国家自然科学基金(30972941)
- 作品数：6 被引量：14H指数：3
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- 相关机构：苏州大学附属第二医院海宁市人民医院南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
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- 3-甲基腺嘌呤对大鼠内皮祖细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响被引量：4
- 2011年
- 目的观察3-甲基腺嘌呤（3-methlyadenine，3-MA）对大鼠骨髓源性内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法密度梯度法取夫鼠骨髓EPCs，体外诱导分化并鉴定。实验分对照及不同浓度（1．25、2．5、5、10mmol／L）3-MA绀。四氮唑龄（methyl thiazolyl tetrazolium，M．rr）法测细胞增殖，流式细胞仪测凋亡率及细胞J吉J期。结果（1）5mmol／L组促EPCs增殖；10mmol／L组抑制EPCs增殖，差异有统计学意义（P〈0．05）。其余两组对EPCs增殖无明显影响，差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）10mmol／L组促EPCs凋亡，差异有统计学意义（P〈0．05）。其余各组对EPCs凋亡率无明显影响，与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）5、10mmol／L组影响细胞周期，5mmol／L组G0／G1期细胞减少、S和G2／M期增加；10mmol／L组发生S期阻滞，G，／M细胞减少；差异有统计学意义（P〈0．05）。结论3-MA对EPCs增殖及凋亡的影响与其浓度有关，当浓度为10mmol／L时抑制增殖并促进凋亡。
- 朱人大李晓强孟庆友刘辉雷锋锐张晔青
- 关键词：干细胞细胞增殖细胞周期
- 大鼠骨髓源性内皮祖细胞的分离培养及鉴定被引量：4
- 2013年
- 目的:探讨内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)分离培养鉴定方法及其生物学特性。方法:采用梯密度离心法结合差速贴壁法分离获取大鼠骨髓单核细胞,培养于EGM-2-MV-SingleQuots内皮细胞培养液中,分别取48 h内贴壁细胞(早期EPCs)和48 h后贴壁细胞(晚期EPCs),在倒置显微镜下观察细胞形态,应用流式细胞术鉴定EPCs表面抗原标志CD34,CD133和血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2),激光共聚焦检测EPCs吞噬功能,透射电镜观察EPCs内部超微结构。结果:单核细胞接种后呈小圆形,早期EPCs呈长梭形,晚期以纺锤形为主,培养7 d后有明显干细胞集落;增殖至第6代以后,形态开始逐渐接近于内皮细胞,并出现管腔样结构。内皮祖细胞表面标志CD34,CD133和VEGFR-2均呈阳性表达,能吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白并结合FITC标记的凝集素-1。透射电镜可观察到内皮细胞特征性细胞器Weible-Palade小体。结论:梯密度离心法结合差速贴壁法能够成功地从骨髓中分离、纯化、培养出内皮祖细胞,其增殖能力强,数量充足,生物学特性稳定。
- 陆耀良康涛李晓强韩松
- 关键词：内皮祖细胞骨髓干细胞
- 自噬激活如何影响大鼠内皮祖细胞凋亡、增殖和周期的变化?被引量：4
- 2015年
- 背景:曾有报道雷帕霉素可以对内皮祖细胞的增殖能力、迁移能力、黏附能力产生影响,但是没有提到自噬在其中所起到的不可忽视的作用,以及自噬与凋亡之间的相互关系。目的:通过雷帕霉素激活自噬探讨自噬激活对大鼠内皮祖细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:采用密度梯度离心法从骨髓获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7 d后收集贴壁细胞,即内皮祖细胞。加入不同质量浓度雷帕霉素(0.01,0.1,1,10μg/L)分别培养24 h。Western blot检测LC3-Ⅱ蛋白表达监测自噬的诱导情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期进程的变化,MTT比色法观察其增殖能力的变化,同时在透射电镜下观察其超微结构的变化。结果与结论:雷帕霉素质量浓度为0.01μg/L时,内皮祖细胞的LC3-Ⅱ蛋白表达与对照组相比并没有明显的增高,当质量浓度为0.1μg/L时LC3-Ⅱ蛋白表达处在一个较高的水平,质量浓度为1μg/L和10μg/L时LC3-Ⅱ蛋白表达虽然也高于对照组,但却明显低于0.1μg/L时,据此推断雷帕霉素在质量浓度为0.1μg/L时自噬尤为活跃。内皮祖细胞的凋亡率呈现随着雷帕霉素质量浓度的升高而增加的趋势,增殖率呈现随雷帕霉质量浓度增加而降低的趋势。结果说明雷帕霉素激活自噬后能够促进细胞的凋亡,明显改变细胞的周期进程,抑制内皮祖细胞的增殖。
- 刘辉李晓强朱人大孟庆友卢辉俊
- 关键词：西罗莫司细胞周期雷帕霉素内皮祖细胞国家自然科学基金
- 3-甲基腺嘌呤对EPCs超微结构和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响研究被引量：2
- 2016年
- 目的探索3-甲基腺嘌呤(3-MA)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)超微结构和自噬体膜型(LC3-Ⅱ)蛋白表达的影响。方法采用密度梯度法取大鼠骨髓EPCs,体外诱导分化并鉴定;分成对照组和4个3-MA浓度组(分别加入1.25、2.5、5、10mmol/L 3-MA)。采用单丹(磺)酰戊二胺(MDC)荧光染色和透射电镜观察3-MA给药后EPCs自噬的发生。Western blot检测3-MA给药后EPCs内LC3-Ⅱ蛋白表达的变化。结果 MDC荧光染色和透射电镜均观察到5、10 mmol/L组EPCs超微结构明显区别于正常及死亡细胞,是典型的凋亡形态图。Western blot检测3-MA给药24h后EPCs LC3-Ⅱ蛋白表达降低;与对照组比较,5、10 mmol/L组LC3-Ⅱ蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 5、10mmol/L的3-MA对EPCs超微结构和LC3-Ⅱ蛋白表达均有影响,推测浓度≥5mmol/L的3-MA能抑制EPCs的自噬。
- 朱人大李晓强
- 关键词：内皮祖细胞
- 3-甲基腺嘌呤调控自噬对大鼠内皮祖细胞促进静脉血栓再通的影响
- 2013年
- 目的观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)调控大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)自噬,探讨其对静脉血栓再通的影响。方法密度梯度法取大鼠骨髓EPCs,体外诱导分化并鉴定。建立大鼠静脉血栓模型。实验分为4组:单纯生理盐水组(对照组,A组)、单纯3-MA组(5mmol/L3-MA,B组)、单纯EPCs组(C组)和3-MA联合EPCs组(5mmol/L3-MA作用于EPCs24h,D组),每组各20只大鼠。在血栓形成后的10天经大鼠尾静脉注入各组试剂,再过14天取标本。苏木精-伊红染色(HE)及vWF免疫组化染色观察血栓机化再通情况,并在镜下计数各组毛细血管数目,取其平均值。结果 (1)D组经HE及免疫组化染色观察发现新生血管最多,与其余各组比较差异均有统计学意义(P<0.05);(2)C组分别与A组和B组比较,差异有统计学意义(P<0.05);(3)A组与B组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 5mmol/L3-MA调控自噬后的EPCs经大鼠尾静脉注射可促进大鼠静脉血栓再通,且比单纯注射EPCs效果更好。
- 胡楠李晓强蔡志新尚斌雷锋锐
- 关键词：内皮祖细胞静脉血栓自噬
- 调控内皮祖细胞自噬促进其功能的实验研究
- 2015年
- 目的研究利用自噬促进剂雷帕霉素和抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methlyadenine，3-MA）或渥曼青霉素调控内皮祖细胞（endothelial progenitorcells，EPCs）自噬，观察对其迁移、成血管和分泌能力的影响以及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（microtubule—associated protein 1 light chain3-Ⅱ，LC3-Ⅱ）、溶酶体相关膜蛋白2A（lysosome-associated membrane proteintype2A，LAMP2A）和热休克蛋白70（heat shock protein70，HSC70）的水平变化。方法密度梯度离心法分离sD大鼠的骨髓单个核细胞，EGM-2MV培养基诱导、培养、扩增骨髓源性EPCs。分为四组，即雷帕霉素组，3-MA组，渥曼青霉素组和对照组，分别用10μg／L雷帕霉素，5mmol／L3-MA，50nmol／L渥曼青霉素处理EPCs12h，对照组加入等量培养基。分别用transwell实验及成血管实验检测EPCs迁移和成血管能力，ELISA检测细胞因子水平。Western blotting检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LAMP2A和HSC70水平。结果（1）10μg／L雷帕霉素抑制EPCs的迁移、成血管和分泌功能；而5mmol／L3-MA和50nmol／L渥曼青霉素促进EPCs功能。（2）Western blotting显示，雷帕霉素组EPCsLC3-Ⅱ表达水平高于对照组，而LAMP2A和HSC70表达水平低于对照组：3-MA组和渥曼青霉素组则相反。结论适度抑制EPCs自噬可促进其增殖、迁移、成血管和分泌能力，其分子机制可能为下调自噬相关蛋白LC3—Ⅱ水平。
- 胡楠钱爱民孔令尚李承龙于小滨陈弘杜晓龙李晓强
- 关键词：自噬
