湖北省科技攻关计划(2005A304B09)
- 作品数：16 被引量：48H指数：5
- 相关作者：陶凯雄王国斌蔡明蔡昌学韩高雄更多>>
- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属协和医院黄石市中心医院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向表皮生长因子受体shRNA质粒表达载体的构建和鉴定
- 2006年
- 目的构建靶向表皮生长因子受体(EGFR)的短发卡状RNA(shRNA)质粒表达载体并进行鉴定。方法设计两个小分子干扰RNA(siRNA)序列,体外合成DNA模板引物,与Pgenesil-1质粒构建成编码shRNA的表达载体,进行酶切鉴定和测序,再转染人大肠癌LoVo细胞,进行荧光摄像和G418抗性筛选。结果构建的质粒表达载体完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示为绿色,G418可以筛选出阳性克隆。结论成功构建了编码EGFR-shRNA的质粒表达载体,并可以进行稳定筛选。
- 邬跃刚曹政吴相柏魏亚元霍磊陶凯雄
- 关键词：表皮生长因子受体小分子干扰RNA短发卡状RNA质粒载体
- Livin靶向siRNA对结肠癌细胞的抑制作用被引量：2
- 2009年
- 目的构建Livin靶向si RNA重组表达载体,研究其对人结肠癌细胞生长的抑制作用。方法构建Livin靶向si RNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测Livin的表达。结果经酶切鉴定和测序结果证实Livin靶向si RNA重组表达载体构建成功,它对结肠癌细胞Livin mRNA和蛋白的表达抑制率分别为30.18%和28.88%。结论Livin靶向si RNA重组表达载体构建成功并能显著抑制Livin基因的表达。
- 蔡明王国斌陶凯雄蔡昌学
- 关键词：LIVIN基因RNA干扰基因治疗
- 妇产科患者多药耐药菌感染的临床研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨妇产科患者多药耐药菌感染的病原菌分布及感染相关因素等,便于加强监测和预防,减少甚至避免多药耐药菌感染的发生。方法将2009年10月-2013年10月妇产科58例发生多药耐药菌感染患者作为研究对象,采集标本进行细菌培养及药敏试验,对病原菌与患者年龄、住院时间、抗菌药物种类及使用时间、侵入性操作等感染相关因素进行统计分析。结果感染部位主要为呼吸道、泌尿道感染及手术切口感染为主,分别占46.55%、22.41%及18.97%;多药耐药菌感染患者共检出病原菌62株,主要为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,分别占40.32%、16.13%、11.29%、14.52%。结论抗菌药物联合使用和长期使用是引起多药耐药菌感染的主要因素,加强多药耐药菌感染的管理与控制、严格无菌操作、合理使用抗菌药物预防是控制多药耐药菌感染的有效手段。
- 杨欣慰崔华英陈贤梅
- 关键词：多药耐药菌妇产科易感因素病原菌
- Livin和Survivin基因联合靶向siRNA重组表达载体的构建和鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的构建Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体,探讨用RNA干扰方法同时下调Livin和Survivin基因表达的增效作用。方法通过前期的实验,分别从靶向Livin基因和Survivin基因的siRNA序列中各挑选出1对最有效的siRNA序列,然后采用1个载体编码2个shRNA技术,将其构建到同一个真核表达载体上,转化DH5α菌株,提取质粒进行酶切鉴定和测序分析。结果经酶切鉴定和测序分析证实Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功。结论Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功。
- 韩高雄蔡明王国斌陶凯雄蔡昌学
- 关键词：LIVINSURVIVINRNA干扰基因治疗
- RNA干扰靶向抑制表皮生长因子受体表达对大肠癌细胞增殖的影响被引量：5
- 2006年
- 目的观察RNA干扰(RNAi)技术能否有效抑制大肠癌LoVo细胞株表皮生长因子受体(EGFR)的表达以及对细胞增殖的影响。方法构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2；脂质体瞬时转染后24、48、72、96、144 h实时荧光定量PCR(Real Time PCR)和Western blot检测EGFR表达,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,并绘制细胞生长曲线；分5组：A组：LoVo细胞组；B组：Lipofectamine2000组；C组：对照载体HK组；D组：pU6-EGFR-shRNA-1组；E组：pU6-EGFR-shRNA-2组。结果D组E组细胞转染shRNA后mRNA和蛋白表达降低,G_0～G_1期细胞增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加,对数生长期延迟,以48 h效果最显著,和A组B组C组比较差异有统计学意义(P＜0．05)；但随着时间的推移其干扰作用降低。结论两条EGFR-shRNA均可有效抑制大肠癌LoVo细胞EGFR表达,阻滞更多的细胞位于G_0～G_1期,促进细胞凋亡而抑制细胞增殖。
- 陶凯雄吴相柏王国斌陈道达张宁李新明
- 关键词：RNA干扰表皮生长因子受体大肠癌脱噬作用
- Livin靶向siRNA对大肠癌细胞凋亡的诱导作用被引量：10
- 2010年
- 目的:构建Livin靶向小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,观察其诱导大肠癌细胞的凋亡效应。方法:构建Livin靶向siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测Livin的表达,MTT法检测siRNA对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞的凋亡效应。结果:经酶切鉴定和测序结果证实,Livin靶向siRNA重组表达载体构建成功,它对大肠癌细胞LivinmRNA和蛋白的表达抑制率分别为30.18%和28.88%,P<0.05,肿瘤细胞的生长受到明显抑制,细胞凋亡率为(13.36±1.45)%,P<0.05。结论:Livin靶向siR-NA重组表达载体构建成功,能有效抑制Livin基因表达并能显著诱导肿瘤细胞凋亡。
- 蔡明王国斌陶凯雄韩高雄蔡昌学
- 关键词：结直肠肿瘤LIVINRNA干扰基因治疗
- RNA干扰技术及应用
- 2007年
- 蔡明王国斌陶凯雄蔡昌学
- 关键词：RNA干扰技术RNAI基因转录RNA降解胚胎干细胞基因组学
- survivin靶向SiRNA协同5-FU对结直肠癌细胞的化疗增敏作用被引量：7
- 2009年
- 目的探讨survivin靶向SiRNA重组表达载体对人结直肠癌细胞生长的抑制作用和对5-氟尿嘧啶(5-FU)的化疗增敏作用。方法构建survivin靶向SiRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,通过RT-PCR和westernblot方法检测survivin的表达;采用MTT法和流式细胞仪检测SiRNA对不同浓度5-FU的化疗增敏作用。结果经酶切鉴定和测序结果证实survivin靶向SiRNA重组表达载体构建成功;其对结直肠癌细胞survivinmRNA和蛋白的表达抑制率分别为36.33%和44.65%,可以协同增强5-FU对结直肠癌细胞生长的抑制作用。结论survivin靶向SiRNA重组表达载体能有效抑制survivin基因表达,并能协同增强5-FU对结直肠癌细胞的杀伤作用和诱导凋亡作用。
- 蔡明王国斌陶凯雄蔡昌学
- 关键词：结直肠肿瘤SURVIVIN化疗
- 双位点小干扰RNA靶向抑制表皮生长因子受体促大肠癌细胞凋亡和5-氟尿嘧啶化疗增效的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察针对单位点与双位点的RNA干扰技术抑制大肠癌LoVo细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达,诱导细胞凋亡以及对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的差异。方法构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2,脂质体转染人大肠癌LoVo细胞,G418筛选4周,分5组:1组为LoVo细胞,2组为对照质粒载体HK,3组为pU6-EGFR-shRNA-1,4组为pU6-EGFR-shRNA-2,5组为pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2各半量。实时荧光定量PCR和Westernblot检测mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,细胞増殖分析试剂CCK-8(CellCountingKit-8)测定5-FU不同浓度和时间对LoVo细胞的抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果正确构建了短发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体,成功转染;3、4、5组mRNA表达分别下降了(80·2±3·4)%、(81·3±2·8)%和(90·6±2·8)%,蛋白表达分别下降了(74·1±4·0)%、(73·4±2·3)%和(90·4±3·3)%,凋亡率增加了(10·4±0·5)%、(10·1±0·4)%和(14·2±0·5)%,同时对5-FU的IC50和细胞抑制率作统计学分析,5组,3、4组和1、2组三者之间比较差异有统计学意义,而1组2组间、3组4组间各项比较差异无统计学意义。结论两条shRNA均可有效抑制LoVo细胞EGFR表达,促进细胞凋亡,提高5-FU对癌细胞的杀伤作用,靶向联合位点的RNA干扰技术较单一位点的干扰效果更显著,为大肠癌的基因治疗联合化疗提供了新的思路。
- 吴相柏陶凯雄王国斌田源张景辉陈道达
- 关键词：肠肿瘤细胞凋亡
- Livin基因和Survivin基因联合靶向siRNA抑制大肠癌细胞增殖的作用被引量：5
- 2009年
- 采用1个载体编码2个shRNA技术,构建Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体,研究其对人大肠癌细胞生长协同抑制的增效作用。构建Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞,通过RT-PCR和Western blotting方法检测Livin基因与Survivin基因的表达,利用流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡效应。经酶切鉴定和测序分析证实Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功,它对大肠癌细胞Livin和Survivin mRNA的抑制率分别为27.90%和32.24%,对Livin和Survivin蛋白表达的抑制率分别为22.28%和40.86%,诱导肿瘤细胞凋亡率为(11.69±1.37)%,但协同干扰作用比单独干扰Livin基因或Survivin基因弱。Livin基因和Survivin基因联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功并能抑制Livin基因和Survivin基因的表达,但协同抑制作用比单独干扰Livin基因或Survivin基因弱。
- 蔡明王国斌陶凯雄蔡昌学
- 关键词：LIVIN基因SURVIVIN基因RNA干扰基因治疗
