国家自然科学基金(30872638)
- 作品数：18 被引量：59H指数：5
- 相关作者：金丹裴国献江汕赵培冉王钊更多>>
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- 神经肽对大鼠骨髓间质干细胞增殖影响的研究被引量：2
- 2010年
- 目的 观察外源性降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）、P物质（substance P，SP）对大鼠骨髓间质千细胞（bonemai Towmesenchymal stemcells，BMSCs）增殖的影响，并探讨其机制。方法使用全骨髓法分离、培养大鼠BMSCs，采用RT—PCR、WesternBlot在传代培养的不同时间（1、2、3周）检测BMSCs神经肽受体mRNA、蛋白的表达情况。在不同时间点（1、3、5、7、9d）使用浓度为1×10^-8。mol／L的CGRP、sP分别作用于BMSCs，使用MTT比色法检测BMSCs增殖能力，WesternBlot法检测BMSCs细胞周期相关调控基因cyclinD1、cyclinE、p53的蛋白表达变化。结果RT—PCR、WesternBlot结果显示BMSCs稳定表达CGRP受体、SP受体，同一时间点的CGRP受体表达高于SP受体表达。M1rr结果显示，与对照组相比，CGRP在9d时促进BMSCs增殖，SP在7、9d时促进BMSCs增殖。WesternBlot结果显示，与对照组相比，CGRP促进BMSCs内cyclinD1、cyclinE蛋白表达，在5d时达到高峰；SP促进BMSCs内cyclinE蛋白表达，在5d时达到高峰；两种神经肽均降低BMSCs内p53蛋白表达。结论CGRP、SP对BMSCs的增殖有直接促进作用，影响细胞周期相关调控基因蛋白的表达是其作用机制之一。
- 王钊金丹文君陀泳华郭小磊
- 关键词：降钙素基因相关肽P物质骨髓祖代细胞细胞周期
- 大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中降钙素基因相关肽受体的表达被引量：3
- 2010年
- [目的]探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化过程中降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)受体的表达变化。[方法]采用全骨髓法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,分为诱导成骨组与未诱导组,在传代培养的不同时期(1、2、3周),采用免疫细胞化学、Western Blot对骨髓间充质干细胞的成骨诱导分化进行鉴定,采用RT-PCR、Western Blot检测各组细胞CGRP受体mRNA、蛋白的表达情况。[结果]RT-PCR结果显示同一时间点诱导组CGRP受体mRNA表达量高于未诱导组,诱导组CGRP受体mRNA表达以时间依赖性的方式不断增高;Western Blot结果显示同一时间点诱导组CGRP受体的蛋白水平高于未诱导组,诱导组CGRP受体蛋白水平以时间依赖性的方式增高。[结论]本实验从mRNA、蛋白水平证实大鼠骨髓间充质干细胞表达CGRP受体,随着成骨诱导的不断进行,CGRP的表达量随之上升。
- 王钊金丹
- 关键词：CGRP骨髓间充质干细胞成骨细胞
- 血管束植入组织工程骨修复兔股骨缺损对血管内皮生长因子表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨血管束植入组织工程骨修复兔股骨缺损对局部血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将兔自体骨髓基质干细胞经诱导后与β-磷酸三钙材料复合，植入制备的兔股骨缺损处，其中实验组在材料侧槽中植入股骨的动静脉血管束，对照组则单纯植入组织工程骨，分别于术后2、4、8、12周通过形态学检测新生骨量，免疫组织化学方法检测新生骨中VEGF的表达量。结果随着时间进展，各组成骨量逐渐增加，差异有统计学意义（P〈0．05），并且从第4周开始实验组成骨量高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；各时间点实验组新生骨中VEGF的表达量均高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），且4周时达到最大值。结论血管束植入组织工程骨可明显增加新生骨中VEGF的表达并能促进骨缺损的修复。
- 王簕覃俊君陈思园穆天旺江汕赵培冉金丹裴国献
- 关键词：血管化骨缺损血管内皮生长因子
- 锁定钢板治疗锁骨远端Neer Ⅱb型骨折的疗效分析被引量：10
- 2015年
- [目的]探讨锁骨远端锁定加压钢板内固定方法治疗NeerⅡb型锁骨远端骨折的临床疗效。[方法]回顾性分析2012年3月~2013年8月采用锁骨远端前外侧lateral compression plate（LCP）治疗15例NeerⅡb型锁骨远端骨折的资料,男9例,女6例;年龄22~64岁,平均42.1岁;左侧5例,右侧10例。采用锁骨上方横行切口,复位骨折后使用锁定钢板内固定,对于钢板固定后肩锁关节仍不稳定的,采用喙突置入带线锚钉修复喙锁韧带。术后定期摄X线片,采用Constant、SF-36评分系统分别对术后肩关节功能及全身功能进行评定。[结果]15例锁骨远端骨折患者均获随访,随访时间14~26个月,平均20.5个月。X线片显示锁骨骨折均在4~6个月内愈合,平均骨折愈合时间4.5个月。Constant肩关节功能评分,优11例,良4例,优良率100%。与健侧肩关节的功能评分接近。SF-36评分为85.5~100分,平均94.6分。末次随访时,无1例发生钢板断裂、钢板周围骨折和肩袖损伤等并发症。[结论]切开复位锁骨远端锁定加压钢板内固定方法治疗NeerⅡb型锁骨远端骨折能取得良好的临床疗效,具有肩关节功能恢复好、并发症少等优点,是治疗锁骨远端骨折较好的内固定方法。
- 邹振吕付苏梅刚吴建群刘松金丹
- 关键词：锁骨远端骨折骨折内固定
- 降钙素基因相关肽促进大鼠BMSCs迁移及VEGF的表达被引量：11
- 2011年
- 目的观察外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在大鼠BMSCs迁移中的作用及对VEGF、血管黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)表达的影响,探讨CGRP通过BMSCs促进血管生成的作用机制。方法全骨髓法分离、培养SD大鼠BMSCs,采用Western blot法于传代培养1、2、3周时检测BMSCs中CGRP受体(CGRP receptor,CGRPR)蛋白的表达。使用浓度为1×10-8 mol/L的CGRP作用于BMSCs作为实验组,单纯BMSCs作为对照组,在培养72 h时采用细胞趋化实验检测CGRP对BMSCs迁移的影响;在培养1、3、5、7 d采用实时荧光定量PCR检测CGRP作用后VCAM-1 mRNA的表达变化,采用免疫细胞化学染色、Western blot法检测CGRP作用后VEGF的表达变化。结果 Western blot检测示BMSCs稳定表达CGRPR,2周时表达最高。细胞趋化实验显示,实验组CGRP刺激后穿膜迁移细胞数(3.20±1.77)个/HP,较对照组(1.11±0.49)个/HP明显增多(t=4.230,P=0.001)。实时荧光定量PCR检测示,实验组VCAM-1 mRNA表达随时间延长逐渐增加,7 d时最高;实验组3、5、7 d的VCAM-1 mRNA表达量与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学染色示,培养1、3 d两组均无阳性染色;培养5、7 d实验组VEGF染色呈阳性,对照组无阳性染色。Western blot检测示,培养1、3 d两组均未检测到VEGF蛋白表达;培养5、7 d实验组VEGF蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05);实验组5 d的VEGF蛋白表达量明显高于7 d(P<0.05)。结论 CGRP能促进BMSCs迁移及VEGF表达,这可能是CGRP调节骨内部血流变化而影响骨代谢的机制之一。
- 王钊金丹陀泳华郭小磊文军周健夏立恒张永涛
- 关键词：降钙素基因相关肽BMSCS细胞迁移VEGF
- 血管束、感觉神经束植入组织工程骨降钙素基因相关肽和受体的时空分布被引量：6
- 2009年
- 目的探讨单纯血管束、感觉神经束分别植入组织工程骨修复兔骨缺损对降钙素基因相关肽（CGRP）及受体（CGRPR-1）表达的影响。方法54只新西兰兔按随机数字表法分为三组（n=18）：感觉神经束植入组（A组）、血管束植入组（B组）、单纯组织工程骨对照组（C组），于术后4、8、12周分别处死18只动物，对修复骨段行Masson染色观察骨形成与改建过程，同时行免疫组化染色检测修复骨段内CGRP及CGRPR-1的表达，并提取总RNA行Real—timePCR检测CGRP及CGRPR-1的表达情况。结果各时间点A组和B组CGRP、CGRPR-1mRNA的表达均高于C组，且A组表达高于B组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；随时间延长，组织工程骨内CGRP及CGRPR-1mRNA呈先增高后逐渐降低趋势，8周时mRNA高于4周和12周，4周时mRNA在3个检测时间点中最低，差异均有统计学意义（P〈0．05）；组织工程骨内新生骨质边缘、骨膜、血管周围均有CGRP阳性表达，分布均匀；CGRPR-1于成骨细胞周围表达较多。结论植入感觉神经束和血管束均能促进神经肽分泌，植入血管束分泌更多。
- 覃俊君王簕陈思圆穆天旺李明东金丹江汕赵培冉裴国献
- 关键词：受体降钙素基因相关肽
- 大鼠雪旺细胞对两种来源的成骨细胞增殖分化影响的研究被引量：5
- 2010年
- 目的 研究应用雪旺细胞（SCs）对两种来源的成骨细胞（OB）的增殖与分化的影响,为构建神经化组织工程骨提供体外实验理论依据.方法 通过采用股骨、胫骨髓腔冲洗法获得SD大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）,采用胰蛋白酶消化新生鼠颅骨获得OB及采用消化后组织块法获得SCs.将BMSCs在成骨诱导液作用3周,鉴定BMSCs向OB分化.采用96孔共培养板将第2代SCs种植于上室,颅骨来源OB种植下室,共培养为实验组,无SCs干预共培养为对照组.将诱导分化的OB种植于下室,第2代SCs种植于上室,共培养为实验组,无SCs干预共培养为对照组,分别于共培养后1、3、5、7、9d采用甲基噻唑基四唑（MTT）进行增殖比较.采用6孔共培养板,实验组上室种植SCs,下室分别种植颅骨来源及BMSCs来源的OB,不加SCs的两种来源的OB作为对照组,分别共培养后于3、7 d检测两种来源OB的碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥蛋白、骨形态发生蛋白-2 mRNA表达.结果 SCs对颅骨来源的OB在共培养3、5、7、9 d 4个时间点均有明显促增殖作用,在碱性磷酸酶、骨桥蛋白、骨形态发生蛋白-2mRNA在各个时间段均起到抑制作用.SCs对大鼠BMSCs来源的OB在共培养1、3 d无明显促增殖作用,在5、7、9 d有明显促增殖作用,在成骨培养基的环境里,SCs可促进BMSCs诱导的OB分化.结论 选择BMSCs来源的OB 与 SCs共培养更适合用于构建神经化组织工程骨.
- 姜晓锐张鑫鑫肖剑晖金丹江汕王丹赵培冉裴国献
- 关键词：骨髓细胞成骨细胞雪旺细胞分化共培养
- Qtracker体外标记兔成骨诱导分化后细胞的初步研究
- 2010年
- 目的探讨Qtracker体外标记兔成骨诱导分化后细胞的特点及可行性。方法抽取3个月龄健康新西兰大白兔骨髓，贴壁培养骨髓基质干细胞（BMSCs），传至第3代后向成骨细胞诱导，并做鉴定。Qtracker分别以1、2、4、8、16和32nmol／10‘细胞的浓度标记成骨诱导分化后细胞，分别记为A、B、C、D、E、F组；未标记的细胞作为空白对照组（G组）。分别利用荧光显微镜计数和流式细胞术两种方法检测标记阳性率，台盼蓝拒染法检测标记后细胞存活率，甲基噻唑基四唑（MTr）法观察Qtracker染料对细胞增殖的影响。结果兔BMSCs经诱导后能向成骨细胞诱导分化。经Qtracker标记后，荧光显微镜下胞浆呈绿色荧光。随着标记浓度的增加，A、B、C、D、E、F组细胞标记阳性率逐渐增高，于8nmol／10。细胞的浓度标记时，在荧光显微镜下计数，标记率可达到（93．58±2．08）％；通过流式细胞仪检测，其标记率为（95．24±1．31）％，经两种方法测定，D、E、F组间标记率差异均无统计学意义（P〉0．05），且与其他各组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；G组各时间点标记阳性率均为0。以不同浓度标记后各组细胞存活率均在96％以上，且各组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。标记Qtracker后对细胞的增殖无影响（P〉0．05）。结论Qtracker可用于兔成骨诱导分化后细胞的体外标记，在浓度为8nmol／10^5细胞下可得到最佳的标记率，且其对成骨诱导分化后细胞的增殖无明显影响。
- 杨科跃范欣欣金丹江汕姜晓锐吴涛张晓强裴国献
- 关键词：骨髓细胞成骨细胞生物学标记
- 骨骼肌收缩对骨毛细血管通透性影响的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的采用骨室种植体体内检测技术探讨骨周围骨骼肌收缩对骨毛细血管通透性的影响。方法30只雌性健康新西兰大白兔(6～10月,3～3.5kg)随机分为两组,每组15只,所有动物均于右侧胫骨植入骨室种植体。实验组于术后第2周开始行经皮神经肌肉电刺激,刺激腓肠肌收缩,频率4Hz,1h/d,每周6日;对照组无刺激。术后3周起,每周通过骨室种植体行体内显微观察至第10周,光镜下通过荧光染料FITC和RITC观察血管生长情况,运用Metamorph图像分析软件进行分析。结果实验组由经皮神经肌肉电刺激引起腓肠肌收缩,随着腓肠肌收缩时间延长,实验组毛细血管通透性显著大于对照组。结论应用骨室种植体体内检测技术能够较好在体检测骨内毛细血管通透性,骨骼肌收缩能提高骨毛细血管通透性。
- 张宇金丹王立超秦煜
- 关键词：骨骼肌毛细血管通透性
- 血管化组织工程骨修复兔股骨干骨缺损被引量：3
- 2010年
- 目的 观察血管化组织工程骨修复兔股骨干骨缺损的成骨特点,初步探讨其修复骨缺损的机制.方法 32只新西兰大白兔均制备左侧股骨干15 mm段性骨缺损模型,随机分为两组,实验组：兔自体骨髓基质干细胞复合β-磷酸三钙（β-TCP）构建组织工程骨同时联合血管柬植入骨缺损;对照组：单纯植入组织工程骨.于术后2、4、8、12周行组织学观察骨形成与改建情况,同时行免疫组织化学,荧光定量聚合酶链反应,免疫印迹检测修复骨段内血管内皮生长因子（VEGF）的表达.结果 组织学观察显示随着时间发展,两组成骨量均逐渐增加,从4周起实验组骨修复优于对照组;实验组各时间点组织工程骨中VEGF的表达量高于对照组,随着时间延长,VEGF呈先增高后降低趋势,在4周时表达量最大.结论 血管化组织工程骨可有效促进兔股骨缺损的修复,植入血管束能促进VEGF的表达,VEGF是促进骨再生和血管再生的重要因子.
- 王簕裴国献高梁斌江汕穆天旺陈思园覃俊君金丹娄爱菊赵培冉
- 关键词：生物医学工程骨缺损
