索细胞对类软骨细胞增殖及生物学特性的影响。方法无菌条件下取4只4周龄13本大白兔胸腰段脊柱，获取髓核组织，酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化的脊索细胞及类软骨细胞。取第2代类软骨细胞与脊索细胞按1：1的比例接种于共培养装置Transwell小室中，将单层培养的类软骨细胞设为对照组。培养1、3、7、10d后倒置相差显微镜下观察细胞生长状况，免疫荧光法鉴定细胞表型，细胞计数试剂盒（CCK-8）法测定细胞增殖，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖的表达。结果成功分离纯化、获取脊索细胞及类软骨细胞。镜下观察见原代脊索细胞体积较大，呈圆形或椭圆形，直径10～15μm，胞质内含较多大小不等的囊泡；原代贴壁的类软骨细胞体积较脊索细胞小，呈短梭形，直径4～6μm。随着非接触共培养时间的延长，类软骨细胞增殖明显加快，以共培养7、10d明显（P〈0．05）；Ⅱ型胶原、蛋白多糖的表达量也逐渐增高。结论脊索细胞能促进髓核类软骨细胞的增殖，其可能在阻止椎间盘退变的发生中具有一定意义。
- 丁凡邵增务熊蠡茗马凯歌高飞
- 关键词：髓核
- 脊索细胞研究进展被引量：7
- 2009年
- 椎间盘再生研究中,脊索细胞独特的生理功能受到关注。成人髓核内脊索细凋亡与髓核内蛋白多糖含量降低、胶原含量增加、水含量丢失相关。脊索细胞分泌的可溶性因子具有引导终板软骨细胞向髓核迁移,调节髓核细胞蛋白多糖合成的作用。脊索细胞可促进髓核软骨样细胞增殖和表型维持,在维持髓核内细胞数量及细胞外基质含量中起着重要作用。脊索细胞独特的生理功能,在组织工程修复退变椎间盘研究中展现出广阔的应用前景。
- 于鹏邵增务
- 关键词：椎间盘
- 非接触共培养脊索细胞诱导骨髓间充质干细胞向类软骨细胞分化的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的:分离兔髓核脊索细胞(notochordal cells,NC)及骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC),通过非接触共培养探讨NC对MSC细胞表型的影响。方法:4～6周龄新西兰兔8只,取胸腰段脊柱的髓核,用密度梯度离心提取NC,同时取其股骨骨髓用FICOLL液分离MSC,将NC和MSC等比例(1∶1)通过transwell培养板进行非接触共培养作为实验组,单纯MSC细胞培养作为对照组,光镜下观察细胞的生长情况。对两组的MSC行免疫组化及RT-PCR、Western-blot检测MSC细胞表型的改变情况。结果:原代NC呈圆形或椭圆形,细胞体积大,细胞增殖不明显;MSC贴壁生长,呈三角形或梭形,漩涡状排列。甲苯胺蓝染色:对照组MSC细胞核淡染,胞体染色不明显,染色阴性;实验组MSC可见从第3天开始胞体及胞外基质出现紫红色,第5天染色更加明显。Ⅱ型胶原免疫组化对照组MSC淡染,细胞形态不清楚;实验组第3天出现MSC内出现棕黄色深染,随着时间推移细胞染色加深呈阳性表现。RT-PCR检测,经过5d非接触共培养后实验组蛋白聚糖的基因表达为对照组的2.35倍(P<0.05),Ⅱ型胶原的基因表达为对照组的1.61倍(P<0.05),对照组Ⅰ型胶原的基因表达为实验组的2.56倍(P<0.05)。Western-blot检测后发现:经过5d非接触共培养,实验组蛋白聚糖的含量为对照组的1.61倍(P<0.05),Ⅱ型胶原的表达为对照组的10.04倍(P<0.05)(P<0.05)。结论:在非接触共培养条件下脊索细胞可以诱导骨髓间充质干细胞表型发生变化,向类软骨细胞方向分化,这将为组织工程化髓核的种子细胞筛选提供新选择。
- 张彦男邵增务吴永超王佰川马凯歌丁凡杨述华
- 关键词：骨髓间充质干细胞髓核共培养
- 脊索细胞促进骨髓间充质干细胞增殖及定向诱导分化的研究被引量：1
- 2012年
- 目的分离兔髓核脊索细胞及骨髓间充质干细胞（MSCs），通过共培养观察脊索细胞对MSCs增殖能力及细胞表型的影响。方法4-6周龄新西兰兔4只，取胸腰段脊柱的髓核，用密度梯度离心法提取脊索细胞，同时取其股骨骨髓用Ficoll液分离得到MSCs，光镜观察脊索细胞和MSCs不同比例（1：2、1：1、2：1）共培养条件下细胞的生长，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖。脊索细胞和MSCs共培养（1：1）后行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原染色检测MSCs细胞表型的改变。对共培养后的MSCs进行相关基因表达的检测。结果光镜下观察原代脊索细胞呈圆形或椭圆形，胞体大，细胞增殖不明显。MSCs呈梭形贴壁生长，旋涡状排列。CCK-8检测发现脊索细胞／MSCs1：1组细胞增殖明显高于其余各组。甲苯胺蓝染色MSCs单独培养组呈阴性，共培养组呈阳性。Ⅱ型胶原染色MSCs单独培养组呈阴性，共培养组呈阳性。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测发现共培养组蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达分别为脊索细胞的2．00、1．55倍，而单独培养的MSCs则表达阴性。结论在共培养条件下脊索细胞可以促进MSCs增殖，且细胞比例为1：1时更为显著；同时可以诱导其产生Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖，表现出类软骨细胞表型。
- 张彦男邵增务吴永超王佰川马凯歌杨述华
- 关键词：骨髓间充质干细胞髓核椎间盘共培养
- 椎间盘组织工程种子细胞研究进展
- 2011年
- 导致腰背疼痛的重要原因之一是椎间盘退变,据统计腰背痛的患者中,椎间盘退变的占23%[1-3].目前治疗椎间盘退变所采取的手术及保守治疗虽能取得一定的疗效,但这些治疗不是针对椎间盘退变本身,不能阻止椎间盘退变,更不能恢复椎间盘的功能[4],目前亟需有效的方法治疗椎间盘退变.
- 马凯歌邵增务
- 关键词：椎间盘种子细胞腰痛生物疗法
- 椎间盘组织工程种子细胞研究进展被引量：3
- 2010年
- 椎间盘退行性变临床上常见,目前尚无有效治疗方法。椎间盘组织工程学技术以种子细胞为核心、支架材料为载体,为椎间盘退变治疗提供了新思路,其中种子细胞是最基本、最关键的环节。目前椎间盘组织工程研究常用种子细胞包括椎间盘细胞和干细胞。该文就椎间盘细胞中髓核细胞、纤维环细胞、脊索细胞,干细胞中骨髓间充质干细胞及其他干细胞在椎间盘组织工程种子细胞研究中的进展作一简要综述。
- 丁凡邵增务
- 关键词：椎间盘种子细胞
- RASSF1A基因在骨肉瘤中的表达及其临床意义被引量：2
- 2009年
- 目的探讨肿瘤抑制基因RASSF1A在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤的生物学行为之间的关系。方法用RT-RCR方法检测a)骨肉瘤MG-63细胞中RASSF1A基因的表达;b)30例骨肉瘤组织、10例骨软骨瘤组织及10例正常骨组织中RASSF1A基因的表达。结果a)骨肉瘤MG-63细胞中未发现RASSF1A基因表达;b)30例骨肉瘤组织中RASSF1A基因缺失率为43.33%,对照组骨软骨瘤中表达率为100%,正常骨组织中表达率为100%。RASSF1A基因的表达与肿瘤的Enneking分期及是否发生远处转移相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤的部位及大小、Price组织学分级及是否侵犯软组织无关(P>0.05)。结论RASSF1A基因可能在骨肉瘤的发生发展中起重要作用,有可能为骨肉瘤的基因治疗提供新的靶点。
- 刘之川邵增务邓超丁凡兰观华
- 关键词：骨肉瘤RASSF1ART-PCR
