国家自然科学基金(30170370)
- 作品数：15 被引量：59H指数：4
- 相关作者：徐标康丽娜陈琴高玲董莉更多>>
- 相关机构：南京大学医学院附属鼓楼医院福建省第二人民医院南京军区南京总医院更多>>
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- 胰岛素对糖尿病小鼠缺血诱导的血管新生障碍的影响被引量：4
- 2010年
- 目的观察糖尿病小鼠是否存在缺血诱导的血管新生障碍,以及胰岛素治疗对这种障碍的影响,并探讨其可能的分子机制。方法链脲霉素诱导C57BL/6雄鼠糖尿病,非糖尿病组给予等量缓冲液,糖尿病胰岛素治疗组术前及术后注射胰岛素控制血糖。左侧股动脉高位结扎离断造成单侧后肢缺血模型。ELISA法测定术前及术后(1、3、7及14天)血浆血管内皮生长因子(VEGF)及间充质衍生因子1α(SDF-1α)水平。CD31免疫组织化学染色法评估术前及术后(7、14天)双侧后肢血管新生情况。免疫印迹法测定腓肠肌组织血管内皮生长因子、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、蛋白激酶B(Akt)及其磷酸化产物的蛋白表达。结果与非糖尿病组比较,糖尿病组小鼠缺血组织新生毛细血管密度显著减少(术后7天7.65±1.74比18.22±3.77,P<0.05),并伴随缺血诱导的血浆血管内皮生长因子及间充质衍生因子1α释放受抑(P<0.01),靶组织血管内皮生长因子蛋白表达上调受抑,蛋白激酶B及内皮型一氧化氮合酶磷酸化减弱(P<0.05)。胰岛素治疗明显改善糖尿病动物组织缺血后血管新生程度(15.36±2.14比7.65±1.74,P<0.05),提高血浆血管内皮生长因子及间充质衍生因子1α释放水平(P<0.01),并增强缺血组织血管内皮生长因子及其下游信号分子的表达与活化(P<0.05)。结论胰岛素治疗有效改善糖尿病动物缺血诱导的血管新生障碍,其可能是通过恢复受损的SDF-1/VEGF/Akt/eNOS信号通路活化而介导。
- 董莉刘莹沈宇陈琴白剑徐标
- 关键词：糖尿病血管新生血管内皮生长因子胰岛素
- 糖基化终产物引起晚期内皮祖细胞功能障碍被引量：1
- 2010年
- 目的观察与糖尿病患者血清浓度类似的糖基化终产物修饰的牛血清白蛋白对体外培养脐血来源晚期内皮祖细胞功能的影响并探讨可能机制。方法密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,用差速贴壁法分离、培养晚期内皮祖细胞。流式细胞术、免疫细胞化学染色及荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白、植物凝集素被用于鉴定培养的细胞。将晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白与晚期内皮祖细胞共同培养24h后,利用噻唑蓝法检测细胞的增殖能力,AnnexinV/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡;Boyden小室法检测血管内皮生长因子趋化的细胞迁移;ECMatirx-gel检测形成毛细血管样网状结构的能力。利用逆转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法测定糖基化终产物受体mRNA和蛋白表达水平。结果脐血单个核细胞在体外培养过程中先后出现两种细胞:第5～7天出现集落样生长细胞,扩增不明显,存在14天左右即消失,这类细胞被称为"早期内皮祖细胞";10～15天时,逐渐出现20～50个细胞组成的细胞簇,1～3天即可形成大于500个细胞簇,细胞呈铺路石样,可传代,大于95%的细胞免疫表型为CD45-/CD146+/CD105+,表达内皮细胞特有的vWF因子,可摄取乙酰化低密度脂蛋白并可与荆豆凝集素1结合,这类细胞被称为"晚期内皮祖细胞"。50～400mg/L晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白与晚期内皮祖细胞共培养24h后,与对照组相比,细胞的增殖能力未见明显变化(P>0.05)。当晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白浓度大于100mg/L时,与对照组相比,晚期内皮祖细胞的凋亡增加(P<0.05)、血管内皮生长因子趋化的迁移以及在ECMatirx-gel上形成新生血管的能力下降(P<0.05),糖基化终产物受体mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05)。结论糖基化终产物通过促进凋亡、抑制迁移及体外形成新生血管的能力引起晚期内皮祖细胞功能障碍,这些影响可能与糖基化终产�
- 陈琴黄铭涵康丽娜徐标
- 关键词：糖基化终产物内皮祖细胞糖基化终产物受体糖尿病血管新生
- 冠状动脉粥样硬化性心脏病患者外周血CD31^(bright)/AnnexinV^+内皮微粒水平增高
- 2010年
- 目的观察冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者与非冠心病患者外周血内皮微粒水平,探讨内皮微粒与冠心病及其危险因素的相关性。方法入选研究对象102例,分为对照组非冠心病患者(n=30),稳定型心绞痛(SAP)组(n=16),不稳定型心绞痛(UAP)组(n=24),急性心肌梗死(AMI)组(n=32)。全部病例均经冠状动脉造影证实冠状动脉病变情况。采用流式细胞仪检测外周血CD31bright/AnnexinV+内皮微粒水平。结果与对照组非冠心病患者外周血内皮微粒[(1628.4±623.7)/mL]比较,冠心病患者外周血内皮微粒[(2850.7±710.6)/mL]显著增加(P<0.01),而急性心肌梗死(AMI)与UAP及SAP亚组之间外周血内皮微粒水平无显著差异(P>0.05)。冠心病组及对照组所有入选患者中,2型糖尿病患者外周血内皮微粒水平较非糖尿病患者显著升高(P<0.05);多元线性回归分析显示血清三酰甘油水平与外周血内皮微粒数量呈正相关(r=0.32,P<0.05)。结论冠心病患者和2型糖尿病患者外周血内皮微粒增多,提示冠心病患者和2型糖尿病患者内皮损伤严重。
- 程海王涟张静梅宋杰黄为康丽娜徐标
- 关键词：内皮微粒
- 胰岛素改善糖尿病小鼠骨髓内皮祖细胞动员障碍研究被引量：1
- 2011年
- 目的：探讨胰岛素对糖尿病小鼠骨髓内皮祖细胞（EPC）动员的影响及其机制。方法：链脲霉素诱导C57BL／6雄鼠糖尿病，随机分为非糖尿病组、糖尿病组和糖尿病胰岛素治疗组（胰岛素组）3组（各组n=32）。人组小鼠饲养2个月后行左侧股动脉高位结扎离断术造成急性单侧后肢缺血模型。胰岛素组皮下注射胰岛素控制血糖。流式细胞术检测术后（0，1，3，7天，n=6～10）外周血单个核细胞中干细胞因子受体／干细胞抗原-1／胎肝激酶-1阳性早期EPC比例。酶联免疫吸附法测定血浆及骨髓血管内皮生长因子（VEGF）及间充质衍生因子let（SDF-1α）水平。免疫印迹法测定骨髓VEGF、蛋白激酶B、内皮一氧化氮合酶及基质金属蛋白酶-9的蛋白表达及磷酸化水平，酶谱法测定基质金属蛋白酶-9酶活性。结果：糖尿病组呈现缺血诱导的骨髓EPC动员障碍，动员高峰期其外周血早期EPC数量较非糖尿病组显著减少（P〈0．01）；并伴随血浆及骨髓VEGF及SDF-1α释放减少（P〈0．01）；骨髓VEGF蛋白表达受抑制、蛋白激酶B与内皮一氧化氮合酶磷酸化减弱及基质金属蛋白酶-9酶活性受损（P〈0．05），差异均有统计学意义。胰岛素组缺血术后骨髓EPC动员能力、VEGF及SDF-1α释放水平及骨髓蛋白激酶B／内皮一氧化氮合酶／基质金属蛋白酶-9信号通路活化水平较糖尿病组均明显提高（P〈0．05），差异均有统计学意义。结论：胰岛素改善糖尿病动物缺血诱导的骨髓EPC动员障碍，这种作用可能通过恢复受损的SDF-1α／VEGF信号通路活化而介导。
- 董莉徐标康丽娜丁亮陈琴高玲
- 关键词：糖尿病动员内皮祖细胞骨髓胰岛素
- 糖尿病小鼠缺血诱导的骨髓内皮祖细胞动员障碍被引量：5
- 2007年
- 目的观察糖尿病动物缺血诱导的骨髓内皮祖细胞(EPC)动员是否存在障碍,以及这种障碍是否和缺血诱导的血管内皮生长因子(VEGF)释放降低有关。方法链脲霉素40 mg/kg 诱导C57BI/6雄鼠糖尿病,非糖尿病组给予等量缓冲液。饲养2个月后,进行左侧股动脉高位结扎离断术造成后肢缺血模型,通过红四氮唑染色法与后肢血管造影确定造模成功。于术前及术后不同时间点采血(1天,3天,n=8;5天,7天及14天,n=5),三色流式细胞术检测两组动物外周血单个核细胞中c-Kit^+/Sca-1^+/flk-1^+早期 EPC 比例。ELISA 法测定相应时间点血浆 VEGF 水平。结果基础状态下,糖尿病组循环 EPC 数量较非糖尿病组明显减少[(0.60±0.03)%比(0.95±0.09)%,P<0.001],血浆 VEGF 水平低于试剂盒检测灵敏度。两组动物缺血诱导的骨髓早期 EPC 释放曲线相似,即术后1天显著增加,术后3天达峰,动员持续至2周以上。但是在 EPC 早期快速动员阶段(术后前3天),糖尿病组外周血早期 EPC 数量较非糖尿病组明显减少[1天,(1.16±0.29)%比(1.80±0.32)%,P<0.05;3天,(1.38±0.34)%比(2.37±0.52)%,P<0.05]。同时组织缺血也伴随着血浆 VEGF 浓度的显著增高:非糖尿病组血浆 VEGF 水平在术后一天快速增加并达到峰值,此后渐降至相对较低水平持续两周以上;而糖尿病组术后1天血浆 VEGF 快速释放明显降低[(73.1±18.6)pg/ml 比(128.5±44.2)pg/ml,P<0.05]。结论糖尿病动物基础状态下外周血早期 EPC 数量减少,组织缺血诱导的骨髓 EPC 动员障碍,这种障碍可能与缺血诱导的 VEGF 释放减少有关。
- 康丽娜徐标陈琴高玲姚康施广飞
- 关键词：糖尿病干细胞血管内皮生长因子组织缺血
- 糖基化终产物对兔股动脉内皮依赖性血管舒张功能的影响
- 2004年
- 目的 研究不同浓度的糖基化终产物(AGEs)对兔股动脉内皮依赖及非内皮依赖的血管舒张功能的影响。方法采用家兔股动脉恒流灌注模型,在兔股动脉远心端连接压力换能器,测定兔股动脉灌注压;从而间接反映兔股动脉远心端血管舒张功能。记录AGEs阻断前后不同浓度的乙酰胆碱(Ach)及不同浓度的硝普钠(SNP)灌注兔股动脉的压力曲线,观察AGEs对不同浓度Ach所引起的内皮依赖性血管舒张及SNP引起的内皮非依赖性血管舒张的影响,以及L-精氨酸(L-arginine)对这种影响的作用。结果Ach及SNP均引起浓度依赖的血管舒张,AGEs抑制Ach产生的血管舒张作用并呈浓度依赖性,L-arginine不能改善AGEs对Ach引起的血管舒张的抑制作用。AGEs对SNP引起的血管舒张作用没有影响。结论 AGEs通过减少NO的合成抑制内皮依赖性血管舒张,NO前体物L-arginine对AGEs的作用无明显影响。
- 路雯徐标骆秉铨高玲
- 关键词：股动脉L-ARGININE糖基化终产物血管舒张功能内皮依赖性血管舒张前体物
- 急性冠状动脉综合征患者外周血CD31^(bright)/Annexin V^+内皮微粒水平增高被引量：2
- 2009年
- 目的观察急性冠状动脉综合征患者与非冠心病患者外周血内皮微粒水平,探讨CD31bright/Annexin V+内皮微粒与心血管危险因素的相关性。方法急性冠状动脉综合征患者56例,非冠心病患者26例,采用流式细胞仪检测外周血CD31bright/Annexin V+内皮微粒水平。结果与非冠心病患者比较,急性冠状动脉综合征患者外周血CD31bright/Annexin V+内皮微粒显著增加(P<0.01),而急性心肌梗死与不稳定型心绞痛亚组之间外周血CD31bright/Annexin V+内皮微粒水平无显著性差异(P>0.05)。所有入选患者中,2型糖尿病患者外周血CD31bright/Annexin V+内皮微粒水平较非糖尿病患者显著升高(P<0.05);多因素回归分析显示,血清甘油三酯水平与外周血CD31bright/Annexin V+内皮微粒数量独立正相关(r=0.28,P<0.05)。急性冠状动脉综合征组血清高敏C反应蛋白水平与外周血CD31bright/Annexin V+内皮微粒数量呈正相关(r=0.31,P<0.05)。结论急性冠状动脉综合征患者和糖尿病患者外周血CD31bright/Annexin V+内皮微粒增多,提示急性冠状动脉综合征患者和2型糖尿病患者内皮损伤严重。CD31bright/Annexin V+内皮微粒水平增高可能与血清甘油三酯和血清高敏C反应蛋白水平增高有关。
- 程海王涟张静梅宋杰康丽娜徐标
- 关键词：内皮微粒高敏C反应蛋白
- 糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞黏附分子表达和黏附功能的影响及其机制被引量：3
- 2007年
- 目的探讨糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管细胞黏附分子1(VCAM-1)表达和黏附功能的影响及其机制。方法以D-葡萄糖和牛血清白蛋白在37℃条件下制备AGEs。胶原酶法分离HUVECs并加以培养。用流式细胞术测定HUVECs受AGEs干预后VCAM-1表达水平。按Esposito′s法进行HUVECs外周血单核细胞(PBMCs)黏附试验,Chen氏法计算HUVECs-PBMCs黏附率。用[γ-32P]ATP液闪计数技术测定受AGEs干预后HUVECsPKC活性的变化。结果AGEs可明显诱导HUVECsVCAM-1表达,呈剂量、时效依赖关系。HU-VECs-PBMCs黏附率的变化与VCAM-1的表达水平平行。蛋白激酶C(PKC)抑制剂可明显降低AGEs所致的VCAM-1表达增加及HUVECs-PBMCs黏附率增加。HUVECs受AGEs干预后其PKC活性明显升高。结论AGEs能使人血管内皮细胞VCAM-1表达增加和黏附功能增强,其机制是部分通过增加细胞内PKC的活性来实现。
- 刘云海徐标杨慎启蒲娟娟曹月新
- 关键词：脐静脉内皮细胞单核细胞
- 综合影像学评价猪急性心肌梗死模型的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的:应用开胸结扎冠状动脉前降支法,探索构建中国小型猪急性心肌梗死(AMI)模型的可行性及有效性。方法:选取中国小型猪52只,应用开胸法结扎冠状动脉左前降支第二对角支开口远端,构建AMI模型。分别于造模前、造模后3 d、28 d,行超声心动图检查。造模后28 d行单电子发射型计算机断层显像(SPECT)检查、正电子发射型计算机断层显像(PET)检查,并行病理检查,评价模型的稳定性、有效性和可靠性。结果:共39只猪成功造模。造模后28 d,左室射血分数(LVEF)明显减低,左室舒张末径(LVEDD)及左室收缩末径(LVESD)明显增大(P<0.05)。SPECT提示静息及药物负荷状态下,心肌灌注缺损面积分别占左心室面积的(31.3±2.5)%和(39.3±3.8)%。PET提示心肌灌注缺损主要集中在左室局限前壁、心尖部和室间隔。结论:应用开胸结扎冠状动脉法建立的AMI模型,效果确切可靠,可为相关研究提供可靠的动物模型。
- 毛庆梁秀琳成益周学中刘亚平程亚敏
- 关键词：小型猪急性心肌梗死超声心动图正电子发射型计算机断层显像
- 糖尿病小鼠骨髓分子改变对内皮祖细胞动员的影响被引量：1
- 2010年
- 背景糖尿病小鼠呈现缺血诱导的骨髓内皮祖细胞(EPC)动员障碍,但其分子机制目前尚未明了。目的观察缺血诱导的EPC动员障碍是否与糖尿病状态下骨髓EPC动员相关的信号通路改变有关。方法链脲霉素40mg/kg诱导C57BL/6雄鼠糖尿病,左侧股动脉高位结扎离断术造成单侧后肢缺血模型。于术前及术后1、3、7d不同时间点采血(n=6～10),流式细胞术检测外周血单个核细胞中细胞因子受体(c-Kit)+/干细胞抗原1(Sca-1)+/胎肝激酶1(Flk-1)+早期EPC比例。酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定相应时间点血浆及骨髓血管内皮生长因子(VEGF)及间充质衍生因子1α(SDF-1α)水平。免疫印迹法测定术后3d骨髓单个核细胞VEGF及其受体2(VEGFR2)、蛋白激酶B(PKB,Akt)与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及其磷酸化产物、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及其组织抑制因子1(TIMP-1)的蛋白表达水平,明胶酶谱法测定骨髓上清MMP-9酶活性。结果与非糖尿病组相比,糖尿病小鼠呈现缺血诱导的骨髓EPC动员障碍,动员高峰期其外周血早期EPC数量显著减少,并伴随血浆及骨髓中SDF-1α及VEGF释放减少[VEGF(85.3±22.8)比(164.1±30.4)ng/L,P<0.01;SDF-1α:(731±52)比(1267±174)ng/L,P<0.01],骨髓组织细胞VEGF、VEGFR2蛋白表达受抑、Akt与eNOS磷酸化减弱、MMP-9蛋白表达减少及其酶活性受损(P<0.05),而TIMP-1蛋白表达水平增加(P<0.05),且糖尿病组骨髓MMP-9酶活性受抑与其循环中EPC水平减低相关(P<0.01)。结论糖尿病动物缺血诱导的骨髓EPC动员障碍可能与组织缺血后SDF-1α/VEGF/Akt/eNOS/MMP-9信号通路的活化受损有关。
- 董莉康丽娜陈琴高玲顾蓉徐标
- 关键词：糖尿病内皮祖细胞动员骨髓
