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生物素标记文库筛选与cDNA快速终末端扩增技术克隆HRNT-1新基因被引量：8: 2000年; 目的：大鼠ZA73基因(GenBank accession number：AF011363)是本实验室从大鼠支气管上皮恶性转化细胞模型中采用mRNA差异显示技术克隆到的EST片段，与支气管上皮细胞恶性转化相关。根据此EST序列，克隆人全长基因。材料与方法：运用生物素标记探针筛选人cDNA文库、将筛选基因进行cDNA快速终末端扩增(Rapid amlification of cDNA ends)，直至获得全长序列。结果：HRNT-1 cDNA总长4256 bp，开放阅读框架2760 bp，5′非编码序列253bp，3′非编码序列1240 bp，已被GenBank收录于Nr数据库中(Accession number：AF223393)。结论：采用生物素标记cDNA文库筛选和cDNA快速终末端扩增相结合的技术是克隆全长cDNA快速而有效的方法，尤其适用于那些长度超过2kb的基因。; 李刚葛世丽胡迎春吴德昌张开泰; 关键词：文库筛选 CDNA

α粒子诱发人支气管上皮细胞恶性转化不同时期差异表达基因cDNA文库的构建被引量：8: 2002年; 目的 :建立α粒子诱发人支气管上皮细胞恶性转化不同时期差异表达基因的文库。方法 :抑制消减杂交法 (SSH)。结果 :建立了 3个人支气管上皮细胞恶性转化不同时期差异表达基因的cDNA文库。其中 ,A差减文库 (永生化人支气管上皮细胞BEP2D的cDNA为tester,α粒子照射BEP2D细胞后 35代恶性转化细胞R15Hp35的cDNA为driver)有 416个克隆 ,B差减文库 (α粒子照射BEP2D细胞后 2 0代转化细胞R15Hp2 0的cDNA为tester,BEP2D和R15Hp35细胞的cDNA混合后为driver)有 30 1个克隆 ,C差减文库 (R15Hp35细胞的cDNA为tester,BEP2D细胞的cDNA为driver)有 5 86个克隆。,对文库中 70个cDNA克隆单向测序后发现 :6 1个cDNA为己知基因 ,9个cDNA在GenBank中无法查到对应的同源序列 ,可能代表了新基因。结论 :3个差减文库的cDNA可能代表了α粒子诱发人支气管上皮细胞恶性转化不同时期差异表达的基因 ,此为进一步研究α粒子诱导肺癌发生的分子机制奠定了基础。; 范保星张开泰谢玲项小琼吴德昌; 关键词：Α粒子差异表达基因抑制消减杂交 BEP2D细胞

肺鳞癌组织中208个肺癌相关基因的表达(英)被引量：2: 2003年; 目的:病理学上诊断同样为肺鳞癌的患者,其治疗疗效和愈后往往存在一定差异,本研究利用本实验室制作的208个肺癌相关基因芯片,探讨了7例肺鳞癌组织中基因表达的异质性,试图为患者的治疗和预后提供分子依据。方法:提取7例男性肺鳞癌患者(年龄在55～65岁之间)癌组织的总RNA并用LD-PCR标记成探针,然后与含有208个肺癌相关基因的cDNAMicroarray杂交,芯片用ImaGene软件分析和处理数据。结果:7例肺鳞癌组织之间208个肺癌相关基因表达的相似性在60.65%～82.69%之间。结论:本研究首次对肺鳞癌患者不同个体之间基因的表达进行研究并发现存在一定的差异,提示应注意癌症患者的个体化诊断和治疗。; 范保星孙敬芬解立新陈良安刘又宁王升启吴德昌; 关键词：肺鳞癌肺癌基因表达

肺癌相关基因芯片的制作被引量：8: 2001年; 探讨肺癌相关基因芯片的制作过程及其在基因表达谱方面的应用 ,同时对一些传统的技术环节进行了改进。首先有目的地搜集了 6 0个肺癌相关基因 ,用修饰后的引物将其分别克隆 ,经纯化、变性后 ,用CartesianPixSys5 5 0 0cDNAMicroarray点样仪以微阵列的形式将其点布于醛基化的玻璃片上 ;然后将人支气管上皮恶性转化细胞模型BEP2D细胞的原代、2 0代、35代的总RNA逆转录后再经LDPCR标记成荧光探针与基因芯片进行杂交。ScanArray 30 0 0荧光扫描仪扫描后显示 ,图象背景均匀、信号清晰 ,证实该芯片制作成功。; 范保星张开泰马淑华谢玲王升启吴德昌; 关键词：CDNA微阵列 BEP2D细胞基因表达谱肺癌相关基因基因芯片

DNA甲基化检测方法被引量：15: 2002年; DNA甲基化是真核细胞基因组重要修饰方式之一 ,参与基因的表达调控。目前 ,DNA甲基化检测的方法主要有 :酶切、限制性酶切 - PCR(restriction enzym e PCR)、甲基化特异性 PCR(methylation- specific PCR,MS PCR)、Southern印迹亚硫酸盐测序 (bisulfite DNA sequencing)、变性高效液相色谱 (denature high- perform ance liquid chrom atography,DHPL C)、甲基化敏感的单核苷酸引物延伸 (m ethylation- sensitive single nucleotide prim er extensio,MS- SNu PE)、PCR荧光变性曲线分析(PCR and fluorescence m elting curve analysis)、亚硫酸盐 PCR- SSCP(bisulfite- PCR- SSCP)、COBRA(combined bisulfite re-striction analysis)和 Methy L; 范保星张开泰吴德昌; 关键词：DNA甲基化 PCR 基因表达酶切法

BEP2D细胞恶性转化不同时期差异表达基因的筛选: 2003年; 目的　筛选并鉴定α粒子辐射诱发永生化人支气管上皮细胞 (BEP2D)恶性转化不同时期差异表达的基因。方法　抑制消减杂交 (SSH) ,cDNA芯片。结果　利用SSH构建了BEP2D细胞 3个恶性转化不同时期差异表达基因的文库 ,BEP2D细胞的文库有 4 16个克隆 ,R15H2 0细胞的文库有 30 1个克隆 ,R15H35细胞的文库有 5 86个克隆 ,经cDNAMicroarray验证发现 :BEP2D细胞文库来源的芯片与 3代细胞探针杂交后的阳性信号率为 90 4 %、2 1 6 %和 19 7% ;R15H2 0细胞文库来源的芯片的阳性信号率为 8 6 %、93 8%和 31 6 % :R15H35细胞文库来源的芯片的阳性信号率为 2 3 5 %、18 2 %和 90 7%。结论　联合应用SSH和cDNAMicroarray是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速和有效方法 ;经cDNAMicroarray鉴定出的 3个文库中差异表达的cDNA可能代表了α粒子诱发人支气管上皮细胞恶性转化相关的基因。; 范保星张开泰孙敬芬项小琼谢玲胡迎春王升启吴德昌; 关键词：表达基因抑制消减杂交永生化人支气管上皮细胞癌症

新基因HRNT-1的分子克隆与差异表达研究: 目的:根据本实验室克隆的大鼠气管上皮细胞恶性转化相关基因的EST片段(GenBank Aceession NumberAFO11363)克隆相应的人全长基因并探索其生物学功能.方法:根据大鼠EST序列为模板设计探针并用B...; 张开泰李刚葛世丽胡迎春吴德昌; 文献传递

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国家重点基础研究发展计划(G1998051208)