国家自然科学基金(30972910)
- 作品数：9 被引量：20H指数：2
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- Girdin对胰腺癌细胞Aspc-1迁移及侵袭能力的影响被引量：1
- 2018年
- 我们通过腺病毒干扰Girdin表达,观察Girdin对胰腺癌细胞Aspc-1侵袭和迁移的影响.
一、材料与方法 1.材料：人胰腺癌细胞株Aspc-1购自上海博谷生物科技有限公司;抗体购自美国Abcam公司;Tirzol购自美国Invitrogen 公司;反转录试剂盒购自日本TaKaRa公司;SYBR Green购自德国Roche公司;基质胶购自美国BD公司. 2.方法：利用Girdin干扰腺病毒转染Aspc-1细胞,应用Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测Girdin基因的蛋白和mRNA的表达水平,划痕实验检测细胞迁移,Transwell实验检测细胞侵袭能力.
- 王盛蔡则灵吴凯王武林陈浩雷亿群喻春钊
- 关键词：人胰腺癌细胞株ASPC-1细胞侵袭能力反转录聚合酶链反应TRANSWELL
- 经内镜肠道植管术的配合及护理被引量：2
- 2015年
- ＂粪菌移植＂（fecal microbiota transplantation,FMT）是重建肠道菌群的有效手段,已被用于难辨梭状芽胞杆菌感染、炎症性肠病、慢性便秘等疾病的治疗。主要的移植途径包括经中消化道胃镜输入、结肠镜途径和灌肠[1~4]。我们主要将FMT用于难治性肠病的挽救治疗。
- 陈红英施春霞吴婷婷吴红艳彭炤源崔伯塔张发明喻春钊
- 关键词：植管ENTERAL慢性便秘FECAL美沙拉嗪
- Polo-like kinase 1短发卡RNA重组腺病毒载体构建及其生物学应用
- 2016年
- 目的构建针对人类Polo-like kinase1（Plk1）基因的短发卡RNA（shRNA）真核表达载体，并进行腺病毒包被。方法设计并合成含有小发夹结构的Plk1 shRNA对应模板序列，退火并与pYr-1．1载体重组质粒；通过LR体外同源重组将pYr-1．1-Plk1—shRNA表达框构建至pAd—DEST腺病毒表达载体上；包装重组腺病毒；感染人类胰腺癌细胞BxPC-3验证干扰效率。实验分3组：对照组（Control）、空载组[rAd-增强绿色荧光蛋白（tAd—EGFP）]、实验组（rAd—shPlk1），实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot检测Plk1基因的表达，流式细胞术检测细胞周期的变化及对细胞凋亡的影响。结果腺病毒感染BxPC-3细胞后，RT-qPCR检测Plk1 mRNA表达量：对照组1．047±0．315、空载组1．121±0．199、实验组0．119±0．050；Western blot检测Plk1蛋白表达量：对照组0．760±0．088、空载组0．743±0．101、实验组0．050±0．043，实验组较对照组及空载组Plk1 mRNA和蛋白水平均明显降低（P〈0．01）。流式细胞术检测G2期细胞比例：对照组6．077±0．056、空载组6．533±1．644、实验组33．427±7．774，实验组G：期细胞数比例显著高于空载组和对照组（P〈0．01）。感染24h后实验组的细胞凋亡率明显高于空载组和对照组（P〈0．01）。结论成功构建包被有Plk1 shRNA的腺病毒表达载体，且重组腺病毒载体可以抑制Plk1基因的表达，引起细胞周期G2／M期停滞和促进细胞凋亡。
- 李泉毛永欢余翔蔡则灵王伟林喻春钊
- 关键词：KINASE短发卡RNA重组腺病毒胰腺癌RNA干扰
- Polo样激酶1对胰腺癌细胞株PANC-1凋亡、侵袭和迁移的影响被引量：2
- 2016年
- 目的 观察Polo样激酶1（Plk1）基因对胰腺癌细胞株PANC-1凋亡、侵袭和迁移的影响.方法 实验分3组：对照组（Control）、空载组[rAd-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）]、实验组[rAd-短发卡RNA（shRNA）].RNA干扰（RNAi）技术靶向沉默Plk1基因,构建人类Plk1-shRNA,通过腺病毒感染的方式导入体外培养的PANC-1细胞.实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot法检测Plk1在mRNA和蛋白水平的变化;流式细胞仪检测PANC-1细胞的凋亡变化;Transwell方法检测PANC-1细胞侵袭和迁移能力的改变.结果 RT-qPCR结果显示Plk1 mRNA水平表达量：对照组：1.011±0.153;空载组：0.943±0.052;实验组：0.256±0.008;Western blot结果显示Plk1蛋白水平表达量：对照组：0.920±0.029;空载组：0.883±0.029;实验组：0.013±0.005.实验组Plk1的表达量在mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和空载组,差异有统计学意义（P＜0.01）.流式细胞术检测结果显示：下调Plk1,PANC-1细胞24 h后凋亡较其他两组明显增加（P＜0.01）;Transwell实验结果显示：侵袭能力,对照组：0.127±0.021;空载组：0.121±0.016;实验组：0.046±0.010;迁移能力,对照组：0.440±0.037;空载组：0.417±0.034;实验组：0.112±0.012;实验组细胞的侵袭和迁移能力较对照组和空载组明显下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 Plk1的表达与胰腺癌的凋亡、侵袭和转移密切相关,且采用RNAi技术靶向沉默Plk1基因可以促进胰腺癌细胞的凋亡,抑制其侵袭和迁移.
- 毛永欢李泉蔡则灵余翔喻春钊
- 关键词：POLO样激酶1胰腺癌脱噬作用
- 过表达核心蛋白聚糖基因对胆管癌细胞迁移及侵袭的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 观察过表达核心蛋白聚糖（DCN）基因对胆管癌细胞迁移及侵袭功能的影响.方法 脂质体介导真核表达质粒pEGFP-DCN和空载体pEGFP-N1转入人胆管癌细胞株QBC939,Western blot检测DCN蛋白以及E-钙黏蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测DCNmRNA以及E-钙黏蛋白mRNA的表达,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力.结果 RT-PCR结果显示过表达DCN较pEGFP-N1上调32.34倍;Western blot结果显示过表达组DCN上调2倍.Transwell结果显示转染pEGFP-DCN的胆管癌细胞迁徙和侵袭能力较转染pEGFP-N1分别降低约56.9％和40.2％;转染pEGFP-DCN与pEGFP-N1胆管癌细胞中E-钙黏蛋白的表达水平,结果可见较转染pEGFP-N1体组胆管癌细胞比较,转染pEGFP-DCN组E-钙黏蛋白的表达水平明显升高.结论 DCN过表达可抑制QBC939细胞的迁移与侵袭能力,可能与升高E-钙黏蛋白表达相关.
- 王伟林余翔李泉毛永欢沈佳佳骆霞岗喻春钊
- 关键词：胆管癌核心蛋白聚糖迁移
- 核心蛋白聚糖在胆管癌中的表达及其临床意义被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨胆管癌组织中核心蛋白聚糖表达的临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测44例胆管癌和40例正常胆管组织核心蛋白聚糖的表达,并分析核心蛋白聚糖的表达水平与胆管癌患者的性别、年龄、肿瘤细胞的分化程度和淋巴结转移的关系.结果 胆管癌组织核心蛋白聚糖表达明显下调,而在正常癌旁组织高水平表达.44例胆管癌患者胆管癌组织核心蛋白聚糖阳性18例（阳性率为40.91％）,而40例正常癌旁癌组织核心蛋白聚糖表达均呈阳性（阳性率为100.00％,P＜0.01）.高、中分化组肿瘤核心蛋白聚糖表达显著高于低分化组肿瘤（62.5％比15.0％,P＜0.01）.无淋巴结转移者中核心蛋白聚糖的表达（57.14％）明显高于已有区域淋巴结转移者（26.09％,P＜0.05）.核心蛋白聚糖的表达水平与胆管癌患者的性别、年龄、肿瘤的大小无明显相关.结论 核心蛋白聚糖在胆管癌组织中的表达具有一定肿瘤特异性.
- 余翔李泉毛永欢王伟林沈佳佳骆霞岗喻春钊
- 关键词：胆管癌核心蛋白聚糖
- 吉西他滨对胰腺癌细胞增殖、凋亡及保罗样激酶-1表达的影响被引量：5
- 2014年
- 目的 观察吉西他滨对胰腺癌细胞增殖、凋亡及保罗样激酶-1（PLK-1）表达的影响.方法 采用不同浓度的吉西他滨处理胰腺癌AsPC-1细胞,在电镜下观察细胞的形态,噻唑蓝（MTT）法测定细胞生长抑制情况;不同浓度（2、5 μmol/L）的吉西他滨处理细胞12、24、48、72 h后,流式细胞分析法检测细胞凋亡,以半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测PLK-1 mRNA及PLK-1蛋白的表达.结果 MTT结果示随吉西他滨浓度增加,细胞增殖率明显下降（P＜0.05）;流式细胞分析法检测凋亡结果示：处理组凋亡率较空白对照组明显增加（P＜0.05）;RT-PCR和Western blot检测PLK-1 mRNA及PLK-1蛋白的表达结果显示,不同时间点PLK-1 mRNA相对表达量分别为：对照组0.70 ±0.15、0.65 ±0.27、0.72 ±0.13、0.68±0.30;2 μmnol/L组：0.88 ±0.58、0.95±0.53、2.36±0.57、3.53 ±0.89;5 μmol/L组：0.89 ±0.60、1.02±0.32、3.95±1.84、4.52 ±2.25及PLK-1蛋白的表达水平分别为：对照组：0.82 ±0.41、0.78 ±0.46、1.01 ±0.05、0.88±0.25;2 μmol/L组：0.89±0.28、1.61 ±0.88、1.66 ±0.18、3.28±1.33;5μ.mol/L组：0.85±0.36、1.89±0.18、2.73±0.78、4.32±2.13,也相应升高（P＜0.05）.结论 吉西他滨能诱导AsPC-1细胞凋亡,其机制可能与细胞内的PLK-1水平改变有关.PLK-1基因表达水平与胰腺癌化疗药物敏感性密切相关.
- 余翔王兴伟李泉毛永欢骆霞岗竺慧沈佳佳王伟林喻春钊
- 关键词：胰腺癌吉西他滨脱噬作用
- β-catenin和Wnt-1在食管癌组织中的表达及其临床意义的研究被引量：5
- 2013年
- 目的研究β-catenin和Wnt-1在食管癌组织中的蛋白表达水平及其与肿瘤病理参数和预后的关系。方法 2012全年选取江苏省人民医院病理科保存的40例手术切除食管癌蜡块标本和10例癌旁组织,将其分为实验组和对照组,应用免疫组化方法检测其β-catenin和Wnt-1的蛋白表达水平,采用JD-801病理图像分析系统,利用计算机技术对病灶影像定量分析其光密度参数、灰度分布。使用Stata 9.0(USA)软件包,参考值选用10例癌旁组织的蛋白表达水平,将肿瘤组织中的表达水平与参考值进行比较,分为高表达组和低表达组,分析两组生存率是否存在差别采用Kaplan-meier法。结果 Wnt-1的表达与食管癌预后的关系:高表达组生存率比低表达组高,差异有统计学意义(P=0.0177)。β-catenin的表达与食管癌预后的关系:高表达组生存率比低表达组高,但差异无统计学意义(P=0.1010)。结论 Wnt-1和β-catenin作为Wnt信号通路的相关蛋白,与食管癌发展、侵袭和预后等方面有密切关系。
- 王丹喻春钊
- 关键词：食管癌免疫组化Β-CATENINWNT-1
- 过表达核心蛋白聚糖基因对胆管癌细胞周期及凋亡的影响被引量：2
- 2015年
- 目的 观察过表达核心蛋白聚糖（DCN）基因对胆管癌细胞周期及凋亡的影响.方法 脂质体介导真核表达质粒pEGFP-DCN和空载体pEGFP-N1转入人胆管癌细胞株QBC939,Westernblot检测DCN蛋白的表达,实时定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测DCN mRNA的表达,克隆形成实验计算克隆形成率,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果 RT-qPCR示过表达DCN相对空载体上调32.34倍;Western blot结果示过表达组DCN上调2.00倍.pEGFP-DCN转染组细胞克隆形成数[（210.9±19.3）个]显著低于空质粒转染组[（608.7±56.3）个],差异有统计学意义（P＜0.05）.转染pEGFP-DCN细胞与空载体比较,细胞增殖能力显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.流式细胞周期检测显示,胆管癌细胞转染pEGFP-DCN后G1～ Go期细胞比例明显升高,而G2～S期细胞减少,细胞周期被阻滞在G1～Go期,凋亡分析转染pEGFP-DCN的QBC939细胞较转染空载体细胞凋亡显著增加,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3明显增高,而B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）的表达水平明显降低（0.787±0.068比1.276±0.157）.结论 转染DCN能够显著抑制胆管癌细胞的增殖,明显促进胆管癌细胞凋亡,而DCN促进胆管细胞凋亡与上调Caspase-3和下调bcl-2蛋白相关.
- 王伟林余翔李泉毛永欢沈佳佳骆霞岗闻浩喻春钊
- 关键词：胆管癌核心蛋白聚糖细胞周期脱噬作用
